基于网络药理学探讨中药蟾毒灵在骨肉瘤中的抗肿瘤作用机制

目的:本研究运用网络药理学分析方法,了解蟾毒灵(bufalin)在骨肉瘤中的抗肿瘤作用机制,并进一步利用相关实验进行验证。方法:通过PharmMapper数据库预测得到蟾毒灵的潜在作用靶点,借助GeneCards数据库搜索骨肉瘤相关疾病靶点,对两个数据库中的靶点进行Venny分析,随后使用String数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,利用David数据库对关键靶点进行基因本体(gene ontology,GO)富集及KEGG信号通路分析。最后运用Cytoscape 3.7.2及Origin 2020软件构建“化合物-通路-靶点-疾病”网络图。最后利用CCK-8实验和Western blot实验进行验证。结果:通过药理学分析一共获得蟾毒灵与骨肉瘤共同靶点107个,KEGG通路富集分析共得到相关信号通路34条,涉及到肿瘤信号通路有:PI3K-AKT信号通路、MAPK信号通路、p53信号通路、VEGF信号通路、ErbB信号通路等。将其进行PPI网络分析表明,MYC、CCND1、IL6、ESR1、CDKN2A、IGF1、CAT、CDKN1A、ANXA5、PTGS2为连接度最高、权重最大的靶点。CCK-8实验证实蟾毒灵具有抑制骨肉瘤细胞增殖的作用;Western blot发现增殖相关蛋白MYC、CCND1蛋白表达下降。回复实验进一步证实,蟾毒灵可能通过调控PI3K-AKT信号通路发挥抗骨肉瘤的作用。结论:基于网络药理学分析以及相关实验发现蟾毒灵可能通过调控PI3K-AKT信号转导通路抑制骨肉瘤的生长。

远华蟾毒精通过下调miR-181a抑制胃癌细胞生长及侵袭研究

目的 回顾性分析胃癌患者样本中miR-181a的表达水平,根据临床病例病理数据分析miR-181a与胃癌的相关性。采用药物干预的方法,观察远华蟾毒精对胃癌细胞中miR-181a表达的影响以及参与胃癌生长及侵袭的作用机制。方法 本实验纳入2019年1月—2020年12月于滨州医学院附属医院诊治的90例胃癌患者的胃部病变标本及血液,另纳入30份癌旁组织样本。远华蟾毒精组使用0.05、0.10、0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精干预,对照组不加药。RT-qPCR探究组织层面的miR-181a表达水平。比较miR-181a在胃癌患者癌组织和癌旁组织中的表达水平,分析miR-181a表达水平与临床参数的相关性。以胃癌细胞系SGC-7901为研究对象,利用MTT法、细胞凋亡实验和Transwell实验探究远华蟾毒精对胃癌细胞增殖、细胞系SGC-7901细胞活力、侵袭力、细胞凋亡率的影响,并检测远华蟾毒精对miR-181a表达水平的影响。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-181a呈高表达(P<0.05)。miR-181a低表达的胃癌患者生存曲线优于高表达者(P<0.05)。miR-181a高表达患者间肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移率大于miR-181a低表达(P<0.05);miR-181a高表达与miR-181a低表达患者年龄、体质指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。远华蟾毒精组细胞系SGC-7901 24、48 h存活率及侵袭数低于对照组,浓度为0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组48 h存活率低于24 h存活率(P<0.05)。浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901细胞早期和晚期的凋亡率及总凋亡率高于对照组,且浓度为1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901晚期凋亡率低于早期凋亡率(P<0.05)。与对照组比较,浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901中miR-181a表达水平降低(P<0.05),且浓度为1.00μg/ml的远华蟾毒精组48 h的miR-181a表达水平较24 h低(P<0.05)。结论 miR-181a表达水平是胃癌患者中的风险基因,远华蟾毒精可以通过下调miR-181a表达来发挥抗癌功能。

