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鹅源新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析 被引量:14
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作者 万洪全 吴艳涛 +3 位作者 刘秀梵 彭大新 刘文博 张如宽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期176-178,共3页
Six isolates of Newcastle disease virus were derived from south and east China regions during the disease outbreaks called "avian paramyxovirus infection of geese" or "geese paramyxovirus infection"... Six isolates of Newcastle disease virus were derived from south and east China regions during the disease outbreaks called "avian paramyxovirus infection of geese" or "geese paramyxovirus infection",and partial sequence analysis of hemagglutinin-neuraminidase(HN) gene was carried out to identify the genetic characteristics of these goose isolatesA 1905 nucleotide portion of HN gene of each of the 6 isolates was sequenced,the results revealed that the coding region of their HN genes are all 1716 nucleotides in length,which can encode 571 amino acid residues aloneThe coding region is followed by a noncoding sequence of 189 nucleotidesThough they diverged only 08%-37% from each other in the nucleotide sequences of coding region,they differed by 175%-179% to F48E8, a standard challenge strain of chicken originCysteine residues are well conserved throughout the amino acid sequences,while the number of the potential glycosylation sites varys from 4 to 6Residue positions Thr 48,His 54,Ser 77,Ala 266,His 340 and Lys 384 are also highly conserved in the 6 goose isolatesThe corresponding residues in other NDV strains are commonly Met 48,Ser 54,Asn 77,Ile 266,Tyr 340 and Glu 384However,the sequences of receptor-binding related regions show no difference to the 14 reference strains from domestic or 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 血凝素 神经基因 序列分析
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新城疫病毒F_(48)E_8株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与鉴定 被引量:17
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作者 刘伟忠 吴艳涛 +3 位作者 刘秀梵 张如宽 彭大新 姜焱 《中国兽医科技》 CSCD 1997年第6期16-18,共3页
应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获取新城疫病毒F48E8株的血凝素-神经氨酸酶基因。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析,长约1.93kb,与预期结果相符。将其克隆入质粒载体pGEM-3Zf(+)中。
关键词 新城疫病毒 血凝素 神经 基因克隆 杂交
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从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位 被引量:3
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作者 孙林 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 黄金林 彭大新 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期428-431,共4页
以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素_神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20... 以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素_神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20。竞争ELISA试验表明,CLONE20与M22的结合能被新城疫弱毒株LaSota特异性抑制,抑制率达67 3%。经测序,获得CLONE20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用。动物试验结果表明,CLONE20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体。以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经 单克隆抗体 亲和筛选 模拟表位
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副黏病毒Tianjin株重组血凝素-神经氨酸酶单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用 被引量:3
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作者 李霞 李晓眠 +5 位作者 石立莹 袁立军 王卿 王文秀 李梅 侯凯 《天津医药》 CAS 北大核心 2008年第5期324-327,共4页
