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鹅源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析 被引量:14
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作者 万洪全 吴艳涛 +3 位作者 刘秀梵 彭大新 刘文博 张如宽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期176-178,共3页
Six isolates of Newcastle disease virus were derived from south and east China regions during the disease outbreaks called "avian paramyxovirus infection of geese" or "geese paramyxovirus infection"... Six isolates of Newcastle disease virus were derived from south and east China regions during the disease outbreaks called "avian paramyxovirus infection of geese" or "geese paramyxovirus infection",and partial sequence analysis of hemagglutinin-neuraminidase(HN) gene was carried out to identify the genetic characteristics of these goose isolatesA 1905 nucleotide portion of HN gene of each of the 6 isolates was sequenced,the results revealed that the coding region of their HN genes are all 1716 nucleotides in length,which can encode 571 amino acid residues aloneThe coding region is followed by a noncoding sequence of 189 nucleotidesThough they diverged only 08%-37% from each other in the nucleotide sequences of coding region,they differed by 175%-179% to F48E8, a standard challenge strain of chicken originCysteine residues are well conserved throughout the amino acid sequences,while the number of the potential glycosylation sites varys from 4 to 6Residue positions Thr 48,His 54,Ser 77,Ala 266,His 340 and Lys 384 are also highly conserved in the 6 goose isolatesThe corresponding residues in other NDV strains are commonly Met 48,Ser 54,Asn 77,Ile 266,Tyr 340 and Glu 384However,the sequences of receptor-binding related regions show no difference to the 14 reference strains from domestic or 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 血凝素 神经基因 序列分析
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新城疫病毒F_(48)E_8株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与鉴定 被引量:17
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作者 刘伟忠 吴艳涛 +3 位作者 刘秀梵 张如宽 彭大新 姜焱 《中国兽医科技》 CSCD 1997年第6期16-18,共3页
应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获取新城疫病毒F48E8株的血凝素-神经氨酸酶基因。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长约1.93kb,与预期结果相符。将其克隆入质粒载体pGEM-3Zf(+)中。
关键词 新城疫病毒 血凝素 神经 基因克隆 杂交
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表达鸡新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的重组腺病毒对肝癌细胞HepG-2的抑制作用 被引量:6
3
作者 温中梅 李霄 +6 位作者 刘妍 高鹏 阚式绂 王卓越 王宇航 彭丽萍 金宁一 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期350-353,共4页
目的探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;AnnexinV染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO... 目的探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;AnnexinV染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspase1、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化。结果Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100MOI,作用时间为48h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%~35.04%);AnnexinV染色结果显示,Ad-HN感染48h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性。结论Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 重组腺病毒 肝癌 抗肿瘤作用
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鸡新城疫病毒F48E9株血凝素神经氨酸酶基因免疫诱导免疫保护的初步研究 被引量:6
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作者 刘胜旺 孔宪刚 +2 位作者 童光志 马云燕 卢景良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1565-1569,共5页