蟾毒灵抑制M2型巨噬细胞介导的结直肠癌迁移和上皮间质转化

目的探讨蟾毒灵(BU)抑制M2型巨噬细胞介导结直肠癌转移的作用。方法用佛波酯(PMA)诱导人急性白血病单核细胞(THP-1)分化为M0型巨噬细胞,48h后用含有白细胞介素-4(IL-4)和IL-13的培养基处理M0型巨噬细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、形态学、实时荧光定量(RT-qPCR)实验观察其表面标志物和形态变化,RT-PCR和ELISA实验检测M2型巨噬细胞的表面标志物转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10。通过ELISA实验比较M2型巨噬细胞和结直肠癌细胞HCT116上清液中IL-6分泌水平,通过Transwell实验、划痕实验、RT-qPCR和Western blot实验检测条件培养基对结直肠癌细胞HCT116的的影响。在条件培养基中加入BU后,通过Western blot、Transwell实验、划痕实验、和RT-qPCR实验观察可以HCT116中AKT/PI3K蛋白以及迁移和上皮间质转化能力的变化。结果将THP-1成功诱导成为M2型巨噬细胞。M2型巨噬细胞通过分泌IL-6激活了HCT116中AKT/PI3K蛋白磷酸化,促进了其迁移和上皮间质转化能力。BU可以抑制M2巨噬细胞介导的HCT116迁移和上皮间质转化。结论M2型巨噬细胞释放IL-6激活了结直肠癌细胞AKT/PI3K信号通路,促进了其迁移和上皮间质化。此外,BU可以抑制其促迁移和上皮间质化作用。

蟾毒灵抑制乏氧耐药细胞诱导的M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药

目的:在乏氧微环境中探讨蟾毒灵(bufalin,BU)抑制耐药结肠癌细胞诱导M2型巨噬细胞极化对普通结肠癌细胞的作用。方法:培养基中加入氯化钴(cobalt chloride,CoCl 2)模拟乏氧环境,佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人源单核细胞THP-1分化为M0巨噬细胞。分别采集乏氧条件下耐药结肠癌细胞、普通结肠癌细胞和BU作用于耐药结肠癌细胞的条件培养基(conditioned medium,CM),然后放入M0巨噬细胞中。通过流式细胞术、Realtime PCR、ELISA实验检测M2型巨噬细胞极化标志因子的表达;运用CCK-8和蛋白免疫印迹(western blot,WB)实验检测耐药结肠癌和普通结肠癌条件培养基诱导M2型巨噬细胞极化后的上清对普通结肠癌的作用。结果:在缺氧环境下,与普通结肠癌细胞相比,耐药结肠癌细胞CM促进M2型巨噬细胞标志物IL-10、TGF-β、CD11b、CD206升高(P<0.01,P<0.05)。极化巨噬细胞的上清液增加了普通结肠癌细胞中P-gp和Bcl-2的表达,同时降低了Bax的表达和对奥沙利铂的敏感性。耐药结肠癌细胞经BU处理后,M2型巨噬细胞标志物IL-10、TGF-β、CD11b、CD206表达降低(P<0.01,P<0.05)。此外,P-gp和Bcl-2的表达减少,而Bax的表达增加,导致对OXA的敏感性增加。结论:乏氧条件下,结肠癌耐药细胞CM促进M2型巨噬细胞极化,蟾蜍灵可通过调节M2型巨噬细胞极化过程逆转结肠癌耐药。

网络药理学结合指纹图谱与多元统计分析预测蟾皮质量标志物

目的 基于网络药理学结合指纹图谱与多元统计分析预测蟾皮质量标志物。方法 基于文献分析定位蟾皮质量标志物范围来源,通过网络药理学筛选蟾皮中药效相关成分,结合指纹图谱和多元统计分析筛选出影响蟾皮批次间差异性成分,将药效成分与特征差异性成分关联,预测质量标志物,并进行分子对接验证和含量测定。结果 蟾皮质量标志物为沙蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、蟾蜍噻咛,能与主要抗肿瘤靶点稳定结合,其含量在多批次样品间具有一定差异,其中沙蟾毒精、蟾蜍噻咛整体较高,华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基整体较低。结论 沙蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、蟾蜍噻咛为蟾皮抗肿瘤作用的质量标志物。