目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA... 目的:建立双抗体夹心ELISA法,调查副黏病毒Tianjin株引起婴幼儿下呼吸道感染情况。方法:用纯化的重组HN片段免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。以兔抗Tianjin株多克隆抗体为捕获抗体,单抗G7G7E7为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测104例下呼吸道感染患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)标本。结果:获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株G7H4D3、G7D9G3和G7G7E7。3株单克隆抗体与副黏病毒Tianjin株有较高结合活性,与甲、乙型流感病毒,新城疫病毒(NDV),人副流感病毒(hPIV)1型、3型、肺炎支原体均无交叉反应性。ELISA相加试验和阻断试验表明,3株单抗识别相同或相近表位区域,识别的表位在抗病毒免疫应答中处于免疫优势地位。双抗体夹心ELISA法检测阳性率为1.92%(2/104)。结论:与RT-PCR和间接ELISA法比较,双抗体夹心ELISA法,具有敏感性高、特异性强的优点,适于临床检测使用。副黏病毒Tianjin株是婴幼儿下呼吸道感染的重要致病因子之一。 展开更多
关键词 禽副黏液病毒属 抗体 单克隆 血凝素 神经 重组蛋白质类 联免疫吸附测定
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胃癌患者血清同型半胱氨酸、神经元特异性烯醇化酶和糖类抗原72-4水平及与临床特征和预后的关系
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作者 王珍 邱卫强 +1 位作者 赵义学 杨文义 《癌症进展》 2023年第23期2625-2629,2637,共6页
目的 探究胃癌患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和糖类抗原72-4(CA72-4)水平及与临床特征和预后的关系。方法 选取117例胃癌患者及64例胃部良性疾病患者,分别作为胃癌组及良性组,比较两组患者的血清Hcy、NSE、CA7... 目的 探究胃癌患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和糖类抗原72-4(CA72-4)水平及与临床特征和预后的关系。方法 选取117例胃癌患者及64例胃部良性疾病患者,分别作为胃癌组及良性组,比较两组患者的血清Hcy、NSE、CA72-4水平。分析胃癌患者血清Hcy、NSE、CA72-4水平与临床特征的关系,探讨血清Hcy、NSE、CA72-4单独及联合检测对胃癌的诊断价值及对预后的预测价值。结果 胃癌组患者血清Hcy、NSE和CA72-4水平均明显高于良性组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血清Hcy、NSE和CA72-4联合检测诊断胃癌的曲线下面积(AUC)大于各指标单独检测。不同分化程度、临床分期、淋巴结转移情况、浸润深度胃癌患者的血清Hcy、NSE、CA72-4水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。死亡组患者Hcy、NSE和CA72-4水平均明显高于生存组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血清Hcy、NSE和CA72-4联合检测预测胃癌患者预后的AUC大于各指标单独检测。Logistic回归分析结果显示,Hcy≥16.61μmol/L、NSE≥60.24 ng/ml、CA72-4≥32.08 U/ml均是胃癌患者预后的危险因素(P﹤0.05)。Hcy≥16.61μmol/L、NSE≥60.24 ng/ml、CA72-4≥32.08 U/ml胃癌患者的3年生存率分别低于Hcy﹤16.61μmol/L、NSE﹤60.24 ng/ml、CA72-4﹤32.08 U/ml的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 胃癌患者血清Hcy、NSE和CA72-4水平与分化程度、临床分期等临床特征有关,且各指标联合检测对胃癌具有诊断价值,对患者预后具有预测价值。 展开更多
关键词 胃癌 同型半胱 神经元特异性烯醇化 糖类抗原72-4 临床特征 预后
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鸭新城疫病毒河北分离株血凝素-神经氨酸酶蛋白基因序列分析
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作者 陈立功 张芳 +5 位作者 董兵 翟文栋 刘聚祥 李妹玲 李玲 任玉红 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期81-85,118,共6页
为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶(haemagglutinin-neuraminidase protein,HN)蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明:该病毒的HN基因长2 002bp,... 为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶(haemagglutinin-neuraminidase protein,HN)蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明:该病毒的HN基因长2 002bp,含有1个长为1 716bp的完整开放阅读框架(Open reading frame,ORF),编码571个氨基酸,符合强毒株的特征。同源性分析表明,该毒株的HN基因与35株参考毒株间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为71.8%-99.1%和83.4%-98.9%。遗传进化分析表明,该毒株与基因VIId亚型参考毒株关系较近,属同一分支,与疫苗株B1、LaSota、Mukteswar株和I类毒株关系较远。因此,须加强河北省水禽NDV的监测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经蛋白 序列分析
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副粘病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白结构与功能的研究进展 被引量:1
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作者 张文强(综述) 王志玉(审校) 《国外医学(微生物学分册)》 2005年第5期11-14,共4页
副粘病毒的血凝素-神经氨酸酶和融合蛋白具有重要的生物学活性,其中前者具有受体识别活性、神经氨酸酶活性和促进融合蛋白的细胞融合作用.本文对近年来血凝素-神经氨酸酶结构和功能方面的研究进展进行了综述.