将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空... 将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空质粒作为对照。结果表明 ,新城疫基因疫苗能够诱导机体产生新城疫病毒特异的血清IgG抗体反应 ,但产生抗体所需的时间较长 ,抗体滴度的增加较为缓慢。人工接种新城疫强毒后 ,基因疫苗免疫组 4 / 6的鸡得到保护 ,而且保护鸡具有明显的抗体反应 ,2只鸡未得到保护 ,但其死亡时间明显迟于对照组鸡 ,死亡鸡具有典型的新城疫病毒感染鸡的病理形态学变化。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒F48E9株 血凝素-神经氨酸酶基因 诱导 免疫保护 基因免疫 基因疫苗
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鸭新城疫病毒河北分离株血凝素-神经氨酸酶蛋白基因序列分析
5
作者 陈立功 张芳 +5 位作者 董兵 翟文栋 刘聚祥 李妹玲 李玲 任玉红 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期81-85,118,共6页
为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶(haemagglutinin-neuraminidase protein,HN)蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明:该病毒的HN基因长2 002bp,... 为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶(haemagglutinin-neuraminidase protein,HN)蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明:该病毒的HN基因长2 002bp,含有1个长为1 716bp的完整开放阅读框架(Open reading frame,ORF),编码571个氨基酸,符合强毒株的特征。同源性分析表明,该毒株的HN基因与35株参考毒株间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为71.8%-99.1%和83.4%-98.9%。遗传进化分析表明,该毒株与基因VIId亚型参考毒株关系较近,属同一分支,与疫苗株B1、LaSota、Mukteswar株和I类毒株关系较远。因此,须加强河北省水禽NDV的监测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经蛋白 序列分析
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河南省急性呼吸道感染病例人副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶基因特征分析
6
作者 僧明华 赵升 +4 位作者 杨凯朝 胡乃月 张智博 徐瑾 郭永豪 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期265-270,共6页
目的了解河南省急性呼吸道感染(ARI)病例中人副流感病毒3型(HPIV3)血凝素-神经氨酸酶(HN)的基因特征。方法对河南省漯河市采集的严重急性呼吸道感染(SARI)病例标本和郑州市采集的流感样病例(ILI)标本进行人副流感病毒(HPIVs)核酸检测, H... 目的了解河南省急性呼吸道感染(ARI)病例中人副流感病毒3型(HPIV3)血凝素-神经氨酸酶(HN)的基因特征。方法对河南省漯河市采集的严重急性呼吸道感染(SARI)病例标本和郑州市采集的流感样病例(ILI)标本进行人副流感病毒(HPIVs)核酸检测, HPIV3检测阳性标本使用RT-PCR法进行HN基因扩增并测序, 使用CExpress以及MEGA7.0软件进行序列编辑、进化树构建和基因特征分析。结果漯河市和郑州市共采集ARI咽拭子标本374份, 其中HPIV3核酸检测阳性标本20份(5.3%), 对阳性标本进行靶基因扩增后获得18条序列, 经分析全部为C3亚群, 其中有16条序列为C3f基因型, 有2条序列为C3a基因型。18株HPIV3的HN基因序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%~100.0%和99.3%~100.0%, 与原株型Wash/47885/57相比差异较大, 发生了12处共同的氨基酸突变, 其中H295Y、I391V、D556N和I53T是功能相关突变位点。与流行株China/BCH4210A/2014相比同源性较高, 未发生共同的氨基酸突变, 未发现新的功能相关突变位点。结论河南省近年流行的HPIV3为C3亚型的C3f和C3a分支, 可能建立了本土循环流行。应对HPIV3的C3亚型进行持续深入的监测, 为防控HPIV3相关疾病提供科学依据。 展开更多
关键词 人副流感病毒3型 急性呼吸道感染 血凝素-神经 基因特征
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青岛市急性呼吸道感染儿童中人副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶基因特征分析 被引量:6
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作者 郝康宇 刘子然 +5 位作者 宫金伶 孙睿 张凤 王文静 高嘉禾 汪照国 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期626-631,共6页
探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型(HPIV-3)的感染情况,并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)基因特征。本研究为横断面研究,青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019年12... 探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型(HPIV-3)的感染情况,并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)基因特征。本研究为横断面研究,青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019年12月期间,每月随机采集急性呼吸道感染(ARTI)儿科患者的咽拭子样本,总共1674份,采用多重实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,筛查HPIV-3阳性样本。采用巢式PCR方法扩增HPIV-3阳性样本HN全长基因并进行序列测定,序列结果与GenBank中HPIV-3的代表株进行对比分析,建立系统进化树。结果显示,1674份咽拭子样本中,HPIV-3阳性有90份,检出率为5.37%,其中,6岁以下儿童占97.78%(88份)。HPIV-3阳性病例主要分布在春季和夏季。通过巢式PCR方法扩增得到44株HPIV-3 HN基因全长序列,序列比对及进化分析表明,HPIV-3 HN基因属于C3基因亚型的C3a和C3b分支,其中,C3a亚型有30株,C3b亚型有14株。44株青岛分离株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.0%~100.0%和98.5%~100.0%。综上,2018至2019年间,HPIV-3 C3基因型的C3a和C3b分支在山东省青岛市地区循环流行,其HN基因型变异较小,进化上具有一定的地域特征。 展开更多
