蠲脉Ⅰ号化痰消食拆方促进蛋白激酶B表达抑制内皮细胞自噬性死亡

【目的】探讨蠲脉Ⅰ号化痰消食拆方(简称化痰消食方)对自噬损伤内皮细胞保护作用的物质基础,以及对蛋白激酶B(PKB)和自噬相关的微管相关蛋白LC3、泛素结合蛋白P62表达的影响。【方法】采用递增极性溶剂法分别分离提取化痰消食方(成分为半夏、茯苓、枳实、白术、山楂、神曲)的石油醚、乙酸乙酯、乙醇以及水部位。将4个部位的提取物分别作用于过氧化氢诱导的自噬性损伤内皮细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察内皮细胞的活性,采用GC-MS(gas chromatography-mass spectrometry)分析有效部位的化学成分,并采用Western blot法观察有效部位对PKB表达及自噬的影响。【结果】石油醚部位为化痰消食方保护内皮细胞自噬性损伤的活性部位;GS-MS检测发现石油醚部位主要成分为多种脂肪酸;Western blot分析结果显示:石油醚部位能上调PKB表达、下调LC3表达,抑制LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化,并使细胞内P62表达水平升高。【结论】石油醚部位多种脂肪酸为化痰消食方有效部位,能促进细胞内PKB表达,抑制细胞内的自噬水平,从而拮抗内皮细胞的自噬性死亡。