关键词 神经 蛋白结构 副粘病毒 血凝素 生物学活性 融合蛋白 融合作用 活性
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新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白的可溶性超表达与免疫活性检测 被引量:1
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作者 张伟强 郭豫杰 +3 位作者 李赛赛 王月影 陈丽颖 杨国宇 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期848-855,共8页
目的检测新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,及其免疫活性。方法采用融合表达的方法将HN蛋白基因分别与Grifin、谷胱甘肽S移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、Nus A、小泛素样相关修饰物(SUMO)、硫氧... 目的检测新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,及其免疫活性。方法采用融合表达的方法将HN蛋白基因分别与Grifin、谷胱甘肽S移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、Nus A、小泛素样相关修饰物(SUMO)、硫氧还蛋白(thioredoxin)、蛋白G(protein G)、γ-晶状体蛋白(γ-crystallin)、Ars C、Ppi B 10种融合标签基因采用柔性接头进行连接,构建10个重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,将这10个重组质粒分别转入大肠杆菌BL21中,用不同条件进行诱导表达,经SDS-PAGE检测并选出最佳诱导蛋白表达的条件,筛选出能够显著促进HN蛋白可溶性表达的标签,并用Western blotting对所表达蛋白的含量进行定性分析,同时纯化的重组蛋白用Western blotting和间接ELISA验证其免疫原性。结果成功构建了10个不同融合标签的HN融合蛋白表达载体,筛选出融合标签麦芽糖结合蛋白(MBP)能够显著促进HN蛋白可溶性表达,且Western blotting显示所表达重组蛋白的表达量是最多的。经Western blotting和间接ELISA验证重组HN蛋白具有良好的免疫原性。结论融合标签MBP可以显著提高HN蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经 融合标签 柔性接头 免疫印迹法 间接ELISA
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脾脏酪氨酸激酶和核因子-κB对新城疫病毒-血凝素-神经氨酸酶上调自然杀伤细胞TRAIL蛋白表达的影响
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作者 钟伟娟 梁莹 +3 位作者 宋德志 田雯钰 赖振屏 樊晓晖 《广西医学》 CAS 2019年第12期1518-1523,共6页
目的探讨脾脏酪氨酸激酶(Syk)和核因子-κB(NF-κB)对新城疫病毒(NDV)-血凝素-神经氨酸酶(HN)上调自然杀伤(NK)细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白表达的影响。方法将干扰素γ(IFN-γ)受体缺失的NK细胞株(IFNR-/-NK)分为小干... 目的探讨脾脏酪氨酸激酶(Syk)和核因子-κB(NF-κB)对新城疫病毒(NDV)-血凝素-神经氨酸酶(HN)上调自然杀伤(NK)细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白表达的影响。方法将干扰素γ(IFN-γ)受体缺失的NK细胞株(IFNR-/-NK)分为小干扰RNA(siRNA)-Syk1组、siRNA-Syk2组、siRNA-Syk3组、siRNA-p65-1组、siRNA-p65-2组、siRNA-p65-3组、未处理组、脂质体组、siRNA-NC组,未处理组加入磷酸缓冲盐溶液(PBS),脂质体组加入由脂质体3000和Opti-MEM培养基组成的转染复合物,siRNA-NC组加入含非特异性siRNA的转染复合物,其他组加入含相应siRNA的转染复合物。(1)转染36h后,检测各组细胞Syk和(或)p65的mRNA及蛋白的表达水平。(2)转染16h后,将细胞分为siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组、siRNA-p65-1+HN组、siRNA-p65-2+HN组、siRNA-p65-3+HN组、脂质体+HN组和siRNA-NC+HN组、未处理组,未处理组细胞加入PBS,其余各组细胞加入NDV-HN。检测各组细胞膜型及分泌型TRAIL蛋白的表达水平,并检测siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组、脂质体+HN组、siRNA-NC+HN组和未处理组磷酸化IκBα蛋白的表达水平。结果(1)瞬时转染36h后,与脂质体组比较,siRNA-Syk1、siRNA-Syk2、siRNA-Syk3组的SykmRNA及蛋白表达水平降低,siRNA-p65-1组、siRNA-p65-2组、siRNA-p65-3组p65mRNA及蛋白表达水平亦降低(均P<0.05)。(2)未处理组的膜型TRAIL蛋白及分泌型TRAIL蛋白表达水平均低于其他组,siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组及siRNA-p65-1+HN组、siRNA-p65-2+HN组、siRNA-p65-3+HN组的膜型TRAIL蛋白及分泌型TRAIL蛋白表达水平均低于脂质体+HN组(均P<0.05)。未处理组磷酸化IκBα蛋白表达水平均低于其他组,siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组磷酸化IκBα蛋白表达水平均低于脂质体+HN组(均P<0.05)。结论敲低Syk或p65可以削弱NDV-HN上调NK细胞TRAIL蛋白的表达。Syk和NF-κB信号通路可能介导NDV-HN直接活化NK细胞表达TRAIL的过程。 展开更多
关键词 新城疫病毒 自然杀伤细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 脾脏酪 核因子-ΚB 血凝素-神经途径