关键词 副流感病毒3型 呼吸道感染 血凝素-神经蛋白 系统进化分析
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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量:7
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作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页
血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF... 血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF鸡胚尿囊毒RNA,RT-PCR扩增完整的NA cDNA基因,将其克隆到载体pSY538中的禽痘病毒早晚期启动子 LP2EP2的下游,然后再将含有启动子的 NA基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+LacZ)中,构建了HA、NA双重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+NA+LacZ),将它与禽痘病毒疫苗株S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、PCR鉴定等,结果表明已获得一株能同时稳定表达HA和NA蛋白的重组禽痘病毒,为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经基因 重组禽痘病毒
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广州2006年乙型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特性分析 被引量:4
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作者 李向忠 吴新伟 +3 位作者 刘维斯 王鸣 陈艺韵 伍业健 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期356-359,共4页
为了解2006年广州地区流行的乙型流感病毒株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的基因特性,选择病原学监测病毒株和暴发性疫情病毒株,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,通过PCR方法扩增乙型流感病毒HA和NA全长基因,将扩增的DNA片段接入T—A... 为了解2006年广州地区流行的乙型流感病毒株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的基因特性,选择病原学监测病毒株和暴发性疫情病毒株,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,通过PCR方法扩增乙型流感病毒HA和NA全长基因,将扩增的DNA片段接入T—A克隆载体进行测序,并使用DNAStar软件对测序结果进行分析。结果显示:不同来源的流感病毒株HA的同源性为99%以上,都属于Victoria系;不同来源的病毒株NA同源性为98%以上。HA和NA的种系发生树分析表明:病原学监测毒株同源性更接近,而暴发性疫情毒株的同源性则相对较为分散。所有毒株与WHO推荐的2005-2006年度疫苗株B/Shanghai/361/2002的同源性只有88.9%~89.7%,说明该年度的流感疫苗对乙型流感不能提供最佳的保护。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素 神经 种系发生树
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从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位 被引量:3
10
作者 孙林 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 黄金林 彭大新 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期428-431,共4页
以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素_神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20... 以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素_神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20。竞争ELISA试验表明,CLONE20与M22的结合能被新城疫弱毒株LaSota特异性抑制,抑制率达67 3%。经测序,获得CLONE20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用。动物试验结果表明,CLONE20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体。以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经 单克隆抗体 亲和筛选 模拟表位
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猪流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:3
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作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期162-167,共6页
克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了猪流感病毒H1N1 HA、NA基因序列,为猪流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒H1N1 血凝素 神经 克隆表达
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副黏病毒Tianjin株重组血凝素-神经氨酸酶单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用 被引量:3
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作者 李霞 李晓眠 +5 位作者 石立莹 袁立军 王卿 王文秀 李梅 侯凯 《天津医药》 CAS 北大核心 2008年第5期324-327,共4页
