中国对虾血淋巴凝集素的血凝活性与促噬活性

１９９９年８月，运用血凝活性测定法分别检测中国对虾血淋巴凝集素、血淋巴液、血细胞、肌肉、肠、肝胰腺和甲壳的血凝活力，并运用■啶橙血细胞吞噬测定法检测血细胞的吞噬活力，同时测定了经注射中国对虾副粘病毒提纯液后血淋巴凝集素血凝活力及血淋巴液抗菌活力、酚氧化酶活力、溶菌活力。结果表明，血淋巴凝集素主要分布在血淋巴液和血细胞中；该凝集素对人（Ａ、Ｂ、Ｏ型）、鸡和兔红细胞及其醛化红细胞的凝集具有一定专一性；对血细胞吞噬异物具有促进功能；注射副粘病毒提纯液后，血淋巴凝集素凝集活力变化和血淋巴液抗菌活力、酚氧化酶活力。溶菌活力变化相一致。

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅰ．菌毛抗原及其血凝活性测定

Ｎｏ．１和Ｎｏ．２两株大肠杆菌产生一种新菌毛抗原（暂定名Ｆ１９８７），并有性菌毛形成；菌毛直径３．６３６ｎｍ，性菌毛直径４．２ｎｍ。抗Ｄ－甘露糖血凝试验（ＭＲＨＡ）表明：本菌毛抗原具有独特的血凝谱，能稳定地凝集人（Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ）及貂的红血球，不凝集豚鼠、绵羊、山羊、马、牛、家兔、犬、貉子、小白鼠、鸡、鸽、鹌鹑等动物的红血球，对猪红血球凝集不稳定；血凝作用仅能被相应菌毛因子血清所抑制，不被Ｋ＿８８、Ｋ＿９９、Ｆ＿４１，及ＣＦＡ／Ⅰ、ＣＦＡ／Ⅱ等菌毛因子血清所抑制。血凝作用存在４℃－３７℃－４℃的凝集－解脱－复凝集现象。用Ｍｉｎｃａ培养基做３７℃培养１８～２４ｈ，可使菌毛抗原良好表达。在玻片凝集反应、反向间接血凝及反向间接血凝抑制试验中，本菌毛抗原与动物中常见的Ｋ＿８８、Ｋ＿９９、９８７Ｐ、Ｆ＿４１，及人源ＣＦＡ／Ⅰ、ＣＦＡ／Ⅱ等菌毛抗原不存在类属反应。

35种大型真菌的血凝活性测定

凝集素(Lectin)是非免疫原的,与糖专一性结合的,能凝集细胞或沉淀含糖大分子的蛋白质或糖蛋白[1]. 目前所知的凝集素都是蛋白质,而且大多数含有共价结合的糖,凝集素在研究细胞膜结构功能、细胞免疫和分子识别等方面的作用日益引起人们的重视.国内已从半夏、芝麻、泽泻[2]等材料中提取得到凝集素,并对它们的特性进行了研究.

2株弱血凝活性H9N2亚型禽流感病毒特性的研究

试验旨在对2株血凝活性较弱的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)进行病毒特性的研究。采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究。2株病毒被确定为A型H9N2亚型AIV;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80~120nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50℃均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复;均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID50均为1×10^(-7)/0.2mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14天在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体。研究结果表明,上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型AIV。

92种中草药的血凝活性测定

凝集素在研究细胞膜结构功能、分子识别、细胞免疫等方面的应用正不断扩大并日益引起重视．本实验选用了39科92种中草药的干制品（均未经炮制处理），用NaCl－磷酸盐缓冲液（PBS）提取、离心，取上清液在96孔V型微量血凝板上进行血凝活性效价测定．结果表明，阳性样品分属14科23种（占25％）均能使充红血球凝集，其中12种能使人红血球凝集．凝集效价最高为百合科的卷叶黄精，最低为百合科滇黄精和玉竹黄精．