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中国大陆H7N9禽流感病毒流行病学特征及血凝素和神经氨酸酶的分子进化 被引量:15
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作者 李鹏媛 徐浩 +4 位作者 顾豪高 马蒙蒙 陆家海 郝元涛 张定梅 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期932-940,共9页
【目的】对中国大陆人感染H7N9禽流感的流行病学特征进行描述分析,并对不同地区、不同时间、不同宿主来源的H7N9禽流感血凝素及神经氨酸酶基因进行分子进化分析,为H7N9禽流感的科学防控提供依据。【方法】汇总各公开网站发布的人感染H... 【目的】对中国大陆人感染H7N9禽流感的流行病学特征进行描述分析,并对不同地区、不同时间、不同宿主来源的H7N9禽流感血凝素及神经氨酸酶基因进行分子进化分析,为H7N9禽流感的科学防控提供依据。【方法】汇总各公开网站发布的人感染H7N9禽流感病例信息,分析人感染H7N9禽流感的流行病学特点;从Genbank筛选H7N9禽流感毒株的核酸序列及氨基酸序列。利用MEGE5.0、Bioedit等软件构建进化树,分析核苷酸及所编码蛋白关键位点的变异情况。【结果】全国共报告451例人感染H7N9禽流感病例,病死率为19.96%,男女性别比约为2.25:1;60岁以上(含60岁)病例占全部病例的45.76%;浙江,广东,江苏,上海四省市报告病例较多;2013年4月前后和2014年1月至2月为两个发病高峰。进化树显示H7N9禽流感毒株分为美洲来源支和欧亚来源支,分离的时间地点越接近进化关系越近。自韩国2011年野鸟中分离的H7N9毒株的NA基因与中国2013年及2014年分离的H7N9毒株NA基因进化关系较近。广东第一例人H7N9禽流感的NA基因与2013年5月分离自山东环境中的H7N9禽流感的NA基因及2013年4月来自浙江人感染H7N9禽流感的NA基因的同源性较高。所有人感染H7N9毒株NA茎区69~73位缺失了QISNT序列。【结论】老人及男性是感染H7N9禽流感的高危人群,冬春季是疫情高发期。病例集中分布于东南沿海地区。分子进化分析表明H7N9禽流感毒株有时间和空间的聚集性。时间空间距离越短则进化关系越接近。广东地区H7N9禽流感病毒可能是北方的候鸟迁徙所致,中国H7N9毒株NA片段可能来自韩国禽类携带的毒株。人感染H7N9禽流感病毒的毒力及耐药性尚未发生变异。NA茎区69—73位缺失QISNT序列可能与该病毒具有感染人类的能力有关。 展开更多
关键词 禽流感 H7N9 进化 血凝素 神经
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2017年江苏省H3N2流感病毒血凝素与神经氨酸酶分子特征及耐药性分析 被引量:11
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作者 王慎骄 祁贤 +5 位作者 邓斐 彭杰夫 余慧燕 秦圆方 戴启刚 鲍倡俊 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1254-1258,共5页
目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高... 目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高峰期分离株,4株为非高峰期分离株,1株为2016年度分离株(作为1株参考株)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对H3N2亚型流感毒株进行序列测定,从全球共享流感序列网站GISAID下载构建甲型H3N2亚型流感毒株HA(血凝素)系统进化树的骨架参考序列,使用MAGE7.0软件进行序列比对和系统进化分析。通过神经氨酸酶(NA)抑制试验,分析病毒耐药情况。结果16株病毒HA和NA基因核苷酸相似性分别为98.9%~99.6%、99.2%~99.3%,同源性较高。HA进化树分析显示,16株分离株中15株位于3C.2a分支,13株病毒3个C3.2a1分支关键位点(N171K、I406V和G484E)未发生变化,另外3株毒株关键位点发生变异,1株毒株发生该标志性氨基酸变异,1株毒株发生(N121K、T135K)的免疫相关突变。与2017-2018年度疫苗株推荐株A/HongKong/4801/2014相比,16株分离株抗原位点突变包括:A138S 1株,R142K 2株,R142K、R261Q 9株,R142KS144R、R261Q 1株,R142K、S144K、R261Q 1株。16株病毒的NA片段分析未发现NA耐药位点。基因型和表型分析表明,16株H3N2亚型流感毒株对抗流感药物奥司他韦及扎那米韦均敏感,均发现与M2基因耐药有关A30T、S31N分子位点的改变。结论2017年江苏H3N2亚型流行株HA和NA基因表现出异质性特点及发生基因重配现象,随着H3N2流感病毒变异持续发生,应密切监测病毒遗传进化和耐药基因的变化情况。 展开更多
关键词 流感病毒 H3N2亚型 血凝素 神经 基因特性 耐药性分析
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江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素和神经氨酸酶分子特征分析 被引量:14
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作者 资海荣 郭艳 +5 位作者 邓斐 余慧燕 王慎骄 汤奋扬 祁贤 卫平民 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期812-822,共11页
