蟾蜍油炮制工艺及质量评价方法研究

目的:优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法:以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加热时间、物料厚度,冷冻干燥的预冻时间、冷冻干燥时间,真空干燥的温度及时间对蟾蜍油的影响。采用HPLC建立15批蟾蜍油的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;同时,采用柱前衍生化法测定氨基酸含量。结果:蟾蜍油最佳工艺为不叠加样本,50℃热风干燥11 h。HPLC指纹图谱中共确定7个共有峰,相似度均大于0.99;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸质量分数分别为0.40%~0.57%、0.57%~0.78%、0.54%~0.75%、0.26%~0.86%。结论:所确定的工艺及质量评价方法简便、重复性好,可为蟾蜍油的加工炮制及质量评价提供参考。

哈蟆油与蟾蜍油蛋白质组数据分析

旨在筛选哈蟆油和蟾蜍油中特异性的蛋白质,发现这些差异蛋白与生长环境、冬眠及发育的关系。采用i TRAQ结合质谱技术建立哈蟆油和蟾蜍油蛋白质组数据库,通过比较两个蛋白质组数据库,对筛选的差异蛋白进行Gene ontology功能注释和生物信息学分析。结果表明,差异表达蛋白的总数为68个,其中上调蛋白61个,下调蛋白7个。哈蟆油中含量较高的7个差异蛋白主要分为五大类,黏蛋白类(PREDICTED:mucin-5AC-like,PREDICTED:similar to mucin,mCG142254, partial)、胶原蛋白(collagen alpha-1(Ⅲ) chain)、α激酶锚定蛋白13样(PREDICTED:a-kinase anchor protein 13-like)、免疫球蛋白Fc段连接蛋白样(PREDICTED:IgGFc-binding protein-like)、膜联蛋白(annexin A1),以上蛋白主要参与免疫调节、生长发育等过程;同时发现哈蟆油中抗冻成分主要为黏蛋白类,而蟾蜍油中主要为凝集素。哈蟆油中含量较高的7个差异蛋白质可作为哈蟆油区别于蟾蜍油的重要成分,同时哈蟆油的特异性膨胀度可能与含量较高的黏蛋白类密切相关。

应用iTRAQ结合2D LC-MS/MS技术分析哈蟆油与伪品蛙油的差异蛋白质组

采用iT RAQ结合2D LC-MS/MS技术对哈蟆油、青蛙油、蟾蜍油、牛蛙油的蛋白质组进行研究。采用Q Exactive质谱鉴定并经MASCOT软件搜库,对所鉴定的蛋白质进行理化性质分析、层次聚类分析、Gene ontology(GO)功能注释和生物信息学分析。结果共获得2286个肽段,鉴定到1220个蛋白质,其中1212个蛋白质具有定量信息。鉴定得到的蛋白质分子量主要分布在4. 1～36. 9 kD a,占82. 79%,等电点主要分布在4. 41～9. 89,占94. 84%。对比青蛙油、蟾蜍油和牛蛙油与哈蟆油蛋白质数据库,筛选得到8个差异蛋白(比值> 1. 2或比值<0. 83,且P <0. 05),其中显著上调的蛋白质3个,显著下调的蛋白质5个。本结果在蛋白质组成上显示了哈蟆油与伪品蛙油的差异性,为进一步分析哈蟆油中蛋白质成分特点、功能奠定基础。