蟾酥提取物长循环脂质体的制备及质量评价

目的研究蟾酥提取物长循环脂质体(chan su long-c ircu lation liposom e,CSLLP)的制备方法,并对其质量进行评价。方法考察不同方法制备CSLLP的包封率,最终确定选用乙醇注入法制备CSLLP,正交设计优化处方,用两亲性聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺(mPEG2000-DSPE)修饰脂质体膜,透射电镜观察形态,激光散射法测定粒径大小及分布,采用葡聚糖凝胶柱层析法和HPLC法测定CSLLP的包封率和渗漏率。结果乙醇注入法制备的CSLLP包封率最高,所得脂质体外观圆整而均匀,渗漏率小,稳定性好,平均粒径为69.8 nm,药物平均包封率为95.54%。结论用乙醇注入法可制备包封率高、稳定性好的CSLLP。

蟾毒与蟾酥提取物牙髓镇痛效果的比较研究

目的：观察比较蟾毒与蟾酥不同提取物的牙髓镇痛效果。方法：采用以猫开口反射为疼痛指标的牙髓电刺激模型。结果：牙髓封药３０ｍｉｎ，蟾毒对牙痛阈值的增长率明显高于蟾酥乙醇提取物和氯仿提取物；封药１ｈ，蟾毒对牙痛阈值的增长率与蟾酥乙醇提取物无明显差别，但明显高于蟾酥氯仿提取物；封药２ｈ，对牙痛阈值的增长率，蟾毒与蟾酥乙醇提取物和氯仿提取物之间均无明显差异。结论：蟾毒的牙髓镇痛作用较强，起效快，其次为蟾酥乙醇提取物。

蟾酥提取物对荷瘤小鼠肿瘤细胞形态学实验研究

目的:观察蟾酥提取物(BTXs)对S180肉瘤小鼠的抑瘤作用。方法:观察BTXs对荷瘤小鼠肿瘤抑制率、胸腺指数、脾脏指数以及肿瘤组织病理变化的影响。结果:模型组与BTXs组、环磷酰胺组、联合用药组的抑瘤率具有显著差异,BTXs对胸腺指数、脾脏指数也具有显著的影响。病理学观察显示,BTXs具有明显的抑瘤作用。结论:蟾酥提取物(BTXs)对肿瘤细胞具有抑制作用。

靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体的制备及其体外抗肿瘤活性

目的制备具有靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,并对其进行表征,再进一步考察其体外抗肿瘤活性。方法合成叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯并用红外光谱和质谱进行表征,采用薄膜分散法制备靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,用透射电镜、激光粒度仪、高速离心法分别测定脂质体的形状、粒径、电位、包封率,MTT法考察脂质体对肿瘤细胞的抑制作用。结果经红外光谱及质谱分析证实,成功合成了靶向材料叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯;制备的靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体在透射电镜视野中粒径大小均一,约160 nm,Zeta电位约4.0 mV,包封率达90%以上;体外细胞毒性显示,叶酸修饰的蟾酥提取物长循环脂质体的IC_(50)值为0.46μg/mL,普通长循环脂质体的IC_(50)值为0.76μg/mL。结论成功合成叶酸-聚乙二醇单硬脂酸酯靶向材料并构建了靶向叶酸受体的蟾酥提取物长循环脂质体,可靶向性抑制肿瘤细胞生长。

蟾酥提取物中2种蟾蜍甾烯类成分兔体内药代动力学研究

目的:建立兔血浆中2种蟾蜍甾烯类化合物蟾毒灵及酯蟾毒配基的分析方法,探讨其在兔体内的药代动力学过程。方法:兔按0.35 mg.kg-1由耳缘静脉注射蟾酥提取物后分别于2,5,10,15,20,30,45,60,90 min心脏取血,采用乙腈沉蛋白与液液萃取相结合方法进行血浆样品预处理,以HPLC测定兔血浆中蟾毒灵及酯蟾毒配基的浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数。结果:建立的HPLC方法,蟾毒灵、酯蟾毒配基均得到很好的分离,达到体内分析要求。经非房室模型拟合,得到了蟾毒灵、酯蟾毒配基在兔体内主要药动学参数。结论:建立的蟾毒灵、酯蟾毒配基血药浓度测定方法及所获得的药动学参数,可为中药蟾酥提取物的药代动力学研究提供参考。

