蟾蜍毒素对S180小鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用的实验研究

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对S180肿瘤细胞的抑制作用及其毒副作用。方法本研究用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆，采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化，获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物（ethanol extract of toad venom，EET），将其作用于S180荷瘤小鼠模型，计算肿瘤抑制率和生命延长率，同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用。结果5mg／kg和0．5mg／kg的EET对S180荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是47．096和34．196（P〈0．05）；对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是46．2％和36．5％（P〈0．05）；同时，0．5mg／kg的EET可明显升高白细胞达（11±4）×100／L（P〈0．05）。但EET在5mg／kg时可引起总胆红素升高达（30±5）μmol／L（P〈0．05）。结论0．5～5mg／kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内S180肿瘤细胞的生长，但EET的剂量达到5mg／kg时可以损伤肝脏。

蟾蜍毒素的部分分离纯化及其抗白血病作用

目的研究蟾酥不同成分对白血病的抑制作用。方法应用硅胶层析法部分纯化蟾蜍皮脂腺分泌物的提取物;应用反向高效液相色谱检测部分纯化物的组分;台盼蓝拒染法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期。结果硅胶层析部分纯化,制备了4种混合物,其中乙醇提取物中含有6种组分,可能含有蟾蜍灵。4种混合物均可抑制人白血病HL60细胞增殖,其中3种的抑制作用明显强于单用蟾蜍灵。流式细胞仪分析显示4种混合物均可诱导细胞凋亡,并且不引起细胞周期阻滞。结论蟾蜍皮脂腺分泌物的部分纯化物可能通过诱导不伴有细胞周期阻滞的凋亡抑制白血病细胞增殖。

蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:观察蟾蜍毒素提取物对白血病K562细胞杀伤作用及对细胞周期的影响。方法:用无水乙醇、二甲基亚砜(DMSO)、PBS缓冲液浸溶中华大蟾蜍的耳后腺及皮下腺分泌物,采用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果:3种浸液均能抑制K562细胞的增殖,其抑制强度依次为乙醇浸液>DMSO浸液>PBS浸液。5 ng/ml的乙醇浸液、50 ng/ml的DMSO浸液、500 ng/ml的PBS浸液均能使K562细胞发生G2/M期阻滞。结论:蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞增殖具有明显的抑制作用,并伴有G2/M期阻滞。

蟾蜍毒素对人胃癌细胞凋亡的诱导机制

目的:研究蟾蜍毒素诱导人胃癌细胞MGC803凋亡及对凋亡因子Livin、caspase-3的影响.方法:应用MTT法检测10、20、40、80、160nmol/L蟾蜍毒素对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析周期阻滞和细胞凋亡;Western blot法检测Livin、caspase-3蛋白的表达.结果:(1)蟾蜍毒素抑制MGC803细胞增殖,24、48及72h的IC50分别为105.25nmol/L、47.92nmol/L、16.52nmol/L;(2)10-80nmol/L蟾蜍毒素能诱导胃癌细胞周期阻滞及凋亡,形态学表现为出现凋亡小体;(3)流式细胞仪检测到80nmol/L组亚二倍体凋亡峰(20.83%±2.72%vs1.67%±0.46%,P=0.006)及20nmol/L组细胞周期G2/M期阻滞(37.81%±3.28%vs20.66%±3.09%,P=0.003);(4)Western blot显示蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中,Livin蛋白表达分别下调到对照组的73.29%±6.23%,60.10%±7.84%和34.70%±5.76%,同时活化caspase-3.结论:蟾蜍毒素诱导胃癌细胞MGC803细胞凋亡可能与下调Livin蛋白、活化caspase-3蛋白有关.

蟾蜍毒素的部分分离纯化及其抗白血病作用(英文)

目的:研究蟾酥不同成分对白血病的抑制作用。方法:应用硅胶层析法部分纯化蟾蜍皮脂腺分泌物的提取物;应用反向高效液相色谱检测部分纯化物的组分;苔盼蓝拒染法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期。结果:硅胶层析部分纯化,制备了4种混合物,其中乙醇提取物中含有6种组分,可能含有蟾蜍灵。4种混合物均可抑制人白血病HL60细胞增殖,其中3种的抑制作用明显强于单用蟾蜍灵。流式细胞仪分析显示4种混合物均可诱导细胞凋亡,并且不引起细胞周期阻滞。结论:蟾蜍皮脂腺分泌物的部分纯化物可能通过诱导不伴有细胞周期阻滞的凋亡抑制白血病细胞增殖。

