基于高通量测序分析苗药血人参根和根瘤内生菌的多样性

目的:探究血人参根和根瘤内生细菌的组成差异,筛选优势内生菌菌株。方法:通过对16S rRNA基因进行高通量测序,对血人参根及根瘤中内生菌进行物种注释、分类、物种多样性和组间差异分析。结果:血人参根和根瘤内生菌总计含有5 574个OTU,隶属于30门79纲192目324科587属。根部的内生菌总计有5 518个OTU,在门分类水平上相对丰度较高的主要为变形菌门Proteobacteria、放线菌门Actinobacteriota,在属水平上相对丰度较高的为游动放线菌属Actinoplanes和norank_f__Kineosporiaceae属,其平均相对丰度分别为18.60%、10.05%;根瘤中内生菌总计有895个OTU,在门分类水平上相对丰度较高的为变形菌门Proteobacteria,在属水平上慢生根瘤菌属Bradyrhizobium占据绝对优势,其平均相对丰度为97.87%。血人参根瘤中内生菌的Shannon、ACE及Chao指数均显著低于根中(P<0.05)。根瘤内参与氨基酸的转运和代谢,细胞的复制、重组和修复,细胞的生物发生等功能菌群相对丰度较高。结论:血人参根瘤中内生菌以埃氏慢生根瘤菌和大豆慢生根瘤菌为主,且与根部相比,物种多样性水平低、群落结构更为单一、物种分布不均匀。

干旱胁迫及钙胁迫对血人参幼苗生长的影响

为了探讨CaCl_(2)胁迫和干旱胁迫对血人参幼苗生长的影响,分别采用不同浓度梯度的CaCl_(2)溶液和不同干旱环境对血人参幼苗进行胁迫实验。结果表明,随着土壤含水量的升高,血人参幼苗总的生物量呈上升趋势,血人参总叶绿素含量最适合的相对田间持水量为60%~65%;在极度干旱条件下,丙二醛(MDA)含量和游离脯氨酸(Pro)含量最低,过氧化氢酶(CAT)活性最强。在适宜的钙浓度(5~35 mmol/L)环境下,可以促进血人参幼苗的胚根、主根、鲜重等生长发育;在钙浓度过量时,反而会产生抑制作用。在适宜的钙胁迫浓度(5~35 mmol/L)范围内,血人参幼苗中MDA含量与叶绿素的含量有所增加,同时SOD活性、POD活性、Pro含量及CAT的活性升高。综合分析表明,钙离子浓度过高或过低均会抑制血人参幼苗的生长,其幼苗虽具有一定的抗旱性,但随着干旱程度的加深,幼苗植株的生长会受到抑制。因此,在血人参的引种繁育过程中,应注意适当的保水、补水和控制钙离子浓度。

血人参治疗创伤性慢性创面最佳活性部位的筛选及其成分分析

目的:研究血人参不同极性部位促创伤性慢性创面愈合效果,筛选出最佳活性部位并对其进行成分研究。方法:建立创伤性慢性创面,给予不同极性部位的血人参提取物,通过创面愈合情况与程度筛选出促创愈合的最佳活性部位;通过LC-MS对最佳活性部位进行全谱分析。结果:血人参不同极性部位提取物对创伤性慢性创面均有不同程度的治疗效果,其中石油醚萃取部位的治疗效果最佳;LC-MS全谱分析结果显示,石油醚萃取物中主要含大量的脂肪酰类、部分黄酮和异黄酮、羧酸及其衍生物、香豆素及其衍生物等物质。结论:血人参石油醚萃取物对大鼠创伤性慢性创面的治疗效果最佳,可能是其中的脂肪酰、黄酮、香豆素以及羧酸类化合物发挥合疗效的结果。