蟾酥提取物中3种蟾蜍甾烯类成分比格犬体内药代动力学

目的:建立犬血浆中蟾酥提取物中3种蟾蜍甾烯类化合物蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的分析方法,并用于其在犬体内的药代动力学研究。方法:比格犬按0.18 mg·kg-1由股静脉注射蟾酥提取物后分别于2,5,10,15,20,30,45,60,90 min股静脉取血,采用乙腈沉蛋白与固相微萃取相结合方法进行血浆样品预处理,以HPLC方法测定犬血浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数。结果:建立的SPE-HPLC方法,蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基均得到很好的分离,重复性、精密度、线性关系良好,达到体内分析要求;经非房室模型拟合,得到了蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基在犬体内主要药动学参数。结论:建立的蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基比格犬血药浓度SPE-HPLC方法及所获得的药动学参数,可为中药蟾酥提取物的药代动力学研究提供参考。

叶酸修饰的蟾酥提取物脂质体的制备及包封率的测定

目的研究叶酸修饰的蟾酥提取物脂质体的制备方法及包封率测定方法。方法薄膜分散法制备叶酸修饰的蟾酥提取物脂质体,HPLC法测定蟾毒灵(BL)、华蟾毒配基(CBG)、酯蟾毒配基(RBG)含量,超速离心法测定脂质体的包封率,用透射电镜观察脂质体的外观形态,并用粒径及Zeta电位分析仪测定脂质体的粒径和zeta电位。结果叶酸修饰的蟾酥提取物脂质体中BL、CBG、RBG的包封率分别为90.62%、91.90%、95.23%,形态为粒径均匀的球形和类球形,粒径为(161±15)nm,zeta电位为(4.2±1.2)m V。结论薄膜分散法制备的叶酸修饰的蟾酥提取物脂质体处方合理,工艺可行,包封率较高。

蟾酥水提取物体外抗炎作用的试验研究

为了评估蟾酥水提取物的体外抗炎作用,研究用LPS诱导RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型,采用Griess法测定蟾酥水提取物对细胞上清液中NO水平的影响,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6含量,采用荧光法测定细胞内ROS水平。结果表明:蟾酥水提取物对LPS诱导的RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞所分泌的炎症因子NO、TNF-α、IL-1β和IL-6有明显的抑制作用,与模型组相比明显降低,同时蟾酥水提取物能够极显著降低LPS诱导的细胞内ROS水平(P<0.01)。说明蟾酥水提取物可能通过抑制炎症因子、降低细胞内活性氧水平减轻细胞的炎症反应,表现良好的抗炎作用。

蟾酥水提取物对小鼠免疫功能的影响

研究新提取的蟾酥水提取中试产品体内外对小鼠免疫功能的调节作用。体内实验设蟾酥水提取物的高(2mg/kg)、中(1mg/kg)、低(0.5mg/kg)剂量组、左旋咪唑组和生理盐水组,连续腹腔注射给药3d后分别测定小鼠脾脏和胸腺指数、血液白细胞分类计数、血清中IL-2、IL-4、IL-12和IFN-γ浓度和脾淋巴细胞体外增殖能力;无菌分离健康小鼠的脾淋巴细胞进行体外培养,加入不同质量浓度的蟾酥水提取物(20、10、5μg/ml),协同LPS或Con A共同孵育48h后,采用MTT法测定脾淋巴细胞增殖能力和ELISA法测定脾淋巴细胞上清液中的IL-2、IL-12、IL-4和IFN-γ含量。该蟾酥水提取物能协同Con A和LPS促进脾T、B淋巴细胞的体外增殖能力(P<0.01),促进免疫器官生长。明显提高小鼠血清和脾淋巴细胞上清液中IL-2、IL-4、IL-12和IFN-γ水平(P<0.01)。该蟾酥水提取物中试产品通过促进小鼠免疫细胞的增殖活性和细胞因子的分泌水平而发挥其免疫调节作用。

