血凝(HA)—血凝抑制(HI)试验操作要点

兽医实验室检测禽流感和鸡新城疫抗体采用血凝(HA)-血凝抑制(HI)试验。该试验有些因素会影响试验结果,是试验的关键环节,如配制1%鸡红细胞时其浓度的高低会影响抗体滴度的高低;4单位抗原的配制需要回滴正确;试验的反应时间和温度也要符合要求。只有掌握好试验的关键点,才能得出准确无误的试验结果。对该试验的操作要点及注意事项进行了介绍。

微量血凝和血凝抑制试验常见问题探究

在疫苗生产中红细胞凝集试验（HA）是主要检测抗原血凝价是否符合要求的诊断方法．红细胞凝集抑制试验（HI）作为一项抗体监测技术。已在大中型养禽企业、兽医门诊和实验室工作中广泛应用。但是由于实验用材料不标准、操作不规范等因素。影响到试验结果的准确性．HI结果直接关系到疫苗的质量.HA和HI试验可用于病毒分离、鉴定、分型。测抗体抗原、免疫鉴定等。

微量血凝抑制试验检测鸡IBV抗体水平的研究

以兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理ＩＢＶ－Ｈ１２０浓缩毒作血凝抗原，应用微量血凝抑制试验（ＨＩ）方法检测未免疫鸡群及自制鸡传染性支气管炎（ＩＢ）疫苗免疫鸡群血清的ＨＩ效价。结果表明，自制ＩＢ疫苗免疫后第７天抗体水平开始上升，免疫后３０天抗体水平达１２Ｌｏｇ２，抗体水平维持１０Ｌｏｇ２时间为１００天左右，免疫后１８０天抗体水平不低于６Ｌｏｇ２。对未免疫过ＩＢ疫苗的２０个鸡群进行免疫检测发现１８个鸡群为阳性，阳性率达８３％。研究表明，该法操作简便，结果准确，为检测ＩＢ抗体水平的有效方法之一。

间接血凝抑制试验检测血清和卵黄中鸡毒支原体抗体的研究

将13只正处于产蛋期的试验鸡在接种疫苗前后分别采血、分离血清;收集鸡蛋,分离蛋黄,并分别用16%NaCl、8%柠檬酸纳和氯仿处理后,检测鸡毒支原体(MG)间接血凝抑制(HI)抗体。结果表明:接种疫苗前的血清和16%NaCl、8%柠檬酸钠和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为4.7,4.4,4.1和4.2log2;第一次接种疫苗后的血清和16%NaCl、8%柠檬酸纳和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7.4、6.7、7.1、6.9log2;第二次接种疫苗后第1次采集的血清和16%NaCl、8%柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为10.4、9.6、10.1、9.7log2,第2次采集的血清和16%NaCl、8%柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7.9、7.1、7.6和7.4log2。8%柠檬酸钠处理后的卵黄抗体效价最高,与血清抗体效价最接近。血清HI抗体效价与卵黄HI抗体效价具有良好的一致性和相关性,用卵黄可以代替血清进行HI试验。

影响鸡IBV血凝因素及HI试验抗原制备的研究

选择没有自然血凝性的三个标准IBV毒株 (M41、Gray、T株 )和四个由西北农大禽病研究室分离的陕西省地方株〔X、Fu、W和H株 (有自然血凝性 )〕 ,在非免疫鸡胚上增殖后 ,用蔗糖透析法浓缩 10倍 ,再分别采用三种方法处理 ,制备IBV -HA抗原 :1)用浓缩 4倍的兔A型魏氏梭菌培养液滤液 (R .W .F .C4)处理IBV ;2 )用 2 .5U/mlI型磷酸酯酶C(PLC1)处理IBV ;3)用 1%胰酶处理IBV。结果显示 ,除T株仍不具有血凝性外 ,其余毒株都有了较高的血凝价。IBVM41株、X株HA效价株高达 2 8,Fu、Gray、W、H株的HA效价也达 2 7- 2 9。但是 ,用方法 3)来制备HA抗原没有任何实用价值。因为 1%胰酶本身具有非常强的非特异性凝集作用 ,非特异性HA价高达 8log2 。而采用R .W .F .C4和2 .5U/mlPLC1处理IBV浓缩毒制得的IBV -HA抗原 ,除T株外 ,均能凝集鸡红细胞 ,且该凝集作用可被特异的IBV抗血清所抑制 ,而不能被ND、EDS - 76、IBD等其它鸡病阳性血清所抑制 ,说明该抗原具有较强的特异性。本试验还对影响IBV血凝试验和血凝抑制试验的各种因素进行了研究。比较了用R .W .F .C4和用 2 .5U/mlPLC1处理IBV制备HA抗原血凝价 ,结果显示二者的血凝价是一致的 ,所以完全可以用廉价的兔A型魏氏梭菌培养液代替昂贵的PLC1作为抗原处理液。