目的 :分析江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)变异情况,分析其遗传进化特征。方法 :按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培... 目的 :分析江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)变异情况,分析其遗传进化特征。方法 :按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培养及亚型鉴定。选取2013年不同时间段、不同地区具有代表性的14株甲型H1N1(09pdm)阳性毒株,利用特异性引物扩增HA、NA基因,测序并分析其遗传进化特征。结果 :14株分离毒株与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)的HA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%~98.4%和96.5%~98.0%。NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~98.9%和97.0%~98.5%。遗传进化分析表明,14株分离株HA和NA基因分属于不同的进化谱系。分子特征表现为HA氨基酸序列出现D114N、K300E、E516K的变异,NA分子特征表现为N44S位点变异。从2013年左右开始甲型H1N1(09pdm)流感基因多样性增加;通过FEL模型得到一个正向压力选择HA氨基酸位点310,一个正向压力选择NA氨基酸位点4,通过REL模型得到9个正向压力选择HA氨基酸位点179、180、239、301、303、310、311、312、313(含位点310),5个正向压力选择NA氨基酸位点4、23、52、287、374(含位点4)。HA蛋白具有9个潜在糖基化位点,7个位于HA1上,2个位于HA2上;NA蛋白共有9个潜在糖基化位点。14株分离毒株在NA蛋白酶活性中心及周围辅助位点上均未发现变异。结论:2013年江苏省甲型H1N1(09pdm)流感HA、NA基因变异加快,遗传多样性增加,未来的遗传进化值得进一步关注。 展开更多
关键词 甲型H1N1(09pdm) 血凝素 神经 分子特征
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鸡新城疫病毒F48E9株血凝素神经氨酸酶基因免疫诱导免疫保护的初步研究 被引量:6
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作者 刘胜旺 孔宪刚 +2 位作者 童光志 马云燕 卢景良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1565-1569,共5页
将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空... 将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空质粒作为对照。结果表明 ,新城疫基因疫苗能够诱导机体产生新城疫病毒特异的血清IgG抗体反应 ,但产生抗体所需的时间较长 ,抗体滴度的增加较为缓慢。人工接种新城疫强毒后 ,基因疫苗免疫组 4 / 6的鸡得到保护 ,而且保护鸡具有明显的抗体反应 ,2只鸡未得到保护 ,但其死亡时间明显迟于对照组鸡 ,死亡鸡具有典型的新城疫病毒感染鸡的病理形态学变化。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒F48E9株 血凝素-神经基因 诱导 免疫保护 基因免疫 基因疫苗
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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量:7
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作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页
血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF... 血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF鸡胚尿囊毒RNA,RT-PCR扩增完整的NA cDNA基因,将其克隆到载体pSY538中的禽痘病毒早晚期启动子 LP2EP2的下游,然后再将含有启动子的 NA基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+LacZ)中,构建了HA、NA双重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+NA+LacZ),将它与禽痘病毒疫苗株S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、PCR鉴定等,结果表明已获得一株能同时稳定表达HA和NA蛋白的重组禽痘病毒,为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经基因 重组禽痘病毒
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广州2006年乙型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特性分析 被引量:4
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作者 李向忠 吴新伟 +3 位作者 刘维斯 王鸣 陈艺韵 伍业健 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期356-359,共4页
为了解2006年广州地区流行的乙型流感病毒株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的基因特性,选择病原学监测病毒株和暴发性疫情病毒株,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,通过PCR方法扩增乙型流感病毒HA和NA全长基因,将扩增的DNA片段接入T—A... 为了解2006年广州地区流行的乙型流感病毒株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的基因特性,选择病原学监测病毒株和暴发性疫情病毒株,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,通过PCR方法扩增乙型流感病毒HA和NA全长基因,将扩增的DNA片段接入T—A克隆载体进行测序,并使用DNAStar软件对测序结果进行分析。结果显示:不同来源的流感病毒株HA的同源性为99%以上,都属于Victoria系;不同来源的病毒株NA同源性为98%以上。HA和NA的种系发生树分析表明:病原学监测毒株同源性更接近,而暴发性疫情毒株的同源性则相对较为分散。所有毒株与WHO推荐的2005-2006年度疫苗株B/Shanghai/361/2002的同源性只有88.9%~89.7%,说明该年度的流感疫苗对乙型流感不能提供最佳的保护。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素 神经 种系发生树
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黄连-厚朴药对9个配伍比例对抑制神经氨酸酶活性的影响 被引量:7