血人参石油醚部位化学成分研究

为深入探究血人参中的活性物质成分,该文采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、半制备高效液相色谱以及重结晶等方法对血人参石油醚部位进行了系统分离纯化,并利用现代波谱技术对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。结果表明:从血人参石油醚部位共分离得到22个单体化合物,分别鉴定为β-谷甾酮(1)、豆甾烷3,6-二酮(2)、6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮(3)、(22E)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(4)、美迪紫檀素(5)、sativan(6)、2′,4′-二羟基查尔酮(7)、6,7-dimethoxy-4-hydroxy-1-naphthoic acid(8)、对羟基苯甲酸乙酯(9)、2,4-二羟基苯甲酸乙酯(10)、(9E,11E)-13-oxo-9,11-ocatadecadienoic acid(11)、(9E,11E)-13-oxo-9,11-octadecadienoic acid methyl ester(12)、9-oxo-10E,12E-octadecadienoic acid methyl ester(13)、9-hydroxy-10E,12Z-octadecadienoic acid methyl ester(14)、pinellic acid(15)、9-oxo-10E,12E-octadecadienoic acid-(2S)-2,3-dihydroxypropyl ester(16)、β-谷甾醇(17)、白桦脂酸(18)、3β-hydroxyolean-12-en-11-one(19)、高丽槐素(20)、珊瑚菜素(21)、棕榈酸(22)。其中,化合物1-3、7、11-16均为首次从豆科植物中分离得到,化合物1-16均为首次从木蓝属植物中分离得到,化合物1-16、18、19、21均为首次从血人参中分离得到。该研究结果进一步丰富了木蓝属植物血人参的化学结构类型,为该药材的进一步开发利用奠定了科学基础。

苗药血人参研究进展及质量标志物预测分析

对血人参化学成分、药理作用进行综述,同时对其中药质量标志物(Q-Marker)进行预测。通过对近几年有关苗药血人参化学成分及药理作用文献整理综述,并基于Q-Marker的概念,从药用植物亲缘学及化学成分相似性和特有性、传统功效、传统药性、化学成分可测性等方面进行预测分析。血人参主要化合物为黄酮类、苯丙素类,其中发现苯丙素类化合物五味子苷和黄酮类化合物可作为血人参乙酸乙酯层保肝活性的质量标志物,开发前景广阔,为血人参质量标准的制定及评价体系建立提供科学依据。

血人参中化学成分鉴定及其保肝活性研究

目的快速鉴定血人参中的化学成分,并考察其保肝活性。方法该药材超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)分析采用Waters Acquity BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温35℃;ESI离子源;负离子扫描。通过自建数据库、UNIFY自带数据库检索化合物,复核其相对保留时间、精确质荷比、特征碎片等信息,并结合相关文献及裂解规律进行鉴定。采用过氧化氢(H2O2)及油酸诱导人肝细胞(HepG2细胞)损伤模型,通过四氮唑盐还原法(MTT法)、油红O染色法检测化合物对肝损伤细胞的保护作用。结果共鉴定出27个化合物,包含18个原花青素类、4个黄酮苷类、5个有机酸类,其中9个[afzelechin-catechin(3个同分异构体)、epiafzelechin-(4β→8,2β→O→7)-epicatechin-(4α→8)-epicatechin(2个同分异构体)、原花青素A_(6)、柚皮素-5-O-葡萄糖苷或其异构体、柚皮素-4′-O-葡萄糖苷或其异构体、根皮苷]为首次从该药材中发现,2个(原花青素B_(2)、根皮苷)对肝损伤细胞具有显著保护作用。结论该方法稳定可靠,可为血人参保肝功效的深入研究提供科学依据。

苗药血人参化学成分和药理作用研究进展及Q-marker的预测分析

血人参(Indigofera stachyoides Lindl.)作为我国苗族传统用药,主要分布于贵州、云南、广西等地区。血人参的主要化学成分包括黄酮类、糖苷类、甾醇类、萜类、酚酸类以及挥发油类等,其药理作用有保肝、抑菌、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗氧化及抗炎等。文章对血人参的化学成分和药理作用的研究进行归纳与总结,并结合Q-marker概念,从植物亲缘学、化学成分特有性、传统功效和药性、现代临床新用途、化学成分可测性等几个方面对其进行Q-marker预测分析。根据Q-marker的概念,可将木脂素糖苷类成分血人参苷、Schizandriside、Lyoniside和血人参鞣质A作为血人参的Q-marker,将黄酮类作为其备选物质。

论苗药血人参药理作用研究进展

在祖国医学的医药宝库中,有中药,苗药,蒙药等,诸多的药物为中华民族的健康保驾护航。苗药是祖国医药的重要组成部分,在云贵地区运用广泛。 血人参是临床中常用的苗药之一,在亚洲分布广泛。东亚主要分布在我国,目前主要集中在贵州、广西、湖北、云南等南方地区;东南亚主要分布在泰国、缅甸等国家;南亚主要分布在印度、缅甸等国家。血人参含有丰富的化学成分,目前已知主要有挥发油、甾醇体类、黄烷醇等。血人参在临床中应用较多,根据相关文献总结,血人参具有抗氧化、降糖、降脂、保肝等诸多药理作用。由于血人参为苗药,所以在临床中有些医生对该药的认知尚不深入,因此,笔者查阅国内外相关文献,对血人参的化学成分、药理作用等进行总结,以便为相关科学研究或临床应用提供一定的理论依据和前景价值基础,也为血人参在临床中广泛实用,奠定基础。