蟾皮有效成分提取工艺优化及其体外抑菌试验

目的确定蟾皮中吲哚生物碱、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵含量的指标权重,优化蟾皮提取工艺,并对最优工艺下蟾皮提取物的抑菌活性进行研究。方法基于乙醇浓度、料液比、回流时间、回流次数单因素试验结果,以吲哚生物碱、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵的含量为评价指标,运用层次分析法确定指标权重系数,结合正交试验结果优化蟾皮提取工艺参数,并采用倍比稀释法测定蟾皮提取物的抑菌活性。结果蟾皮提取物中指标成分吲哚生物碱、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵含量的权重系数分别为0.3507、0.3507、0.1892、0.1093,最终以乙醇浓度80%、料液比1∶20、加热回流2.5 h、提取2次为最佳提取工艺。抑菌试验中,蟾皮提取物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有良好的抑菌活性。结论层次分析法结合正交试验优化的蟾皮提取工艺稳定可行、重复性好。

白化红点齿蟾蝌蚪皮肤的转录组学分析

为探究喀斯特洞穴的代表物种——红点齿蟾蝌蚪(Oreolalax rhodostigmatus)白化的分子调控机制,采用Illumina HiSeqTM4000对白化和黑色红点齿蟾蝌蚪皮肤组织进行了转录组测序,探寻基因表达差异,为红点齿蟾适应性进化提供理论依据。结果显示,转录组拼接组装后获得98711个Unigene,总长度为96459902 bp,平均长度为977 bp;共预测3389个完整开放阅读框(open reading frame,ORF),其中长度分布在0~200个氨基酸的ORF最多,占ORF总数的74.89%。Deseq2分析共筛选出269个差异表达基因(DEGs),其中上调基因136个,下调基因133个。GO功能注释发现,差异表达基因显著富集在细胞过程、代谢过程、结合、催化活性等通路上。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信号通路分析显示,差异基因被成功富集到175个信号通路上,主要包括代谢途径、脂肪酸合成、酪氨酸代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等通路,筛选到酪氨酸代谢通路、黑色素合成通路、MAPK信号通路、WNT信号通路、PI3K-Akt信号通路与黑色素合成相关。通过荧光定量PCR验证转录组数据的可靠性。最后利用MISA查找到9623个SSR位点,出现频率最高的为二碱基重复(79.87%)。本实验结果可为红点齿蟾蝌蚪白化性状相关基因的挖掘与功能研究提供基础信息。

蟾毒它灵诱导急性早幼粒细胞白血病HL⁃60细胞铁死亡的机制研究

目的探究蟾毒它灵(Bufotalin)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞HL‐60铁死亡的作用及机制。方法用不同浓度(0.1、0.5、1.0、2.0、4.0μg·mL^(-1))蟾毒它灵分别作用于APL细胞HL‐60,使用光学显微镜观察细胞的形态学变化;采用CCK‐8法检测细胞的存活率情况;采用Western blot法检测细胞中铁死亡相关蛋白CD71、xCT、FTH1、GPX4的表达水平;采用谷胱甘肽(GSH/GSSG)检测试剂盒检测细胞内GSH和GSSG的含量变化;采用脂质氧化(MDA)检测试剂盒测定细胞内MDA的含量变化。将0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵、0.1μmol·L^(-1)Fer‐1和0.5μg·mL^(-1)蟾毒它灵+0.1μmol·L^(-1)Fer‐1分别作用于HL‐60细胞,使用光学显微镜观察细胞形态学变化,并用Western blot法检测铁死亡相关蛋白的表达水平。结果不同浓度蟾毒它灵处理HL‐60细胞后,细胞形态呈现出哑铃型、梭形等不规则形状,细胞的存活率降低,且呈时间‐剂量依赖关系。与对照组相比,蟾毒它灵可降低铁死亡相关蛋白GPX4、xCT、FTH1的表达水平和总谷胱甘肽的含量(均P<0.01),升高CD71蛋白的表达水平和MDA含量(均P<0.05)。蟾毒它灵与铁死亡抑制剂Fer‐1联合处理HL‐60细胞后,与对照组比较,HL‐60细胞的生长数量和形态学无明显变化,CD71、xCT、FTH1、GPX4蛋白表达水平的差异也无统计学意义(均P>0.05)。结论蟾毒它灵可抑制APL细胞HL‐60的增殖并诱导铁死亡,其可能通过GPX4介导的抗氧化途径和铁代谢途径实现。