溶菌酶释放蛋白介导猪链球菌2型的血凝活性

比较了猪链球菌 2型 (SS2 )MRP+ 菌株HA980 1和MRP-菌株 0 0 64 44的血凝特性及溶菌酶释放蛋白 (MRP)在血凝过程中的作用。 2株菌均能凝集人A、B、O型及猪、兔、BALB/c小鼠、豚鼠、绵羊、山羊、水牛的红细胞 ,不凝集鸡、鲫鱼、鲤鱼、金鱼的红细胞 ,且对人、猪、兔、BALB/c小鼠、豚鼠红细胞的凝集价极显著高于绵羊、山羊和水牛 (P <0 .0 1) ;MRP+ 菌株对人、猪、兔、BALB/c小鼠和豚鼠红细胞的凝集价均极显著高于MRP-株 (P <0 .0 1)。MRP+ 株的血凝活性对热处理极其敏感 ,且凝集速度和反应温度呈负相关。半乳糖、胰酶预处理MRP+ 株菌体能完全阻断其血凝 ,葡萄糖、甘露糖、乳糖、蔗糖、过氧化氢、巯基乙醇对其则无明显影响。用纯化的MRP处理红细胞、抗MRP兔血清和MRP的单克隆抗体处理菌体 ,均能显著降低MRP+ 菌株的凝集价 (P <0 .0 5 ) ,但不能完全抑制 ;用抗MRP-菌株兔血清处理菌体 ,也能显著降低MRP+ 株凝集价。试验证明 :MRP是SS2的黏附素 ,具有半乳糖特异性受体 。

35种大型真菌的血凝活性测定

实验选用了分布于西藏林芝的 18科 3 5种野生大型真菌的干制品 ,用PBS提取、离心 ,取上清液在 96孔V型血凝板上进行血凝活性效价测定。结果表明 ,能使兔红血球凝集的阳性样品分属 16科 2 9种 ,占 82 86%。凝集效价最高为鹅膏菌科豹斑鹅膏菌 ,最低为簇生黄韧伞、红菇蜡伞。

鸡新城疫病毒(NDV)HN蛋白基因核酸疫苗的构建与血凝活性测定

将NDV弱毒株长春株表面糖蛋白HNcc基因和强毒株四平株HNsp分别插入到核酸疫苗质粒pIRES1中 ,置于CMV启动子的调控之下 ,构建成核酸疫苗表达质粒pIRHNC 及pIRHNS。经酶切鉴定插入正确后 ,用脂质体法转染BHK细胞 ,并于转染后 2 4h、4 8h、72h和 96h收获细胞 ,同时用G4 18进行筛选 ,待筛选细胞长成单层后收获一次细胞。取细胞裂解液检测其血凝活性。通过血凝试验表明两核酸疫苗质粒中的HN蛋白基因均获得表达并具有类似与天然蛋白的蛋白活性 ,且G4 18筛选后表达量高于筛选前的表达量 ,HNC活性略高于HNS。

西藏21种真菌的血凝活性测定

选用了21种野生真菌,分别以PBS(磷酸缓冲液)浸提,浸提液进行兔红血球血凝活性测定,结果显示:冬虫夏草(Cordycepssinensis)、蜜环菌(Armillariellamellea)、翘鳞肉齿菌(Sarcodonimbricatus)等不能使兔红血球凝集,显阴性;其余真菌均能使兔红血球凝集,其中以棱柄白马鞍菌(Helvellacrispa)和美味牛肝菌(Boletusedulis)效价最高26;盘状马鞍菌(Helvellapezizoids)次之25;其余的均为20～23。取PBS浸提效价较高的6种样品棱柄白马鞍菌、盘状马鞍菌、真姬离褶伞(Lyophyllumshimeji)、红菇腊伞(Hygrophorusrussula)、美味牛肝菌、离褶伞(Lyophyllum)等分别用Tris、NaAcetate(乙酸钠)、Glycin(甘氨酸)等不同pH缓冲液浸提,浸提液进行兔红血球血凝活性测定,结果显示:显弱酸性或弱碱性的缓冲液浸提时,浸提液对兔红血球血凝活性效价高于中性缓冲液,浸提真菌样品时最好使用弱酸或弱碱性缓冲液。