华蟾蜍毒素对离体豚鼠输精管的作用

华蟾蜍毒素(华蟾素)使离体豚鼠输精管产生剂量依赖性收缩反应,利血平化豚鼠输精管及冷藏输精管对华蟾素反应减弱。给酚妥拉明、维拉帕米后,输精管对华蟾素反应均受抑制,溴苄胺可使反应潜伏期缩短。结果提示华蟾素收缩输精管反应可能与其促进肾上腺素能神经末稍NA释放有关。

蟾蜍毒素对S180荷瘤小鼠肉瘤细胞Mg^(2+)-ATP酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的影响

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素对S180荷瘤小鼠肉瘤细胞Mg2+-ATP酶(Mg2+-ATPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的影响。方法乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法,进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(Ethanol extract of toad venom,简称EET),将其作用于S180荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用酶化学染色法观察S180肉瘤细胞酶活性的变化。结果蟾蜍毒素组和氟脲嘧啶组的肿瘤抑制率分别为35.6%和36.9%(P<0.05),细胞质膜标志酶Mg2+-ATPase、内质网标志酶G-6-Pase反应颗粒变小,数量减少,密度变低,提示酶活性明显下降。结论蟾蜍毒素可降低S180荷瘤小鼠肉瘤细胞质膜标志酶Mg2+-AT-Pase及内质网标志酶G-6-Pase的活性,抑制肿瘤细胞的生长。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞Mg^(2+)-ATP酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的影响

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞Mg2+-ATP酶(Mg2+-ATPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的影响。方法用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用酶化学染色法观察H22肝癌细胞酶活性的变化。结果蟾蜍毒素组和氟尿嘧啶组的肿瘤抑制率分别是32.0%和34.4%,与正常对照组比较差异显著(P<0.05),Mg2+-ATPase、G-6-Pase反应颗粒变小,数量减少,密度变低,提示酶活性明显下降。结论蟾蜍毒素可降低H22荷瘤小鼠肝癌细胞质膜标志酶Mg2+-ATPase及内质网标志酶G-6-Pase的活性,抑制肿瘤细胞的生长。

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制。方法 MTT检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达。结果蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白。结论蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关。

蟾蜍毒素对P-gp阳性白血病K562细胞的杀伤作用

目的 :探讨蟾蜍毒素混合物对白血病K5 62敏感株和耐柔红霉素株细胞的杀伤作用。方法 :采用四甲基偶氮唑盐 (MTT )法检测细胞的生长率 ,流式细胞仪测定细胞的DNA含量 ,细胞涂片经Wright Giemsa染色观察细胞凋亡。结果 :蟾蜍毒素混合物 >0 0 2 μg/mL以上时 ,抑制K5 62 /S和K 5 62 /D细胞的增殖 ;在0 0 4μg/mL以上浓度时 ,K5 62 /D细胞的生长率明显降低 ,与K5 62 /S相比差异有统计学意义。当 0 0 4μg/mL的蟾蜍毒素混合物处理K5 62 /S和K5 62 /D细胞 2 4h ,仅K5 62 /D细胞发生明显的G2 /M期阻滞 ;处理 48h ,K5 62 /S和K5 62 /D均发生明显的G2 /M期阻滞。 0 4μg/mL的蟾蜍毒素混合物使K5 62 /D细胞在 2 4h就发生明显凋亡 ,而K 5 62 /S细胞未见凋亡。结论 :蟾蜍毒素混合物对K 5 62 /S和K 5 62 /D细胞均具有杀伤作用 ,与K5 62 /S相比 ,对K5 62 /D的杀伤作用明显增强 ,并且不受P gp影响。

薄层层析法分离鉴定蟾蜍毒素和毒鼠强

目的：建立用薄层层析法分离鉴定蟾蜍毒素和毒鼠强的方法。方法：用薄层层析法分离检测。结果：毒鼠强标准的Rf=0.59,显蓝紫色斑点,蟾蜍毒素在Rf=0.2-0.65,能得到至少8个以上的彩色斑点,毒鼠强的蓝紫色斑点不受干扰。结论：该方法操作简便,结果可靠。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠疗效及毒副作用的实验研究

目的:探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对H22肝癌细胞的抑制作用及其毒副作用,为进一步分离纯化蟾酥和开发抗肿瘤新药提供动物实验基础。方法:采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化乙醇溶解的蟾蜍分泌物原浆,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(ethanolextractofChinesetoadvenom,EET),分别将其作用于H22实体瘤和腹水瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率和生命延长率,判断疗效;同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用。结果:与对照组比较,5mg/kg和0.5mg/kg的EET对H22荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是51.6%和41.2%,t=2.346,P=0.028;t=2.109,P=0.045。对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是34.7%和27.7%,t=3.346,P=0.002;t=2.312,P=0.035。同时,0.5mg/kg的EET可明显升高白细胞达(11.6±2.3)×109L-1,t=3.326,P=0.002。但EET在5mg/kg时可引起总胆红素升高达(46.5±14.8)μmol/L,t=2.347,P=0.036。结论:0.5～5mg/kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内H22肿瘤细胞的生长,且远远低于华蟾素的有效剂量范围;但EET的剂量达到5mg/kg时可以损伤肝脏。