血人参的生药鉴别

目的:研究血人参的生药学特征。方法:对10个产地的血人参采用性状、显微、薄层色谱的方法进行鉴别。结果:各产地血人参药材在性状、显微以及薄层色谱方面基本没有差异。结论:研究结果可以作为鉴别血人参药材的重要依据。

血人参的薄层色谱鉴别及水分、灰分、浸出物测定

目的:为制订血人参药材质量标准提供科学依据。方法:采集不同产地的血人参药材样品,采用薄层色谱法鉴别槲皮素,并按2010年版中国药典一部附录IX H水分测定法中的第一法、附录IX K灰分测定法和附录X A醇浸出物测定法进行测定。结果:薄层鉴别能检出血人参药材中槲皮素的斑点,并且斑点清晰;血人参药材含水量不得过10.4%,总灰分不得过5.5%,酸不溶性灰分不得过4.1%,醇溶性浸出物量不低于14.5%。结论:该方法简单、准确、重复性好,为建立血人参药材质量标准提供了可靠的实验依据。

血人参种子萌发特性的研究

目的:研究血人参种子的萌发特性,明确种子适宜萌发的条件。方法:以血人参种子为试验材料,测定种子的千粒重、硬实率,采用培养皿发芽法,比较不同烫种预处理、培养温度和光照(光照和暗黑)等处理对血人参种子萌发的影响,观察萌发动态,测定其萌发率。结果:种子千粒重为4.83 g;种子的硬实率为66.67%;60℃水烫种对种子预处理,在培养温度为25℃、黑暗的培养条件下血人参种子的萌发率较高。结论:血人参种子萌发时应对种子进行60℃水烫种预处理,并在25℃的黑暗条件下进行培养。

苗药血人参的质量标准研究

目的：建立苗药血人参药材的质量标准。方法：鉴别药材性状和显微特征；采用薄层色谱法（TLC）对药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定药材中表儿茶素、2d，3a．epoxy-5，7，3’，4’-tetra-hydroxy．flavan-（4β→8）-epicatechin（成分A）的含量：色谱柱为ComatexTMC。流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1．0mYmin，检测波长为210am，柱温为30℃，进样量为5μl。结果：药材性状和粉末显微鉴别图谱清晰。血人参的TLC图斑点清晰，分离良好。表儿茶素、成分A检测进样量线性范围分别为0.2745～4．3920μg（r=O。9996）、0.103O～1．6483μg（r=0．9994）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈3％；加样回收率分别为99．76％～104．82％（RSD=2．42％，n=6）、97．98％～104．99％（RSD=2．75％，n=6）。结论：该研究所建标准可用于血人参的质量控制。

血人参中分离的异甘草素对巨噬细胞的影响及其抗炎作用机制研究

目的研究血人参中异甘草素的抗炎作用及其机制。方法采用四唑盐比色法(MTT assay,MTT)检测异甘草素对小鼠巨噬细胞的细胞毒;利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞和中性粒细胞活化模型,给予无细胞毒剂量的异甘草素处理细胞;通过格里斯法(Griess)检测异甘草素对巨噬细胞释放一氧化氮(nitric oxides,NO)的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测异甘草素对巨噬细胞炎症因子mRNA转录的影响;酶联免疫吸附法(enzyme linked immuno sorbed assay,ELISA)检测异甘草素对巨噬细胞分泌炎症因子的影响;利用流式细胞术检测异甘草素对中性粒细胞活化和释放活性氧的影响;蛋白质印迹法(western blot,WB)检测异甘草素对巨噬细胞中受体激活蛋白(receptor activator of NF-κB,NF-κB),丝裂素活化蛋白激酶(mitin-activated protein kinase,MAPKs)、干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)和信号传导及转录激活蛋白家族(signaling and transcription activator proteins family,STATs)信号通路活化的影响。结果异甘草素在无细胞毒剂量下能显著抑制巨噬细胞释放NO,能抑制肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1,MIP-1α)、单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和干扰素-β(interferon-β,IFN-β)等炎症因子的mRNA转录,同时抑制炎症因子TNF-α、IL-6、MCP-1和IFN-β的分泌;另外对中性粒细胞释放活性氧也具有显著抑制作用;Western blot结果显示异甘草素能够抑制应激活化蛋白激酶1/2(stress-activated protein kinase 1/2,JNK1/2)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2)和信号转导和转录活化因子1(signaling and transcription activator proteins 1,STAT1)的磷酸化。结论血人参中异甘草素能够通过抑制JNK1/2、ERK1/2和STAT1信号通路抑制巨噬细胞和中性粒细胞的功能,从而发挥抗炎作用。