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作者 陈高 吴巧凤 +1 位作者 张小霞 严云良 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1394-1397,共4页
目的探索黄连-厚朴药对9个配伍比例(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)对抑制神经氨酸酶活性的影响。方法底物荧光检测法测定不同配伍比例药对对神经氨酸酶的抑制活性,非线性回归法确定量效曲线参数,建立三维响应... 目的探索黄连-厚朴药对9个配伍比例(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)对抑制神经氨酸酶活性的影响。方法底物荧光检测法测定不同配伍比例药对对神经氨酸酶的抑制活性,非线性回归法确定量效曲线参数,建立三维响应曲面模型,响应面法分析配伍比例与抑制作用的关系。结果各配伍比例药对对神经氨酸酶均有抑制活性,在1∶1时作用最强。配伍比例在0.55∶1~1.11∶1时,药对表现出明显的协同作用(作用强度-0.800),而其他配伍比例下协同作用较弱,或产生相加甚至拮抗作用。结论该方法可为黄连-厚朴药对治疗流感时配伍比例的选择提供依据。 展开更多
关键词 黄连-厚朴药对 配伍比例 神经 抑制作用 响应面法
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猪流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:3
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作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期162-167,共6页
克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了猪流感病毒H1N1 HA、NA基因序列,为猪流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒H1N1 血凝素 神经 克隆表达
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河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特征分析 被引量:5
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作者 僧明华 杨凯朝 +2 位作者 王文慧 赵升 徐瑾 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2021年第6期859-865,共7页
目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22... 目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22株H3N2型流感病毒株进行HA和NA基因测序,使用生物信息学软件分析其分子特征。结果:河南省H3N2亚型流感病毒分离株的HA基因和NA基因与当年度推荐疫苗株的核苷酸同源性分别为96.6%~96.8%、98.1%~98.6%。HA和NA进化树分析显示,22株分离株属于3C.2a1b分支,虽与当年推荐疫苗株同属于3C.2a分支,但差异较大。HA基因共发生32处氨基酸突变,涉及A、B、E共3个抗原决定簇的4个氨基酸位点变异和2个病毒特异性识别受体结合位点变异。NA基因共发生21处氨基酸突变,其中共同突变8处,未发现耐药位点突变。潜在N-糖基化位点预测结果显示,HA基因在142NWT、149NGT、174NYT位点存在缺失或增加,NA基因在329NDS位点存在缺失。结论:2019~2020年河南省H3N2亚型流感病毒株的HA基因和NA基因与当年推荐的疫苗株存在较大差异,出现了抗原漂移。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感 血凝素 神经 河南省
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清肺饮对流感病毒A/PR/8/34(H_1N_1)感染小白鼠血凝素抗体、神经氨酸酶抗体的影响 被引量:4
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作者 王成祥 王惠芳 +2 位作者 沈杏生 姜良铎 杜怀棠 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期191-192,共2页
关键词 清肺饮 流感病毒 A/PR/8/34 感染 血凝素抗体 神经抗体
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流感病毒血凝素基因、神经氨酸酶基因在小鼠中的免疫效果观察 被引量:5
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作者 周旭 李益民 +2 位作者 侯玲 王若愚 戴欣 《微生物学免疫学进展》 2001年第1期15-19,共5页
流感病毒血凝素基因 ,神经氨酸酶基因免疫BALB/c小鼠 ,获得特异阳性抗体反应 ,抗体滴度与基因免疫量呈正相关性 ,各实验组免疫小鼠抗同型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,血凝素基因免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,神经氨酸... 流感病毒血凝素基因 ,神经氨酸酶基因免疫BALB/c小鼠 ,获得特异阳性抗体反应 ,抗体滴度与基因免疫量呈正相关性 ,各实验组免疫小鼠抗同型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,血凝素基因免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 10 0 % ,神经氨酸酶基因免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 75 % ,血凝素基因与神经氨酸酶基因联合免疫小鼠抗异型流感病毒攻击存活率为 10 0 %。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素基因 神经基因 免疫 免疫效果
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