哈特草螺菌食源性感染致脓毒症1例

为探讨实验室常规鉴定手段对哈特草螺菌临床分离株的鉴定能力,分析案例患者血液中哈特草螺菌的感染来源,本文使用自动生化鉴定系统、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometer,MALDI-TOF MS)、16S rRNA基因测序和RNA聚合酶的β亚基(rpoB)基因测序对哈特草螺菌进行鉴定,并对患者多部位标本进行哈特草螺菌检测。结果显示,自动生化鉴定系统将哈特草螺菌错误识别为洋葱伯克霍尔德菌,MALDI-TOF MS和16S rRNA基因测序无法鉴别哈特草螺菌、aquaticum草螺菌或camelliae草螺菌,rpoB基因测序可以准确将其鉴定为哈特草螺菌;除血液外,仅在患者粪便中检出少量哈特草螺菌,血液和粪便来源的哈特草螺菌肠杆菌基因间重复共有序列聚合酶链反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus polymerase chain reaction,ERIC-PCR)结果显示,两者的DNA带型一致,MALDI-TOF MS核心图谱(main spectra projection,MSP)聚类分析显示两者位于同一节点,且distance level<50,其耐药表型亦相同,血液和粪便来源的哈特草螺菌高度同源。本研究展示了自动生化鉴定系统、MALDI-TOF MS、16S rRNA基因测序和rpoB基因测序对哈特草螺菌的鉴定水平,并证实了哈特草螺菌可通过污染食物,经胃肠道感染导致直肠腺癌术后化疗患者发生脓毒症。

潮滩湿地硝化螺菌的代谢潜力和环境适应机制

为了揭示硝化螺菌(Nitrospira)在潮滩湿地中的代谢潜力和环境适应机制,本研究使用宏基因组学拼接与组装的方法,从中国沿岸的5个潮滩湿地构建了14个较高质量的Nitrospira基因组.系统发育分析结果表明,在这些基因组中,3个属于全程氨氧化细菌(complete ammonia oxidizer,Comammox);9个为硝化螺菌世系Ⅱ和Ⅳ;2个属于至今未见报道的世系Ⅲ型.这表明,潮滩湿地富含多样化的硝化螺菌类群.代谢分析表明,潮滩湿地Comammox和典型的Nitrospira含有氰酸酶、脲酶以及参与腈类、酰胺类化合物分解的酶,暗示着它们能够与氨氧化微生物耦合利用有机氮作为能源.此外,Nitrospira有着多重压力抵抗、病毒防御和渗透压调控策略.这些结果深化了对Nitrospira在潮滩湿地的多样性、生态功能潜力和环境适应机制上的认识.

肺腺癌患者血流感染哈特草螺菌的相关研究

本研究旨在分析肿瘤患者血流感染哈特草螺菌的鉴定及药敏特点,同时对相关菌株感染病例进行回顾分析,为临床治疗提供指导依据。将1例肺腺癌患者放疗后留取的血培养阳性标本进行涂片、染色、镜检,同时采用VITEK MS全自动微生物质谱检测系统、VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统和分子测序技术对该分离株进行鉴定分析,并参照其他非发酵革兰氏阴性杆菌药敏实验标准进行药敏试验。结果显示,该分离株为革兰氏阴性杆菌,在血平板上呈乳白色、胶状、凸起、无溶血菌落。VITEK MS质谱仪和分子测序技术将此菌株均鉴定为哈特草螺菌(Herbaspirillum huttiense,H.huttiense),VITEK 2 Compact将其鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。药敏试验结果显示,该菌对氨曲南中介,对亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦钠、头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦和左氧氟沙星等抗菌药物均敏感。本研究报告了哈特草螺菌的生物学特征和病例的诊疗过程,强调了多种诊断技术联合应用在罕见菌鉴定中的重要性。