“兔瘟”病毒血凝活性糖蛋白保护作用的探讨

本文用结合了人 O 型红细胞的“兔瘟”病毒接种兔,探讨了有血凝活性的兔瘟病毒糖蛋白的保护作用。结果“兔瘟”病毒与人 O 型红细胞结合的复合物不能致死兔,说明兔瘟病毒血凝活性糖蛋白与保护作用有关。其机理尚有待于今后研究。“兔瘟”病毒具有凝集人 O 型红细胞的特性,其血凝素为病毒衣壳上的一种糖蛋白,本文对兔瘟病毒血凝活性糖蛋白的保护作用进行了初步探讨,现报告如下。

樗蚕蛹血淋巴中的血凝活性物质

樗蚕蛹血淋巴中的血凝活性物质李树英（辽宁省农业科学院大连生物技术研究所）凝集素（ｌｅｃｔｉｎ）是一类能与糖类特异性结合并能使细胞凝集的蛋白质，存在于动植物细胞膜和细胞内，在细胞间的粘着、靶组织的识别、机体的生长发育，肿瘤的形成等方面都起着重要的作用［...

猪瘟病毒血凝活性

日本全国农业协同工会连合会家畜卫生研究所的西村雅明,在第121届日本兽医学会(1996年4月)上报导了猪瘟病毒的血凝活性。他用该病毒ALD株在CPK细胞上进行培养,精制出病毒粒子。氯化铯密度梯度离心后,精制的病毒粒子密度为1.15g/ml。

人轮状病毒的血凝活性

早已证实牛和猴轮状病毒都具有凝集人和其它动物红血球的血凝素,但对人轮状病毒的血凝素及其血凝试验,迄今尚无确证的报告。作者利用三株人轮状病毒进行研究,证实人轮状病毒也具有血凝活性。

超声波-微波辅助提取杜仲叶多糖工艺优化及其体外抗凝血活性分析

为开发我国丰富的杜仲叶资源,研究超声波-微波辅助提取杜仲叶多糖的最优工艺条件及其理化性质和体外抗凝血活性。首先通过单因素实验确定超声波功率、提取温度、微波功率、料液比、提取时间等影响多糖得率因素的范围,然后通过Plackett-Burman试验筛选关键影响因素,再采用Box-Behnken试验对工艺条件进行优化,分析了所得杜仲叶精制多糖的分子量、单糖组成等理化性质及活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)等抗凝血指标。结果表明,料液比、提取时间、提取温度为关键影响因素,最优提取工艺条件为超声波功率130 W、提取温度49℃、微波功率200 W、料液比1:30(g:m L)、提取时间20 min。在此条件下,杜仲叶多糖的实际得率为4.02%±0.03%,与理论得率4.08%接近。所得杜仲叶精制多糖的重均分子质量(M_(w))为1653 kDa,单糖组成及摩尔比为果糖37.3%、葡萄糖35%、N-乙酰-D氨基葡萄糖14.6%、半乳糖8.6%、阿拉伯糖4.4%。分析结果显示,杜仲叶多糖为β型酸性多糖。与阴性对照相比,杜仲叶多糖能极显著延长APTT(P<0.01),而当杜仲叶多糖浓度为8 mg/mL时,PT、TT亦能极显著延长(P<0.01),说明杜仲叶多糖主要通过内源性途径影响凝血系统,同时也能够通过外源性、共同途径来影响凝血过程。此研究可为我国丰富的杜仲叶资源的高值化开发利用提供理论依据和技术参考。

凝血因子Ⅷ和凝血因子Ⅸ活性检测影响因素的分析

目的 验证离心力对凝血因子FⅧ(FⅧ)活性和凝血因子FⅨ(FⅨ)活性检测的影响。方法 用全自动血凝分析仪测定室温700 g、1500 g、396 g和4℃1000 g、1500 g离心15 min以及4℃2700 g离心10 min,不同离心力条件下即刻和冷冻后48 h FⅧ和FⅨ的活性并进行数据统计分析。结果 6种不同离心方法得到的血浆,不管是立即检测还是冻存后检测,FⅧ和FⅨ的活性水平在不同离心力条件下没有显著性差异(P>0.05),同一离心力条件下冷冻后FⅧ活性水平跟即刻检测结果有统计学差异(P<0.05),同一离心条件下FⅨ活性在即刻和冷冻后检测结果无统计学差异(P>0.05)。结论 从离心机类型、离心力转速到离心时间和离心温度多方面分析,在一定离心力范围内不同离心力对FⅧ活性和FⅨ活性检测的影响不大,冻融会影响凝血因子Ⅷ活性水平检测,凝血因子Ⅸ活性检测不受冻融影响。