贵州苗药血人参野生资源调查研究

采用实地样方调查和实地走仿调查相结合的方法调查研究中药材血人参植物在贵州的的野生资源状况.结果表明,贵州使用的血人参基源植物仅有1个种为豆科木蓝属植物茸毛木蓝（Indigofera stachyoides Lindl.）;在贵州,野生血人参主要分布在贵州的六枝特区、盘县、水域、紫云、关岭和贵阳等25县（市）,位于25°47′ ～26°28′N,104°49′ ～ 105°23′E的区域内,垂直分布高度在海拔1000～1 700m;其群落结构由乔木灌木草本组成有50多种伴生植物;由于生态的破坏和不合理的采挖,目前贵州资源储量约为1000t,分布面积和储量在减少而市场需求持续强劲;建议应重视和加强血人参野生资源保护,进行人工种植,保证血人参资源的可持续用.

血人参总黄酮纯化工艺的优化及其对酪氨酸酶的抑制作用研究

目的优化大孔吸附树脂分离纯化血人参总黄酮的工艺条件,研究血人参总黄酮对酪氨酸酶的抑制作用。方法以吸附率、解吸率等为考察指标,采用静态吸附-解吸试验对6种不同型号的大孔吸附树脂进行筛选,优选最佳的树脂型号。采用单因素试验考察上样液pH、上样液浓度、上样体积、上样体积流量、洗脱溶剂、洗脱液体积流量、洗脱剂体积对血人参总黄酮纯化的影响,确定最佳纯化工艺;以L-酪氨酸、L-多巴为底物,测定血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶的抑制作用,并对其抑制机理和抑制类型进行分析。结果AB-8型大孔吸附树脂对血人参总黄酮的分离纯化效果最好。最佳纯化工艺参数为:上样液pH为4、上样体积为70 mL(4.7 BV)、上样体积流量为1 mL·min^(-1)、上样液浓度为5.38 mg·mL^(-1)、洗脱溶剂为70%乙醇、洗脱剂体积流量为3 mL·min^(-1)、洗脱剂体积为120 mL(8 BV),血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用,其最大半数抑制浓度分别为88.78 mg·L^(-1)和36.46 mg·L^(-1),对二酚酶的抑制类型为可逆非竞争性抑制。结论AB-8型大孔吸附树脂可用于纯化血人参总黄酮,纯化后血人参总黄酮的纯度为46.01%,建立的工艺条件稳定可靠。纯化后的血人参总黄酮对酪氨酸酶有抑制作用,抑制类型为可逆非竞争性抑制。

苗药血人参种子采收加工及育苗技术研究初报

目的:对血人参种子进行种子生物学特性观察研究,为血人参种子采收加工提供参考;进行不同基质、不同覆土深度和不同播种方式育苗试验研究,为其育苗技术奠定基础。方法:在10月、11月、12月,分别采集野生血人参种子,观察其形态、收获数量等特点,测定千粒重、发芽率,以确定其最佳采收期和加工方法;在珍珠岩、腐殖土、河沙、菜园土不同基质中进行播种试验,确定血人参种子育苗适宜基质;在试验地进行不同覆土深度和播种方式试验,确定其种子育苗的覆土厚度及播种方式。实验结果:10、11、12月份血人参种子形态、发芽率没有显著差异,但千粒重、收获率差异显著;在4种育苗基质试验中,以腐殖土处理成苗率最高;覆土深度以1～2厘米为宜,播种方式以沟播效果为佳。