目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA... 目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测104例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本。结果:获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株G7H4D3、G7D9G3和G7G7E7。3株单克隆抗体与副黏病毒Tianjin株有较高结合活性,与甲、乙型流感病毒,新城疫病毒(NDV),人副流感病毒(hPIV)1型、3型、肺炎支原体均无交叉反应性。ELISA相加试验和阻断试验表明,3株单抗识别相同或相近表位区域,识别的表位在抗病毒免疫应答中处于免疫优势地位。双抗体夹心ELISA法检测阳性率为1.92%(2/104)。结论:与RT-PCR和间接ELISA法比较,双抗体夹心ELISA法,具有敏感性高、特异性强的优点,适于临床检测使用。副黏病毒Tianjin株是婴幼儿下呼吸道感染的重要致病因子之一。 展开更多
关键词 禽副黏液病毒属 抗体 单克隆 血凝素 神经 重组蛋白质类 联免疫吸附测定
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流感病毒血凝素基因、神经氨酸酶基因在小鼠中的免疫效果观察 被引量:5
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作者 周旭 李益民 +2 位作者 侯玲 王若愚 戴欣 《微生物学免疫学进展》 2001年第1期15-19,共5页
流感病毒血凝素基因 ,神经氨酸酶基因免疫BALB/c小鼠 ,获得特异阳性抗体反应 ,抗体滴度与基因免疫量呈正相关性 ,各实验组免疫小鼠抗同型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,血凝素基因免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,神经氨酸... 流感病毒血凝素基因 ,神经氨酸酶基因免疫BALB/c小鼠 ,获得特异阳性抗体反应 ,抗体滴度与基因免疫量呈正相关性 ,各实验组免疫小鼠抗同型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,血凝素基因免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,神经氨酸酶基因免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 75 % ,血凝素基因与神经氨酸酶基因联合免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 10 0 %。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素基因 神经基因 免疫 免疫效果
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甲型H1N1流感重症患者病毒血凝素和神经氨酸酶基因特性分析 被引量:2
14
作者 石伟先 卢桂兰 +7 位作者 陈维军 刘建荣 张兰荣 邓海君 吴伟力 李洁 王全意 黄芳 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期108-111,共4页
目的通过分析2009-11—02~12—04期间北京市6例甲型H1N1流感重症患者咽拭子中病毒的血凝素、神经氨酸酶基因特性,了解其基因进化特点,以期对下一步甲型H1N1流感的防控和重症的治疗提供理论依据。方法使用实时荧光PCR方法,检测重症... 目的通过分析2009-11—02~12—04期间北京市6例甲型H1N1流感重症患者咽拭子中病毒的血凝素、神经氨酸酶基因特性,了解其基因进化特点,以期对下一步甲型H1N1流感的防控和重症的治疗提供理论依据。方法使用实时荧光PCR方法,检测重症患者样本为甲型H1N1流感病毒阳性样本,利用测序引物扩增血凝素、神经氨酸酶基因,测定核苷酸序列,利用生物信息软件拼接序列;分析重要基因位点,对其进行基因进化、耐药性分析。结果6件测定样本血凝素、神经氨酸酶基因与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)核苷酸、氨基酸的同源性分别为99.2%及99.5%,有8个血凝素基因的氨基酸发生替换,为65、100、145、185、216、220、338及391位,其中145位位于抗原决定簇A区,220位位于抗原决定簇D区,同时是受体结合位点的后壁;有5个神经氨酸酶基因的氨基酸发生了替换,为59、106、232、248及365位,其中106、232、248位位于酶活性区域;未发生神经氨酸酶基因275位H→Y的替换。结论北京市甲型H1N1流感重症患者病毒血凝素和神经氨酸酶基因与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)高度同源,部分血凝素基因、神经氨酸酶基因有氨基酸替换,但其作用不清。所有测定样本未发生对达菲类药物的耐药性突变。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感 重症 血凝素 神经 基因特性
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河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特征分析 被引量:5
15
作者 僧明华 杨凯朝 +2 位作者 王文慧 赵升 徐瑾 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2021年第6期859-865,共7页
目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22... 目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22株H3N2型流感病毒株进行HA和NA基因测序,使用生物信息学软件分析其分子特征。结果:河南省H3N2亚型流感病毒分离株的HA基因和NA基因与当年度推荐疫苗株的核苷酸同源性分别为96.6%~96.8%、98.1%~98.6%。HA和NA进化树分析显示,22株分离株属于3C.2a1b分支,虽与当年推荐疫苗株同属于3C.2a分支,但差异较大。HA基因共发生32处氨基酸突变,涉及A、B、E共3个抗原决定簇的4个氨基酸位点变异和2个病毒特异性识别受体结合位点变异。NA基因共发生21处氨基酸突变,其中共同突变8处,未发现耐药位点突变。潜在N-糖基化位点预测结果显示,HA基因在142NWT、149NGT、174NYT位点存在缺失或增加,NA基因在329NDS位点存在缺失。结论:2019~2020年河南省H3N2亚型流感病毒株的HA基因和NA基因与当年推荐的疫苗株存在较大差异,出现了抗原漂移。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感 血凝素 神经 河南省
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流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 张烨 于在江 +5 位作者 黄捷勤 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期213-218,共6页