对禽流感血凝抑制试验(HI)的体会探讨

禽流感（AI）是由A型流感病毒（AIV）引起的家禽和野禽的一种从呼吸系统到全身严重败血症等多种疾病的综合征。被国际兽疫局（OIE）列为A类传染病，我国规定为一类动物传染病，并被列入国际生物武器公约动物传染病名单。

鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较

用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗，以0．5mL／只剂量接种120日龄SPF鸡10只，7d后采血分离血清，以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散（AGP）试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明：当血清HI效价等于或大于28时，两种方法的符合率可达100％；当血清的HI效价为26-27时，AGP与HI的符合率为73．33％~86．67％；当血清的HI效价为24-25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP，而且HI法简单、特异、快速、实用、方便，不但能定性还可以定量。

β—微量法血凝和血凝抑制试验失败的原因分析及解决方法

β--微量法血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验是监测鸡群免疫状态,检查疫苗使用效果的一种方便、快捷而经济的血清学方法,其检验结果不仅可为制订合理的免疫程序提供依据,而且也是指导免疫工作的准则.

用血凝抑制实验(HI)检测非典型鸡新城疫

非典型鸡新城疫(CND)是近10多年来一些专家、学者应用的新名词,由于现在鸡群普遍进行了新城疫的免疫接种,使得新城疫的发病向非典型化转变。

禽流感与鸡新城疫的血凝和血凝抑制试验操作要点及注意事项

血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验是科学评估和分析禽流感与鸡新城疫疫病流行状况及免疫效果的一个重要手段和方法。虽然方法简单，但如果操作不规范极易导致试验结果偏差，本文着重对禽流感与鸡新城疫的HA和HI试验的操作要点及注意事项进行阐述和分析，对正确掌握试验方法，提高试验准确性，避免或减少试验误差具有重要的指导意义。

鸡新城疫血凝抑制试验的质量控制

鸡新城疫血凝抑制试验（HI试验）是诊断新城疫疫病、掌握鸡群动态、制定免疫程序的重要手段,因为其快捷、成本较低、便于操作、能够处理大量的样品,所以成为动物疫病实验室常用的检测方法.但是很多从业人员缺乏系统的血清学检测知识,容易出现试验结果偏差,甚至误判,造成新城疫的发生和流行,给鸡场带来巨大的经济损失.

血凝(HA)试验的改进

血凝(HA)与血凝(HI)抑制试验是畜牧兽医行业中非常重要的试验。为了能够在血凝试验中做到准确读数,研究对血凝试验进行改进,通过使用“素数”浓度进行倍比稀释,可以有效避免重叠的浓度比,使得试验结果更为准确和易于读取。通过对比试验,结果表明针对血凝价为970的某种抗原,应用传统方法结果为512或者1024,与真实值相差较大,而用改进方法检测出的结果为960,与真实值非常接近。因此,应用改进的试验方法可以更准确地检测出抗原效价,适合于临床应用。

血凝与血凝抑制试验

HA是血凝试验,HI是血凝抑制试验。HI试验广泛应用于各大养殖禽基地检测禽流感病毒各亚型抗体。做好此试验对提高养殖业生产、增加经济效益有决定性的作用。2022年7月20日,接到盲样比对任务,共6份样品,试验具体操作步骤如下。

血凝抑制试验中易出现的问题及其纠正措施

1 标准阳性对照血清的抗体效价与原结果误差大于1个滴度 4个血凝单位（HAU）抗原配制不准确。4个HAU抗原要现用现配，混悬液要混匀，配好的抗原室温下放置不得超过4个小时，不可反复冻融。为防止4个HAU抗原配制不准确，在作HI试验前必须做回归试验。在微量反应板的1-4排的1-4孔内各加入50微升PBS液。取已配好的4个HAU抗原混匀液50微升加入反应板的第1孔内混匀后吸取50微升加入第2孔，依次倍比稀释至第4孔，

影响禽流感血凝及血凝抑制试验结果的因素及操作规范

禽流感病毒、鸡新城疫病毒均能凝集鸡的红细胞,这种红细胞凝集现象可以被特异性免疫血清抑制,可用于检测禽注射疫苗后抗体应答水平及证实是否曾感染,广泛应用于禽流感等重大动物疫病防控中。HA-HI试验经济、方便,结果可靠,作为WHO采用的全球禽流感监测方法,也被纳入我国高致病性禽流感诊断技术的国家标准。在实际操作中,多种因素均会影响血凝抑制试验结果,从而导致试验结果不准确。笔者长期从事实验室检测工作,参考行业相关资料,现将影响HA-HI试验结果的因素作一分析。