固氮螺菌(Azosprillum brasilense)NO40在红壤性水稻土上的接种效应

裂区设计田间试验结果表明 ,在 3个供氮水平下接种巴西固氮螺菌 ( Azospirillum brasilense)NO4 0 ,使分蘖期与灌浆期水稻根际及根内的固氮菌数量均比对照明显增加 ,而土体中的固氮菌数量未见明显变化 ;同时 ,接种该菌株可显著提高分蘖期与灌浆期水稻新展开叶的叶绿素含量及水稻株高 。

巴西固氮螺菌Yu62 draTG基因及其下游区域的定位诱变分析

用卡那霉素盒（Ｋｍｒｃａｓｅｔｅ）插入法，对巴西固氮螺菌（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｕｍｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ）Ｙｕ６２的ｄｒａＴＧ基因及其下游区域进行了诱变，并获得相应的突变株。研究表明：ｄｒａＴ变突株的固氮酶活性不再受铵抑制，而ｄｒａＧ突变株在有铵时则丧失固氮酶活性，但当铵耗尽后却不能像野生型菌株那样恢复活性。ｄｒａＴＧ下游区域突变株ＹＺ４（突变位点距ｄｒａＧ约２ｋｂ）在无氮及限铵条件下，其固氮酶活性比野生型菌株的高，但其ｎｉｆＨｌａｃＺ转录融合子的表达并不受影响。

巴西固氮螺菌Yu62的EGFP标记及其在小麦体内的定殖研究

以质粒pEGFP-C1为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因全长序列,将其与原核表达载体pVK-100连接,构建成重组载体pVK-EGFP。利用电转化法将重组载体导入巴西固氮螺菌Yu62中,得到EGFP标记菌株。用EGFP标记菌接种小麦‘小偃107’种子,室内限菌条件下培养10 d后,用荧光显微镜观测标记菌在小麦体内的定殖规律并观察接菌植株的田间生长状况。结果显示,巴西固氮螺菌Yu62能定殖于小麦根毛区、茎组织的细胞间隙等部位,而且接菌小麦‘小偃107’植株在根系发育、株高、分蘖数等方面比对照有较明显的优势。研究表明,巴西固氮螺菌Yu62能够定殖于小麦根茎内,并具有促进植物生长的作用。

高产吲哚乙酸及高泌氨巴西固氮螺菌的筛选与鉴定

目的:从玉米根际和土壤中分离具有高产吲哚乙酸较强的泌氨能力的巴西固氮螺菌。方法:分别通过半固体NFb培养基、CR培养基、LB培养基分离培养固氮菌株,并经过一系列菌落菌体形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列测定等试验对其进行鉴定。结果:经分离纯化获得10株固氮菌,并鉴定均为巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense),其中菌株R7在甘油半固体培养基上能分泌约14mmol/L的氨,在添加了色氨酸的培养基中能够合成58.8μg/ml的吲哚-3-乙酸(IAA)。结论:成功筛选得到一株既高产吲哚乙酸又有较强的泌氨能力的巴西固氮螺菌。

草螺菌Herbaspirillum sp. WT00F的生理生化性质和促生作用研究

草螺菌(Herbaspirillum)WT00F是本实验室分离获得的一株茶树内生细菌.使用微生物学方法,测试了草螺菌WT00F对22种糖醇类、21种有机酸类和13种氨基酸的碳源利用、8种常见抗生素的敏感性、温度、pH、盐浓度的影响以及33种酶的活性.草螺菌WT00F能利用其中16种糖醇类、17种有机酸类和5种氨基酸作碳源,并能利用14种糖醇类物质产酸.在NaCl浓度≤1%或pH 5.0 8.0的条件下,细菌生长良好,适宜的生长温度为34 37℃.在测试的33种酶中,草螺菌WT00F显示11种酶的活性.草螺菌WT00F对8种常见抗生素敏感,仅对≤5μg/mL浓度的壮观霉素表现抗性.同时,对草螺菌WT00F的促生作用进行了研究.虽然它没有固氮酶活性,但草螺菌WT00F浸泡茶树扦插杆可剌激扦插杆生根和扦插苗新芽生长;喷洒修剪茶树枝后,明显促进修剪枝侧芽生长.无论浸泡还是喷洒,接种过草螺菌WT00F的茶树都生长旺盛,未出现任何植物病症.草螺菌WT00F不仅可用于茶树的扦插繁殖而且可应用于茶园茶树的栽培生产以减少肥料使用和提高茶叶产量,不失为一种有潜力的绿色植物促生剂.