抗肿瘤新星蟾蜍毒素的临床应用及其机制的研究进展

蟾蜍毒素作为传统中药具有多种功效,被广泛应用临床,研究表明其具有抗肿瘤,增强机体免疫力,提高中晚期癌症患者生存质量等作用。本文就蟾蜍毒素抗肿瘤作用及其研究机制方面的最新研究进展作一综述。

蟾蜍毒素联合紫杉醇抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的探讨蟾蜍毒素联合紫杉醇抑制人胃癌MGC803细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法应用MTT法检测不同浓度蟾蜍毒素及紫杉醇单药及联合对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡和周期阻滞;Western blot法检测C-FLIPL、Caspase-8蛋白的表达。结果 (1)蟾蜍毒素及紫杉醇单药均抑制MGC803细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,且联合用药的细胞增殖抑制率明显高于单药组,差异有统计学意义(P<0.05)。24、48及72 h联合指数(CI)分别为0.77、0.86、0.72;(2)40 nmol/L蟾蜍毒素、25 ng/ml紫杉醇单药及联合作用细胞24 h,流式细胞仪检测凋亡率分别为14.13%、19.74%及53.30%,联合组与单药组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)Western blot结果显示,蟾蜍毒素、紫杉醇单药组及联合组作用细胞24 h后,C-FLIPL蛋白表达依次下降至对照组的78.38%、64.71%、46.73%,Caspase-8蛋白表达上调至对照组的150.25%,156.86%,180.58%。结论蟾蜍毒素协同紫杉醇诱导胃癌MGC803细胞凋亡,且可能与下调C-FLIP、上调Caspase-8蛋白有关。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响

[目的]探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响。[方法]用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用光、电镜法观察H22肝癌细胞凋亡的变化。[结果]蟾蜍毒素组和氟脲嘧啶组的肿瘤抑制率分别是25.6%和30.8%(P<0.05),与对照组比较,肿瘤团块较小,细胞体积较小,异型性不明显,病理性核分裂较少,间质血管较少,坏死现象较轻。电镜下可见凋亡小体形成。[结论]蟾蜍毒素可通过诱导H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。

华蟾蜍毒素增强5-羟色胺及拟交感胺对离体豚鼠输精管的收缩作用

华蟾蜍毒素(CB)10μmol·L^(-1)可促进5-羟色胺和酪胺使豚鼠输精管的收缩作用增强约3～4倍,经利血平及酚妥拉明处理后,则此增强作用明显减弱.CB也能明显增强麻黄碱及多巴胺对输精管的作用、唯正常输精管对此浓度几无反应,但输精管去神经以后,给此浓度时可立即出现节律性收缩.结果提示CB对豚鼠输精管的作用,可能存在微弱的直接作用和促进去甲肾上腺素释放的间接作用.

蟾蜍毒素粗提物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞M期阻滞

目的 :探讨蟾蜍毒素粗提物对卵巢癌细胞的抑制作用及对细胞周期的影响。方法 :采用台盼蓝拒染色法 ,集落形成实验测定细胞增殖能力 ,采用流式细胞仪解析细胞周期。结果 :蟾蜍毒素粗提物作用细胞 2 4 ,4 8,72h ,半数抑制浓度分别为 0 6 2 ,0 2 4 ,0 0 9μg/ml。细胞经 0 5 ,5 μg/ml蟾蜍毒素粗提物处理 1,6h ,细胞生存率均 >95 % ,集落抑制率分别为 (4 3 1± 6 4 ) % ,(78 2± 4 9) % ,(89 8± 2 2 ) % ,(95 0± 2 6 ) % ,与对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 )。经蟾蜍毒素粗提物作用后 ,细胞阻滞于M期。结论 :蟾蜍毒素粗提物能够抑制OVCAR 3细胞增殖 ,同时诱导M期阻滞。

急性蟾蜍毒素中毒5例的院前急救

蟾蜍又名癞蛤蟆,其耳下腺及皮肤腺分泌物经炮制加工后,具有解毒、止痛、开窍、提神、强心、抗炎、利尿等作用,是我国传统中药材之一。但其毒性大,一般药用内服量为3～5mg,最大不能超30 mg,过量可引起中毒,病情凶险。我院急救中心2007年6月—2009年10月在急救车内抢救急性蟾蜍毒素中毒患者5例,现将救治体会介绍如下。