H3N2亚型犬流感病毒血凝及血凝抑制试验的研究

为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集性最好,对小鼠、猪和牛红细胞的凝集性较差。HI试验应用鸡红细胞悬液效果最好,受体破坏酶(RDE)和高碘酸钾处理可以有效去除犬血清中非特异血凝抑制素,但高碘酸钾对血清特异性抗体有损耗。本研究筛选出H3N2亚型CIV HI试验的最佳方法,为犬流感的血清学诊断提供技术支持。

马流感病毒H3亚型血凝抑制试验抗原的研究

为研制马流感病毒(EIV)H3亚型血凝抑制(HI)试验抗原,本研究以华北地区分离的H3N8亚型EIV(A/Equine/Huabei/1/2007(H3N8))为种毒,经条件优化确定了其生产工艺。检测结果表明:制备的EIV H3亚型HI试验抗原与英国兽医参考实验室(VLA)生产的抗原具有同样的敏感性,对EIV感染马后9 d^10 d的血清可检测出抗体阳性;对马流感H3亚型灭活疫苗免疫后31 d的马血清检测抗体为阳性;检测美国肯塔基大学马病研究室提供的强阳性、中阳性和弱阳性血清以及阴性血清的效价,结果与瓶签标定的效价一致。而且,制备的抗原仅与EIV H3亚型阳性血清发生特异性反应,与EIV H7亚型、猪流感病毒H1亚型、猪流感病毒H3亚型等12种其他亚型的A型流感病毒阳性血清均不发生反应。研究结果显示,制备的抗原具有很好的敏感性和特异性,填补了国内空白,可以用于目前EIV H3亚型HI抗体的检测,为马流感的诊断和监测提供了有效的技术手段。

血凝(HA)—血凝抑制(HI)试验操作要点

兽医实验室检测禽流感和鸡新城疫抗体采用血凝(HA)-血凝抑制(HI)试验。该试验有些因素会影响试验结果,是试验的关键环节,如配制1%鸡红细胞时其浓度的高低会影响抗体滴度的高低;4单位抗原的配制需要回滴正确;试验的反应时间和温度也要符合要求。只有掌握好试验的关键点,才能得出准确无误的试验结果。对该试验的操作要点及注意事项进行了介绍。

禽流感病毒(H5N1亚型,Re-5株)血凝抑制抗原国家参考品的制备

为了研制用于禽流感病毒(AIV)H5N1亚型Re-5株重组疫苗检测的血凝抑制(HI)抗原参考品,试验采用国家现行的AIV H5亚型HI抗原制备方法,研制出AIV(H5N1亚型,Re-5株)血凝抑制抗原参考品,批号为200901。结果表明:经过8家单位对AIV(H5N1亚型,Re-5株)血凝抑制抗原协作标定,确定该批禽流感抗原的血凝效价为1∶(320±80);所研制的禽流感抗原均一稳定,无菌检验、剩余水分测定、真空度测定等各项指标均符合要求。说明该AIV(H5N1亚型,Re-5株)血凝抑制抗原可以作为国家参考品。

马流感病毒H3亚型血凝抑制试验抗原的研究

为研制马流感病毒（EIV）H3亚型血凝抑制（HI）试验抗原，本研究以华北地区分离的H3N8亚型EIV（A／Equine／Huabei／1／2007（H3N8））为种毒，经条件优化确定了其生产工艺。检测结果表明：制备的EIV H3亚型HI试验抗原与英国兽医参考实验室（VLA）生产的抗原具有同样的敏感性，对EIV感染马后9d～10d的血清可检测出抗体阳性；对马流感H3亚型灭活疫苗免疫后31d的马血清检测抗体为阳性；检测美国肯塔基大学马病研究室提供的强阳性、中阳性和弱阳性血清以及阴性血清的效价，结果与瓶签标定的效价一致。

血凝(HA)试验的改进

血凝(HA)与血凝(HI)抑制试验是畜牧兽医行业中非常重要的试验。为了能够在血凝试验中做到准确读数,研究对血凝试验进行改进,通过使用“素数”浓度进行倍比稀释,可以有效避免重叠的浓度比,使得试验结果更为准确和易于读取。通过对比试验,结果表明针对血凝价为970的某种抗原,应用传统方法结果为512或者1024,与真实值相差较大,而用改进方法检测出的结果为960,与真实值非常接近。因此,应用改进的试验方法可以更准确地检测出抗原效价,适合于临床应用。