蟾毒灵在卵巢癌中的作用及其机制的研究进展

蟾毒灵(bufalin)是中药材蟾酥中的一种有效成分,又称蟾毒素,其药理作用十分广泛,具有显著的抗肿瘤作用。关于蟾毒灵作为一种抗肿瘤药物,近年来受到越来越多关注,且在中国已广泛应用于多种恶性肿瘤的临床诊治。蟾毒灵可诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭,增敏化疗药物以及实现耐药逆转,有良好的抗卵巢癌效果。通过回顾近年来蟾毒灵在卵巢癌方面的作用及其机制,认为蟾毒灵能够通过多种途径诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭,且联合化疗药物起到增效减毒作用以及实现逆转耐药。

何首乌抗性淀粉-玉米醇溶蛋白负载酯蟾毒配基纳米粒的制备及工艺优化

为了改善酯蟾毒配基的成药性,提高其生物利用度,本文通过反溶剂法制备了负载酯蟾毒配基的何首乌抗性淀粉-玉米醇溶蛋白纳米粒,以包封率为指标,采用单因素实验和正交试验进行纳米粒制备工艺的优化。优化后的制备工艺为pH值为4,搅拌速度为400 r·min^(-1),何首乌抗性淀粉和玉米醇溶蛋白比例为1∶1,玉米醇溶蛋白和酯蟾毒配基比例为1∶1,制备的纳米粒包封率为86.84%。

贵州山区岜沙掌突蟾分布新纪录研究

2023年4月30日,在贵州雷公山国家级自然保护区进行两栖动物资源调查过程中,采集到2号掌突蟾标本,经形态学比较分析,鉴定为岜沙掌突蟾(Leptobrachella bashaensis),为首次发现报道。通过对其形态特征和生境进行了描述,为该物种分类及谱系地理学研究提供了参考,有助于促进该物种的生物多样性保护。

miR-551a拮抗蟾毒灵对肝癌细胞增殖和转移的效应

目的:研究蟾毒灵对肝癌细胞增殖和转移影响的分子机制。方法:人肝癌细胞SK-Hep1分为NC组、蟾毒灵低、高剂量组、anti-miR-NC组、anti-miR-551a组、miR-NC组、miR-551a组、高剂量组+miR-NC组、高剂量组+miR-551a组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-551a表达水平。结果:蟾毒灵处理的SK-Hep1细胞活性降低,细胞凋亡率升高,细胞迁移、侵袭数量减少,miR-551a表达水平降低(P<0.05)。抑制miR-551a表达后,SK-Hep1细胞活性降低,细胞凋亡率升高,细胞迁移、侵袭数量减少(P<0.05)。过表达miR-551a逆转了蟾毒灵对肝癌细胞的影响。结论:蟾毒灵可能通过抑制miR-551a的表达抑制肝癌细胞的增殖和转移,促进细胞凋亡。

雷山髭蟾蝌蚪形态学分析

为了解雷山髭蟾蝌蚪的形态学特征,2020年12月在雷公山国家级自然保护区内格头村、仙女塘、康利水厂附近小溪采集雷山髭蟾蝌蚪,并测量其体重和形态指标;采用多变量形态学分析方法对74只雷山髭蟾蝌蚪的体重、全长、眼前头长、体高、尾长等18项指标进行方差分析、主成分分析和聚类分析。结果表明:不同全长组蝌蚪的体重、吻肛距、全长等18项指标差异均极显著。在主成分分析中,有1个主成分的特征值大于1,其累计方差贡献率为76.351%;体重、全长、眼间距、体宽、尾长等指标对其有较大的影响。进行聚类分析的74只雷山髭蟾蝌蚪可聚为3个大类,全长0~50 mm组和全长101~150 mm组的雷山髭蟾蝌蚪关系较远;全长51~100 mm组的蝌蚪处于生长发育的过渡阶段,与全长0~50 mm组的雷山髭蟾蝌蚪有较近的关系。雷山髭蟾蝌蚪外部形态分析可为雷山髭蟾的生物学特征研究积累基础数据。

爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的分析爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法采用UALCAN数据库分析TPX2 m RNA和蛋白在HCC组织中的表达情况;K-M Plot数据库分析TPX2表达情况对HCC患者预后的影响;HPA免疫组化分析TPX2蛋白在HCC组织中的表达情况;GEPIA及UALCAN数据库分析HCC组织中TPX2与肿瘤蛋白p53(TP53)表达的相关性;ACLBI数据库分析TPX2在HCC组织中的表达水平及对患者预后的预测价值。结果UALCAN数据库分析结果显示,不同分期和分级HCC组织中TPX2 mRNA表达水平均高于正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。K-M Plot数据库分析结果显示,TPX2低表达HCC患者的无复发生存期(RFS)、总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)及疾病特异性生存期(DSS)均优于TPX2高表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。HPA数据库免疫组化分析结果显示,HCC组织中TPX2蛋白阳性表达高于正常肝组织。UALCAN与GEPIA数据库分析结果显示,HCC组织中TPX2与TP53表达呈正相关(r=0.34,P﹤0.05),且TP53突变组TPX2 m RNA表达水平高于TP53未突变组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。ACLBI数据库分析结果显示,随着TPX2表达的增高,患者预后不良风险增加;TPX2低表达HCC患者的OS明显优于TPX2高表达患者,差异有统计学意义(P﹤0.01);TPX2表达预测HCC患者1、3、5年OS的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.731(95%CI:0.659~0.803)、0.664(95%CI:0.588~0.739)和0.644(95%CI:0.551~0.738)。结论TPX2是一种癌基因,不利于HCC患者的预后,可作为HCC诊断与预后的生物标志物。

蟾毒灵对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及两者的交互作用

目的:探讨蟾毒灵对骨肉瘤细胞凋亡、自噬的影响及两者的交互作用。方法:蟾毒灵处理骨肉瘤细胞后使用CCK-8检测细胞活性,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot检测凋亡及自噬相关蛋白表达。结果:蟾毒灵能抑制骨肉瘤细胞增殖、诱导骨肉瘤细胞凋亡,且蟾毒灵能激活骨肉瘤细胞自噬,而抑制凋亡促进了自噬的激活,阻断自噬则加重细胞凋亡。结论:蟾毒灵能诱导骨肉瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,且蟾毒灵能激活细胞自噬,自噬的激活主要是拮抗细胞的凋亡。

蟾毒灵通过激活内质网应激通路诱导HCT116细胞凋亡

目的研究蟾毒灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响,并探讨内质网应激(ERS)在此过程中的作用。方法采用CCK-8法测定蟾毒灵对HCT116细胞增殖活性的影响;不同浓度蟾毒灵作用HCT116细胞48 h后,采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况,同时用Western blot法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况;将HCT116细胞分为对照组、蟾毒灵组和联合组(蟾毒灵+4-苯基丁酸),Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果CCK-8法检测结果显示蟾毒灵对HCT116细胞的增殖活性有抑制作用;细胞凋亡实验表明蟾毒灵能引起HCT116细胞的凋亡;Western blot实验结果显示,蟾毒灵能够上调促凋亡蛋白Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,同时也能诱导ERS并激活PERK/eIF2α/CHOP通路;当蟾毒灵联合4-苯基丁酸后,蟾毒灵的促凋亡作用得到了抑制。结论蟾毒灵能有效地抑制HCT116的增殖活性,并能诱发HCT116的凋亡,而该作用在一定程度上是通过激活ERS来实现的。

爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白在肝细胞癌的表达及临床预后的意义

目的 分析爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)在肝细胞癌(HCC)的表达及其临床预后的意义。方法 首先,分别利用UALCAN、K-M Plot以及HPA数据库分析TPX2在HCC的表达水平、生存预后及其相关性;再次,利用TIMER、GEPIA和SangerBox数据库分析TPX2的免疫细胞浸润以及与TP53突变相关性和突变景观图;最后,通过HCCDB数据库分析在HCC中TPX2的共表达基因及其预后价值,并对共表达基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果 TPX2在HCC高表达且不利于患者的总体生存(OS)、疾病特异性生存(DSS)、无进展生存(PFS)和无复发生存(RFS);同时,TPX2在HCC组织与肿瘤细胞纯度和多种免疫细胞(B细胞、CD4+T以及CD8+T等)显著相关;并且,TPX2在HCC中的表达水平与TP53突变显著相关。TPX2对HCC患者1年、3年和5年OS预后诊断的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别是0.73,95%CI(0.669~0.79)、0.668,95%CI(0.604~0.732)和0.654,95%CI(0.574~0.734)。TPX2的共表达基因在HCC均不利于患者的OS;其GO功能主要富集在有丝分裂与核分裂、微管细胞骨架以及微管运动等,KEGG主要富集在细胞周期、卵母细胞减数分裂以及p53信号等通路上,且对HCC患者1年、3年和5年OS预后诊断的ROC曲线下面积AUC分别是0.801,95%CI(0.745~0.856)、0.725,95%CI(0.667~0.786)和0.711,95%CI(0.635~0.788)。结论 TPX2与HCC的发生密切相关,不利于HCC患者的生存预后,可作为HCC诊断与预后的生物标志物。

叶酸修饰蟾毒灵阳离子脂质体的制备及体外评价

目的制备叶酸修饰蟾毒灵阳离子脂质体(FA-BF-CLs),并对其进行质量评价及抗肝癌研究。方法采用薄膜-超声分散法制备FA-BF-CLs,以粒径、Zeta电位及包封率等为指标,采用单因素和Box-Behnken响应面分析法对处方及工艺进行优化。透射电镜观察脂质体显微形态,并考察其体外释放过程、溶血性及空白阳离子脂质体体外细胞安全性。采用CCK-8法比较FA-BF-CLs、BF-CLs(未加叶酸修饰的蟾毒灵阳离子脂质体)及BF-solution(蟾毒灵溶液)的体外细胞毒性。结果最佳条件为磷脂与药物质量比14.17∶1、磷脂与胆固醇质量比3.8∶1、超声时间13 min,制备得到脂质体粒径(135.5±1.40)nm,多分散系数0.192±0.025,Zeta电位(16.23±0.46)mV,包封率69.42%±2.18%。体外释放研究表明,FA-BF-CLs具有明显的缓释效果,溶血试验结果显示该载体材料无溶血现象。体外细胞安全性结果显示阳离子脂质体浓度在0~20μmol/L范围内安全无毒。体外细胞毒性表明FA-BF-CLs对HepG2肝癌细胞的抑制作用大于BF-CLs和BF-solution(P<0.0.1)。结论制备得到的FA-BF-CLs外观均一稳定、具有缓释性能,空白阳离子脂质体安全无毒,FA-BF-CLs具有更强的体外抗肝癌研究,可用于进一步的研究。

蟾毒灵联合索拉非尼通过RhoA/ROCK/HIF1α通路抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的机制

目的观察蟾毒灵联合索拉非尼对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力的干预作用及对Ras同源基因蛋白A(RhoA)/含Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)/缺氧诱导因子1α(HIF1α)通路相关蛋白表达的影响。方法取对数生长期的肝癌HepG2细胞,分别加入蟾毒灵、索拉非尼单药或联合处理24 h,CCK-8方法检测细胞增殖情况,明确后续实验药物干预浓度;将肝癌HepG2细胞分为空白对照组、蟾毒灵组、索拉非尼组、蟾毒灵联合索拉非尼组,空白对照组不进行任何处理,其余组加入相应药物培养24 h,观察肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭情况,Western blot法检测RhoA/ROCK/HIF1α通路相关蛋白表达情况。结果蟾毒灵、索拉非尼均可抑制肝癌HepG2细胞增殖,选择蟾毒灵4μg/mL、索拉非尼20μmol/L为后续实验干预浓度。各药物组肝癌HepG2细胞的迁移与侵袭率和索拉非尼组、蟾毒灵联合索拉非尼组肝癌HepG2细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、HIF1α蛋白相对表达量均明显低于空白对照组(P均<0.05),且蟾毒灵联合索拉非尼组肝癌HepG2细胞的迁移与侵袭率和各蛋白相对表达量均明显低于蟾毒灵组和索拉非尼组(P均<0.05)。结论蟾毒灵联合索拉非尼可通过调控RhoA/ROCK/HIF1α通路加强对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用,可能是两者联合使用抑制肝癌复发转移的潜在机制。