克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表... 克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/HA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,可为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供参考。 展开更多
关键词 流感病毒H3N2 血凝素 神经 克隆表达
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中国鸭源H5N6 AIV血凝素和神经氨酸酶基因特征及遗传进化分析 被引量:1
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作者 陈翠腾 万春和 +6 位作者 陈珍 朱春华 傅光华 施少华 蔡国漳 刘斌琼 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2020年第1期21-27,共7页
为明确中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因特征及其遗传变异情况,研究选取了NCBI流感病毒资源库里的32株具有完整ORF编码区的中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因序列,利用分子生物学软件分析其HA和NA基因特征及其遗传进化情况。结果显示,中国鸭源H... 为明确中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因特征及其遗传变异情况,研究选取了NCBI流感病毒资源库里的32株具有完整ORF编码区的中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因序列,利用分子生物学软件分析其HA和NA基因特征及其遗传进化情况。结果显示,中国鸭源H5N6 AIV的HA裂解位点有REKRRKR↓G、RERRRKR↓G和KEKRRKR↓G三种类型,HA有6个潜在的N-糖基化位点,其中第182、222、224位氨基酸依次为N、Q、G,具有与禽源唾液酸α-2,3受体结合的特性,然而HA发生了S123P/T、T156A、S223R氨基酸位点突变,部分毒株发生了I151T氨基酸位点突变;HA基因核苷酸遗传进化分析显示,中国鸭源H5N6 AIV遗传进化上均处于clade2.3.4.4分支,并进一步进化出Ⅰ和Ⅱ两个亚分支。部分中国鸭源H5N6 AIV NA第59~69位缺失11个氨基酸,中国鸭源H5N6 AIV NA基因遗传进化上分为两个大的分支,分别对应NA基因颈部缺失型和完整型两种类型;NA颈部完整型的NA有6个潜在的N-糖基化位点,NA颈部缺失型的NA由于第59~69位氨基酸的缺失,导致其第67位丢失了一个N-糖基化位点。研究为中国鸭源H5N6 AIV的生物学特性和遗传进化特征研究奠定基础。 展开更多
关键词 H5N6亚型禽流感病毒 血凝素 神经 基因特征 遗传进化
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禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达 被引量:2
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作者 邹淑梅 于在江 +5 位作者 张烨 辛丽 陈永坤 陈禹保 陈清轩 舒跃龙 《实验动物科学》 2011年第3期1-5,共5页
目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达... 目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49~1 587 bp)、pMET A/NA(121~1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。 展开更多
关键词 禽流感病毒H5N1 血凝素 神经 真核酵母表达
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2009年-2014年云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶基因进化分析 被引量:2
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作者 曾伟 刘庆亮 +10 位作者 孔强 张文东 胡媛媛 胡挺松 赵焕云 段博芳 邱薇 范泉水 张应国 宋建领 张富强 《动物医学进展》 北大核心 2015年第7期13-18,共6页
为了解云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶(NA)基因变异及进化特征,2009年-2014年期间在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1 500份,经禽流感H5/N1亚型病毒特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品进行病毒NA基因扩增、纯化、克隆和... 为了解云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶(NA)基因变异及进化特征,2009年-2014年期间在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1 500份,经禽流感H5/N1亚型病毒特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品进行病毒NA基因扩增、纯化、克隆和测序,并与已知毒株和参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果从1 500份样品中检出禽流感病毒H5N1亚型阳性样品60份;60阳性样品病毒HA基因测序获得21种NA序列,可划分为4个不同进化分支。NA基因与HA基因呈现不同进化关系;云南边境毒株NA aa275位点未发生变异,因此变异毒株对神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir(达菲)类抗病毒药物可能无抗性或耐药性;2009年-2014年期间云南边境H5N1亚型病毒NA间具有遗传差异,NA基因进化分支4已成为当地流行的优势毒株。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1亚型 神经 基因
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副粘病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白结构与功能的研究进展 被引量:1
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作者 张文强(综述) 王志玉(审校) 《国外医学(微生物学分册)》 2005年第5期11-14,共4页
副粘病毒的血凝素-神经氨酸酶和融合蛋白具有重要的生物学活性,其中前者具有受体识别活性、神经氨酸酶活性和促进融合蛋白的细胞融合作用.本文对近年来血凝素-神经氨酸酶结构和功能方面的研究进展进行了综述.
关键词 神经 蛋白结构 副粘病毒 血凝素 生物学活性 融合蛋白 融合作用 活性
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