NDV和H_9亚型AIV在血凝抑制及混合病毒在鸡胚增殖中的相互干扰

先测定NDV强、弱毒毒株和H9AIV毒株的血凝(HA)效价,并用血清分别作血凝抑制(HI)试验。将测定好的病毒液按不同比例混合,测定HA效价及血清对其抑制效价后接种SPF鸡胚。收获死胚尿囊液后测定HA、HI效价。结果显示,H9AIV和NDV之间存在比较严重的干扰现象。

单抗介导的血凝试验对H_9N_2亚型禽流感病毒的研究

利用4株鼠源抗H9N2禽流感病毒血凝素单克隆抗体与标准H9N2禽流感多克隆抗体,通过血液凝集抑制试验(Haemoglutination inhibition test,HI)分别对25株H9N2禽流感病毒进行了检测,发现4株单克隆抗体均对其中的23株H9N2禽流感病毒反应,其最高HI效价分别为:A单抗12log2,B单抗12log2,C单抗12log2,D单抗12log2;最低分别为:A单抗3log2,B单抗9log2,C单抗4log2,D单抗6log2,而对其中的2株H9N2禽流感病毒没有HI反应,其HI价均为0;然而,标准多抗对25株H9N2禽流感病毒均产生HI反应。检测结果表明2株H9N2AIV毒株血凝素蛋白出现了抗原漂变。

抗禽流感病毒H_5亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

以禽流感H5 亚型病毒免疫Balb/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合 ,用血凝抑制试验检测细胞培养上清 ,结果获得3株阳性细胞株 ,分别命名为4B6、4A3、3H1。经2次亚克隆后 ,100 %杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒H5 亚型抗体的能力。实验证明 ,所有这3株单克隆抗体仅与试验的H5 病毒株反应 ,而不能与禽流感H9 亚型病毒、鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒和鹅腺病毒等反应。间接免疫荧光试验检测结果表明这3株单克隆细胞的培养上清均能与感染H5 亚型病毒的成纤维细胞呈现亮绿色荧光。

保存与现配红细胞悬液在新城疫血凝与血凝抑制中的对比试验

为了研究红细胞悬液保存时间对新城疫血凝与血凝抑制试验的影响,同时比较用卵黄和血清检测新城疫抗体水平的结果差异,笔者在不同地区随机选取72份鸡蛋(其中16份鸡蛋对应16份血清),用保存1周的红细胞悬液和现配红细胞悬液进行了对比试验。结果显示:在新城疫血凝与血凝抑制试验中,保存1周的红细胞悬液HA试验的结果比现配红细胞悬液低2个滴度;用4单位工作量进行HA试验时,得到了相同的结果;用卵黄测得的新城疫抗体水平稍低于用血清测得的结果,但差异不明显。表明用保存1周的红细胞悬液测定卵黄中新城疫的抗体水平比用现配红细胞悬液所测得的抗体水平低接近1个滴度,并且可以用卵黄代替血清检测新城疫抗体水平。

血凝和血凝抑制试验注意事项

随着规模养鸡业的迅速发展和养殖户科学养殖意识的增强,血凝和血凝抑制试验技术越来越重要,其操作繁杂,影响其结果的因素很多,只有加强每一个环节的质量管控,严格按照规范程序操作,才能获得准确的试验结果,为科学防控提供理论依据。为此,本文从1%鸡红细胞悬液配制、试验器材的准备及操作、血凝价的判定、4单位抗原的配制、抗原回归试验、血凝抑制效价的判定、试验后的整理和消毒等方面简述了血凝和血凝抑制试验应注意的事项,以供参考。

H3亚型禽流感病毒血凝素特异性单克隆抗体的制备

以H3亚型禽流感病毒(AIV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)筛选阳性杂交瘤细胞并克隆化。结果获得了4株针对H3亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,分别命名为1D7、1F9、5A4、5F5。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为212～214。用H1、H6、H10亚型禽流感病毒各2株,H4、H5、H9和新城疫病毒(NDV)各1株进行特异性试验。结果表明:所有这些单抗仅与H3亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV及NDV反应。用28株H3亚型禽流感病毒进行排谱试验,结果证明:4株单抗均具有广谱性,其中1F9、5A4、5F5与受试的28株H3亚型AIV均反应,而1D7只与其中的26株反应。以上单抗将为控制畜禽及人类的流感提供必需的诊断试剂。