纤维载体固定化红螺菌反应器处理发酵废液及其动力学模型

在充填软性纤维材料的玻璃柱式反应器中,利用Rhodopseudomonas polustris Y_6光合细菌(PSB)连续处理发酵废液。建立了该处理系统动力学模型。计算出模型参数:K_(?)=45.56mg/ml,μm=0.224h^(-1)。模型理论曲线与实验值较吻合。研究得出较适合的稀释率D_(opt)为0.129h^(-1),此时COD去除能力最大为1686.0ppm COD/h。本文为纤维载体固定化PSB处理有机废水提供了一些放大操作依据。

巴西固氮螺菌Yu62draTG基因及其下游区域的克隆与核苷酸序列分析

以ＡｚｏｓｐｉｒｉｌｕｍｂｒａｓｉｌｅｎｓｅＳｐ７４．０ｋｂｄｒａＴＧ片段为探针，自Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅＹｕ６２的基因文库中克隆了约８ｋｂ的ｄｒａＴＧ同源片段。通过对该片段的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析发现Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅＹｕ６２的ｄｒａＴＧ基因定位在３０ｋｂＥｃｏＲＩＫｐｎＩ片段上，其上游与ｎｉｆＨ基因相邻。ＤＮＡ序列分析结果表明：该片段含有完整的ｄｒａＴＧ，这两个基因下游还有两个开放阅读框架（ＯＲＦ３和ＯＲＦ４，其中ＯＲＦ４是不完整的），ｄｒａＴＧ及下游的ＯＲＦ３推测以一个操纵元的方式转录；在ｄｒａＧ及ＯＲＦ３的上游区域均发现σ５４依赖型启动子的特征序列（ＤＰＥ及ＵＡＳ），推测它们与ｄｒａＴ共转录外，还有可能单独转录。同源比较的结果表明Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｕｍ的ＤｒａＴＧ是非常保守的，它们在菌株及种间的差异都很小；紧接着ｄｒａＧ的ＯＲＦ３除与Ａ．ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ和Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｕｍｒｕｂｒｕｍ相应位置的ＯＲＦ同源外，还与Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｖｉｎｅｌａｎｄｉ的ＯＲＦ１４同源；

巴西固氮螺菌Yu62 nifA基因克隆、测序及功能分析

用TD PCR法克隆了巴西固氮螺菌 (Azospirillunbrasilense)Yu6 2的nifA基因。序列分析表明它与巴西固氮螺菌Sp7的nifA序列高度同源 (96 5 % ) ,其编码的产物NifA蛋白与Sp7菌株NifA的氨基酸序列同源性为 97 6 %。该基因可以完全互补巴西固氮螺菌Sp7nifA- 突变株的Nif- 表型。研究了NH4+ 和O2 对Yu6 2nifA基因的表达及NifA活性的影响。结果表明 :nifA基因在Yu6 2菌株中是部分组成型表达的 ,氨和氧不能完全阻遏其表达 ,在 5mmol LNH4 Cl与微氧 (0 5 %O2 )条件下表达最高 ;NifA蛋白在 0 4%～ 0 5 %O2 时活性最高 ,氧分压降低和提高都使NifA活性下降 ,1mmol LNH4 Cl足以抑制NifA的活性。