梧桐子化学成分及其体外促凝血活性

目的研究梧桐Firmiana simplex(L.)W.Wight种子的化学成分及其体外促凝血活性。方法梧桐子85%乙醇提取物采用大孔吸附树脂、硅胶、MCI、ODS、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40F凝胶柱色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用凝血四项试剂盒测定其体外促凝血活性。结果从中分离得到18个化合物。化合物1~5、7~8、10~11、13均有促凝血作用。结论化合物2~7、9~11、13~17为首次从梧桐属植物中分离得到,化合物12为首次从该植物中分离得到。化合物2~3有很好促凝血活性,效果与云南白药相当,化合物1、5、8、10有良好促凝血活性,化合物4、7、11、13有一定促凝血活性。

菜豆凝集素血凝活性与品种的关系及稳定性的研究

以8个品种菜豆为原料,采用生理盐水-超声法提取凝集素。以血凝反应后上清液的吸光值为指标,评价菜豆品种、收获季节、新鲜度与血凝活性的关系及稳定性。试验结果表明:血凝活性从高到低依次为几豆、黄金勾、将军、家雀蛋、大马掌、豇豆、73-8、架豆王。菜豆的毒性秋季高于春季,成熟新鲜的菜豆高于储存的菜豆。血凝活性随温度增高而下降,60℃上下降明显,但100℃时仍具有血凝活性。完全失去血凝活性的条件为煮沸时间40min,pH4.0或8.0。

H9N2流感病毒在鸡胚中繁殖规律及血凝活性的研究

为了研究H9N2流感病毒在鸡胚中的繁殖规律及其血凝活性，试验用H9N2河南分离毒株接种鸡胚，对收获的尿囊液进行10倍系列稀释，选取不同浓度尿囊液分别接种不同日龄鸡胚，测定不同日龄鸡胚接种病毒后尿囊液产量及其血凝效价，探讨影响毒株血凝活性的因素。结果表明：10日龄鸡胚接种1×10-5病毒时收获的尿囊液产量最多且血凝效价最高；筛选分析影响H9N2病毒血凝活性因素时发现，缓冲液的pH值为3．0—5．5时发生溶血，水浴温度为70～80℃时几乎完全丧失活性。

5种虫媒病毒的血凝活性及血凝交叉抑制试验的研究

目的 :研究新引进的 5种虫媒病毒 :马雅罗病毒 (MAY)、西门利克病毒 (SFV)、墨累谷脑炎病毒 (MVE)、伊利乌斯病毒 (ILH)和布尼安姆韦拉病毒 (BUN)的血凝及血凝交叉抑制活性 ,了解这 5种虫媒病毒的血清学关系。方法 :对 5种虫媒病毒进行血凝试验 ;制备 5种病毒的抗血清 ,采用MAY ,SFV ,MVE ,ILH ,BUN ,基孔肯雅病毒 (CHIK) ,西尼罗病毒 (WN) ,流行性乙型脑炎病毒 (JBE)抗血清与 5种虫媒病毒进行血凝交叉抑制试验。结果 :5种病毒在合适的条件下具有使鹅红细胞凝集的能力 ,MAY ,SFV ,MVE ,ILH ,BUN的血凝最适pH分别为 6.4 ,6.4 ,7.0 ,6.6,6.4 ;在披膜病毒科和黄病毒科中同一科内的病毒具有明显的血凝交叉抑制反应。结论 :MAY ,SFV与CHIK血清学关系密切 ;MVE ,ILH和JBE ,WN的血清学关系密切 ;BUN与试验的披膜病毒和黄病毒科病毒血清学关系较远。