华南地区猪场猪流感和甲型H1N1/2009流感病毒的血清学调查

为了解华南地区猪场猪流感病毒（SIV）和甲型H1N1／2009流感病毒（H1N1pdm09）的流行情况，本研究采用血凝抑制试验（HI），对2013年～2014年从5个省份采集的2208份血清样品进行SIV和H1N1pdm09流感病毒血清学检测，结果显示阳性血清共1269份（57．42％），其中广东省和广西省的感染率最高（p〈0．01）。H1N1SIV、H3N2SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率分别为22．51％、32．97％和26．49％。H1N1pdm09流感病毒的抗体几何平均滴度（GMT）最高（91．93＋1．04，p〈0．05）。H1N1SIV和H3N2SIV在冬季血清阳性率最高，然而在冬末（2月）阳性率却最低（p〈0．01）。H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率在5月和9月出现高峰（p〈0．01）。母猪的H1N1SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率高于仔猪和育肥猪，但仔猪的H3N2SIV抗体阳性率却比较高。本研究为华南地区猪场SIV和H1N1pdm09流感病毒的预防提供参考依据。

甲型H1N1流行性感冒疫苗接种人群的血清抗体分析

目的:了解接种甲型H1N1流行性感冒(流感)疫苗后,人群中血清抗体的变化情况,为甲型H1N1流感疫苗的接种提供依据。方法:随机采集不同年龄已接种甲型H1N1流感疫苗人群的血清,采用血凝抑制实验检测血清中甲型H1N1流感抗体的血凝抑制滴度(HI滴度),HI滴度≥1∶40判定为阳性,同时调查采样对象的甲型H1N1流感疫苗与季节性流感疫苗的接种史。结果:甲型H1N1流感抗体阳性率为57.4%(402份/700份),抗体几何平均滴度(GMT)为1∶35.6;甲型H1N1流感抗体阳性率与GMT较高的是10～30岁组人群,较低的是60岁以上的人群;接种甲型H1N1流感疫苗后30～90天,GMT水平达到高峰(1∶56);随着季节性流感疫苗接种次数的增多,人群血清中甲型H1N1流感抗体的阳性率与GMT值反而降低。结论:青少年与成人接种甲型H1N1流感疫苗的免疫效果比儿童和老年人的好;甲型H1N1流感疫苗对人群的保护作用能持续90天左右;甲型H1N1流感抗体在0～10岁组,10～30岁组人群中持续的时间比30～60岁,>60岁组人群长;多次接种季节性流感疫苗可能会影响甲型H1N1流感抗体的产生。建议对儿童和老年人开展双倍剂量甲型H1N1流感疫苗接种;甲型H1N1流感疫苗的接种时间最好在流行期前1～3月内,并且应每年接种一次。

广西猪流感病毒H1N2亚型的血清学调查

【目的】了解广西猪群中猪流感(SI)的流行情况,为科学防控广西SI提供参考依据。【方法】以猪流感病毒(SIV)H1N2亚型毒株为抗原,采用微量血凝抑制试验(HI)方法,对2009年7月～2011年3月在广西12个市采集的997份猪血清进行SIV的血清学调查。【结果】2009年的H1N2亚型抗体阳性率为33.4%,比2010年和2011年1～3月的高;广西各市的H1N2亚型抗体阳性率为0～83.1%,其中河池和百色两市的H1N2亚型抗体阳性率较高,分别为83.1%和51.1%,崇左市为零,其他市的H1N2亚型抗体阳性为4.0%～32.1%。【结论】广西地区猪群在2009～2011年均受到猪源H1N2亚型不同程度的感染。

宜春市中心城区人群甲型H_1N_1流感血清抗体水平调查

目的通过调查检测宜春中心城区普通人群甲型H1N1流感的血清抗体水平,分析了解该市中心城区人群甲型H1N1流感病毒感染状况,为制订甲型流感防控措施提供参考依据。方法随机选择市区4家医院门诊就诊人群和2家CDC体检中心体检人群共400人,采用血凝抑制试验(HI)检测血清中甲型H1N1流感病毒抗体。结果400份血清样本中,甲型H1N1流感抗体阳性133例,阳性率为33.25%(133∕400),抗体平均滴度(GMT)为14.64。不同年龄组阳性率和抗体平均滴度(MGT)分别为≤5岁的6.56%(6.13),6–17岁52.11%(24.39),18–55岁21.05%(12.68),>55岁4%(5.99)。结论宜春市中心城区普通人群甲型H1N1流感血清抗体阳性率只有33.25%,人群免疫屏障尚未建立。