巴西固氮螺菌 Yu62 draTG 基因启动子区域的核苷酸序列及其功能分析

对巴西固氮螺菌ｄｒａＴＧ上游区域进行了全序列分析，结果表明该区域除了编码部分ｎｉｆＨ基因外（ｎｉｆＨ与ｄｒａＴＧ转录方向相反），不编码任何其它已知的基因。但在该区域发现了一些可能的调控序列，它们包括上游激活序列（ＵＡＳ）、下游启动子组份（ＤＰＥ）和富Ａ＋Ｔ区。这说明：ｎｉｆＨ与ｄｒａＴ间的区域可能主要起调控功能而非编码功能；ｄｒａ操纵元（ｏｐｅｒｏｎ）的启动子很可能是ＲｐｏＮ－依赖型。用ｐＡＦ３００做载体，构建了ｄｒａＴ∷ｃａｍ转录融合质粒ｐＡＴ１，并通过检测Ｃｍｒ以检测ｄｒａＴ在大肠杆菌和巴西固氮螺菌中的表达，结果表明ｄｒａＴ在ＬＤ丰富培养基上，好氧条件下，只在巴西固氮螺菌中才表达。这说明，ｄｒａＴ的转录需要某种大肠杆菌中没有的因子，同时也表明ｄｒａＴＧ上游区域有启动子功能。利用启动子探针质粒载体ｐＣＢ１８２，构建了ｄｒａＴ∷ｌａｃＺ转录融合质粒ｐＣＴ１。在大肠杆菌中测定肺炎克氏杆菌ＮｉｆＡ对ｄｒａＴ∷ｌａｃＺ的转录激活作用。结果表明ｎｉｆＡ并不参与ｄｒａＴ的转录调控。

巴西固氮螺菌Yu62在玉米根的定植(英文)

将GFPmut2质粒中的gfp基因 (编码绿色荧光蛋白 )克隆到载体pVK10 0中 ,构建成重组质粒pVK10 0 1。将pVK10 0 1通过电转化方法导入到联合固氮菌巴西固氮螺菌Yu6 2中 ,获得GFP标记的巴西固氮螺菌Yu6 2菌株。用标记菌株接种限菌培养条件下生长的玉米 (农大 3318)幼苗 ,在接种后 8d、12d ,用激光共聚焦扫描显微镜进行观测 ,结果表明巴西固氮螺菌Yu6 2菌株能定植于玉米根部皮层的薄壁细胞间隙。用扫描电镜和超薄切片电镜观察表明 ,大多数细菌主要定植于根表 。

环境条件对磁螺菌生长的影响(英文)

目的了解碳源种类及浓度、氧、还原剂等条件对磁螺菌(Magnetospirillumgryphiswaldense)生长的影响;建立深层培养磁螺菌及磁小体的技术。方法在60ml血清瓶中,将供试菌株在不同种类和浓度的碳源培养基,不同氧浓度等条件下培养,测定OD600nm;在5L自动控制发酵罐(L.E.MarubishiCo.Tokyo,Japan)中,控制pH、温度及转速分别为7.2、30℃、400r/min,通气量为1.0L/min￣1.2L/min,氧浓度为0.5%￣0.7%的条件下,以乙酸钠-苹果酸培养基和乳酸钠培养基深层培养供试菌株,测定OD600nm。用高效液相色谱等分析培养过程中碳氮源变化规律;用电子显微镜观察磁小体的合成。结果碳源的种类及浓度是影响该菌生长和磁小体合成的重要因素之一;在乙酸钠-苹果酸培养基和乳酸钠培养基中深层培养25h的细胞密度分别为0.7和1.7OD600nm。结论乳酸钠培养基是适合于磁螺菌快速生长的最佳培养基。建立了深层培养磁螺菌及磁小体的技术和方法,该方法的建立对于大量获得细菌磁小体而进行应用开发具有重要意义。

巴西固氮螺菌ntrBC基因的克隆与核苷酸序列分析

以EMBL3为载体,构建了巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Yu62的基因文库.以巴西固氮螺菌Yu62中PCR扩增出的450bp DNA 片断作为探针,对该基因文库进行筛选,得到了10个阳性克隆(EA1—EA10),其中含有两种不同类型的克隆,分别以EA4和EA9为代表.对EA4的杂交分析发现目的基因位于2.9kb EcoRI片段上.DNA序列分析结果表明该片段含有完整的ntrC编码区,其编码产物由480个氨基酸组成.分子量为53469;ntrC上游是完整的ntrB编码区,其编码产物由400个氨基酸组成,分子量为43487.对相应的NtrC和NtrB氨基酸序列进行同源性分析,说明巴西固氮螺菌与根瘤菌的亲缘关系较与其它自生固氮菌的更为接近.