不同种源血人参种子特性和萌发差异研究

为挖掘血人参野生优质种质资源,以黔产不同种源血人参果实、种子为材料,测量其形态大小、千粒重、硬实率等性状,用培养皿发芽法研究种子的萌发特性及不同种源野生血人参种子的生物学特性和萌发差异。结果表明,不同种源血人参果实大小、种子大小、千粒重、硬实率差异极显著(p<0.01);D 10(普安县森林公园)种子的饱满度最好,D 9(六枝月亮河)种子的发芽率最高,达到82%,D 11(盘州羊场乡鼓水田)种子的发芽率最低,仅为25%;发芽周期最长为27 d、最短为18 d,D 3(望谟大湾)种子的活力指数最好。相关性分析表明,不同种源血人参种子的千粒重与种子的长径、果荚大小呈显著正相关(p<0.05);种子的长径与直径呈极显著正相关(p<0.01);种子饱满度与种子成熟率呈显著正相关(p<0.05);发芽指数与果实大小、千粒重、发芽率呈显著正相关(p<0.05);发芽势与果荚大小呈显著正相关(p<0.05),发芽势与发芽率、发芽指数呈极显著正相关(p<0.01)。种子大小、饱满度和萌发特征可作为血人参野生资源引进和新品种选育的基本依据。综合各项分析认为,D 9(六枝月亮河)产地的种子可作为黔产血人参野生优选种质资源进行开发利用。

苗药血人参提取物对衰老小鼠学习能力的影响

目的:探讨血人参提取物对衰老小鼠学习能力的影响及其可能的作用机制。方法:制备衰老小鼠模型,将其分为正常对照组、模型组、阳性对照组(脑复康0.8g·kg^-1·d^-1)、血人参高、中、低剂量组(20g·kg^-1·d^-1、10g·kg^-1·d^-1、5g·kg^-1·d^-1),观察血人参提取物对衰老小鼠体重变化的影响和学习能力的影响。采用ELISA法检测衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果:与模型组比较,从第2周开始,血人参高、中、低剂量组体重出现明显增加(P<0.05);中、低剂量组小鼠学习能力显著提高(P<0.05);与模型组比较,血人参高、中、低剂量组血清中GSH-Px含量显著升高(P<0.01)。结论:血人参提取物抗衰老效果明显,能显著提高衰老小鼠的抗氧化能力和学习能力。

苗药血人参总黄酮的分离及体外抑菌研究

目的:探讨苗药血人参中黄酮类化合物的抑菌活性。方法:以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌为受试菌株,先后采用硅胶柱层析和聚酰胺柱层析对血人参总黄酮进行了分离富集,并分别利用K-B纸片法和平板二倍稀释方式对各组分的抑菌圈直径和最低抑菌浓度(MIC)进行了测定。结果:硅胶柱层析分离出的6个组分,除对枯草芽孢杆菌无抑菌活性外,均表现有一定的抑菌活性,聚酰胺柱层析富集所得黄酮类化合物纯度达(64.2±0.3)%,MIC分别为0.625 g·L^-1(大肠杆菌)、0.3125 g·L^-1(金黄色葡萄球菌)、0.25 g·L^-1(白色念珠菌)。结论:苗药血人参总黄酮有显著的体外抑菌活性。

苗药血人参及其制剂对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠的作用研究

目的研究苗药血人参及其制剂对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠的作用。方法雄性KM小鼠,随机分为正常组、模型组、八珍颗粒阳性对照组、乙酸乙酯(YSYZ)部位高中低剂量组、芪胶升白胶囊高中低剂量组,每组10只。采用疲劳法+放血+泻下法复合造模方法。每天早上8点灌胃40%番泻叶水浸液,10点进行竭力游泳测试,下午2点给予相应药物灌胃,尾部放血0.2 g,隔2 d放一次,如此重复4周。每周观察小鼠体质量的改变;实验3周后,进行疲劳游泳时间的测定;第4周实验结束后眼球取血,ELISA法检测小鼠血浆ATP、cAMP、cGMP水平,并计算cAMP/cGMP比值。取脾、胸腺称重并计算脏器指数。结果与正常组比较,模型组小鼠皮毛稀疏且暗淡无光泽,饮食减少,鼠尾冰冷,体质量减轻,竭力游泳时间减小(P<0.01);与模型组比较,阳性药物组、YSYZ高剂量组、芪胶升白胶囊高剂量组小鼠身形匀称,活动自如,皮毛浓密、色乳白有光泽;各实验组脾指数明显高于正常组,除YSYZ部位中剂量组差异无统计学意义,其余各实验组差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);芪胶升白胶囊高剂量组脾指数高于模型组,其余各组脾指数均小于模型组,其中YSYZ部位中剂量组差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,YSYZ高剂量组、芪胶升白胶囊高剂量组小鼠血清ATP、cAMP、cGMP含量降低(P<0.01或P<0.05)。结论苗药血人参及其制剂对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠具有一定的改善作用,其作用机制可能与调节小鼠ATP、cAMP、cGMP水平表达有关。