蟾酥醇提取物的体外抗炎作用研究

为了考察蟾酥醇提取物的体外抗炎作用,用LPS诱导RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型,采用Griess法测定蟾酥醇提取物对细胞上清液中的NO水平,ELISA法测定TNF-α、ILlβ、IL-6含量,荧光法测定细胞内ROS水平。结果显示,蟾酥醇提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞所分泌的炎症因子(NO、TNF-α、IL-1β、IL-6)有明显的抑制作用,与空白对照组相比明显降低,同时蟾酥醇提取物极显著降低LPS诱导的细胞内ROS水平(P<0.01)。由此推测,蟾酥醇提取物通过抑制炎症因子、降低细胞内活性氧水平减轻细胞的炎症反应,具有良好的抗炎作用。

蟾酥水提取物对人宫颈癌HeLa细胞生物学活性的抑制作用

目的:研究蟾酥水提取物对子宫颈癌HeLa细胞黏附、迁移和侵袭能力的抑制作用。方法:应用MTT法检测蟾酥水提取物对子宫颈癌HeLa细胞活力和细胞黏附能力的影响,划痕实验观察蟾酥水提取物对HeLa细胞运动能力的影响,Transwell小室模型研究蟾酥水提取物对HeLa细胞的迁移和侵袭的抑制作用,免疫印迹法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:100μmol/L或以上浓度的蟾酥水提取物作用24 h,Hella细胞生存率明显低于对照组(P均<0.05);20μmol/L或以上浓度的蟾酥水提取物作用24 h,HeLa细胞黏附率明显低于对照组(P均<0.05)。20μmol/L或以上浓度的蟾酥水提取物对Transwell小室膜上HeLa细胞的运动、迁移、侵袭均有抑制作用。50μmol/L蟾酥水提取物作用下,HeLa细胞的MMP-9蛋白表达强度比对照组明显减弱。结论:蟾酥水提取物能抑制HeLa细胞的黏附,阻止其迁移和侵袭,抑制MMP-9的活性可能是蟾酥水提取物体外诱导HeLa细胞发生凋亡的重要作用机制之一。

蟾酥不同溶剂萃取物对小鼠免疫细胞功能的影响

目的对蟾酥不同溶剂萃取物进行初步免疫活性筛选。方法用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞(M)能量代谢水平,中性红吞噬法测定腹腔M的吞噬功能,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和S期细胞的百分率。结果蟾酥各萃取层中的水层(VB2)、乙酸乙酯层(VB4)及总水提蛋白层(VB6)分别在1.25～30、10～20和10～40mg.L-1浓度范围内增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;其他3组(VB1,VB3和VB5)蟾酥提取物单独作用或与ConA联合作用对小鼠脾淋巴细胞增殖反应无明显影响;VB2,VB4和VB6在1.25～40mg.L-1浓度范围内可增强ConA诱导的小鼠腹腔M能量代谢水平和吞噬中性红的能力。在10mg.L-1时,VB2,VB4和VB6可协同ConA增加脾淋巴细胞中S期细胞百分率,并降低CD4+CD8-和CD4-CD8+、增加CD4+CD8+T淋巴细胞亚群百分率。结论蟾酥不同溶剂萃取物VB2,VB4和VB6体外可协同ConA促进脾淋巴细胞和腹腔M的免疫功能,其机制可能与协同ConA促进DNA合成并活化CD4+CD8-T细胞表达CD8a抗原、增加兼具辅助和细胞毒作用的CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的数量有关。

蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基大鼠体内药动学研究

目的建立检测大鼠血浆中3种蟾蜍甾烯类化合物蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的HPLC法,并用于蟾酥在大鼠体内的药动学研究。方法分别于大鼠尾iv给予蟾酥提取物0.8 mg/kg后2、5、10、15、20、30、45、60、90 min,眼眶取血,采用乙腈沉淀蛋白与液液萃取相结合方法进行血浆样品预处理,以HPLC法测定大鼠血浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的质量浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数。结果蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基均得到很好的分离,重现性、精密度、线性关系良好,达到体内分析要求;经非房室模型拟合,得到蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基在大鼠体内主要药动学参数;iv给药30 min时,血药浓度均降至Cmax的1/5以下。结论建立的蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基血药浓度测定方法操作简单、结果准确可靠;蟾蜍甾烯类成分在大鼠体内代谢较为迅速,所得数据可为蟾酥提取物的药动学研究提供参考。