肺炎克氏杆菌NifA对巴西固氮螺菌nifH启动子的转录激活作用

用PCR方法克隆了巴西固氮螺菌Yu62nifH的启动子片段,DNA序列分析表明菌株Yu62与标准菌株Sp7之间的DNA序列差异很小。利用启动子探针质粒载体pCB182,构建了3个不同的nifH::lacZ转录融合质粒,在大肠杆菌中分别测定肺炎克氏杆菌NifA对它们的转录激活作用。结果表明巴西固氮螺菌nifH启动子的转录是依赖于NifA的,缺失了上游激活序列的启动子不能被NifA激活转录,肺炎克氏杆菌NifA对其自身nifH及巴西固氮螺菌nifH启动子的转录激活作用并无很大差异。

巴西固氮螺菌中P_Ⅱ和P_Z在固氮调节中的不同作用

在巴西固氮螺菌 (Azospirillumbrasilense)中 ,glnB和glnZ是两个高度同源基因 ,分别位于 3 7kb EcoRI+PstI和 3 7kb SalI的两个不同的染色体片段上。用卡那霉素盒 (Kmr cas sette)插入法 ,对glnB和glnZ分别进行定位诱变 ,并获得相应的突变株 ,即glnB- 和glnZ- 。研究表明 ,glnB- 突变株丧失固氮酶活性 ,表现为Nif- ,而glnZ- 象野生型菌株一样具有固氮酶活性。为了进一步研究这两个基因的功能 ,将glnB和glnZ分别构建在pVK1 0 0载体上形成重组质粒pVK -Ⅱ和pVK -Z ,对glnB- 和glnZ- 突变株进行互补实验 ,进一步证明了glnB与固氮酶活有直接相关性 ,而glnZ无此作用。同时 ,通过三亲接合法将pVK -Ⅱ和pVK -Z分别转移到巴西固氮螺菌野生型Yu62和具有一定抗铵能力的draT- 突变株中 ,使glnB和glnZ的拷贝数增加 ,进一步比较它们的固氮酶活性。结果表明多拷贝的glnB基因 ,能显著提高固氮酶活性 ,而多拷贝的glnZ对固氮酶活性无影响。同时 ,将pVK Ⅱ和pVK -Z分别转移到nifA- 突变株中 ,结果表明glnB和glnZ均不能恢复nifA-

固氮螺菌的固氮分子调控研究进展

本文对巴西固氮螺菌固氮基因的结构和调控进行综述。其固氮基因的调控可分为两种水平：通过ＤＲＡＴＤＲＡＧ系统的翻译后水平和通过ＮｉｆＡ蛋白的转录水平。

固氮螺菌与植物的相互关系研究进展

固氮螺菌与植物的相互关系研究进展阎大来，何路红，李季伦（北京农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京１０００９４）固氮螺菌（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）首先是从巴西热带禾本科牧草俯仰马唐（Ｄｉｇｉｔａｒｉａｄｅｃｕｍｂｅｎｓ）根际分离得到的￣［１，２］...

一株WP-1甲烷螺菌的分离及其生理学性状研究

从处理石灰法造纸废液的上流式厌氧污泥床发酵液中分离出一株WP-1甲烷螺菌。该菌琼脂表面菌落呈深浅相交表面条纹状结构,即具有典型的羽毛状结构,有表面蔓延生长倾向。菌株WP-1的菌落呈浅棕黄色。细胞呈杆状,细长,微弯曲,有形成链状的倾向,不运动。细胞0.6-0.8×4-5.6μm,有短杆2.4μm,长杆菌可达7.2—8μm。革兰氏染色不定,无芽孢。利用H_2+CO_2,甲酸盐产甲烷。不利用醋酸盐。