应用脐带血单个核细胞修复小鼠皮肤缺损创伤的实验研究

目的 探讨创面局部应用脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)治疗皮肤缺损的效果及相关机制。方法 选取45只C57小鼠建立创面损伤模型后分为3组。实验组:先将0.5 mL的UCB-MNCs(细胞数:1×10^(9) mL^(-1))皮下于8~10 mm均匀注射在每只小鼠伤口周围,再将0.5 mL的UCB-MNCs均匀注射在创面表面,共1次;阳性对照组:创口表面涂抹牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶(商品名:贝复新);空白对照组:不做处理,伤口自然暴露。各组小鼠造模后第0、3、7及14天,采用Elisa技术检测血清内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),HE和MASSON染色观察创面组织病理学情况。结果 所有小鼠均造模成功,与空白对照组和阳性对照组相比,实验组在造模后第3、7、14天血清VEGF、TGF-β和bFGF的表达水平显著升高(P<0.05)。术后第14天HE和MASSON染色结果显示实验组小鼠的创伤已全部愈合,且表皮修复状况良好,可以观察到部分炎症细胞的浸润;阳性对照组的小鼠部分表皮修复状况良好,但仍有一部分创伤没有完全愈合,肉芽组织的生长状况良好;空白对照组未完全愈合的创伤周围瘢痕组织增生明显,且出现明显的炎症细胞浸润以及部分创伤仍未愈合的现象。结论 UCB-MNCs修复小鼠的皮肤损失创伤,是通过促进细胞因子的分泌来促进皮肤缺损创伤的愈合。

关节腔注射脐带血单个核细胞治疗膝骨关节炎的相关研究

膝骨关节炎(KOA)是一种严重危害中老年人健康的慢性膝关节退行性疾病,关节软骨的退变损伤、骨赘异常增生、软骨下骨硬化是其主要的病理改变,常引起关节疼痛、肿胀、活动受限、僵硬及畸形,甚至致残,严重影响患者的生活质量。目前临床上KOA的治疗主要包括保守治疗和手术治疗,然而其效果均不能令人满意。脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)是脐带血中具有单个细胞核的细胞总称,包含多种异质性细胞群,如造血干细胞、间充质干细胞、内皮祖细胞、淋巴细胞、单核细胞等。在KOA患者膝关节腔内注射UCB-MNCs,利用不同细胞间的协同作用,通过抗炎、调节免疫、修复组织损伤、促进软骨再生等机制,发挥消除或减轻临床症状、改善关节功能、减少关节退行性变、阻止或延缓病程进展等作用,且安全性良好。但是,该方法存在注射剂量、次数、观察指标不统一,以及缺乏严格的单个核细胞质量控制等问题。本文主要对关节腔注射UCB-MNCs治疗KOA的相关研究作一综述。

人脐带血单个核细胞静脉移植治疗轻中度阿尔茨海默病的临床研究

目的观察人脐带血单个核细胞(hUCB-MNC)静脉移植治疗轻中度阿尔茨海默病(AD)患者的临床疗效。方法选取轻中度AD患者50例,随机分为治疗组和对照组,每组25例。治疗组给予hUCB-MNC静脉输注,对照组给予盐酸多奈哌齐口服,两组疗程均为12周。评价两组治疗前后磁共振质子波谱技术(1H-MRS)中N-乙酰天冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)、胆碱/肌酸(Cho/Cr)、肌醇/肌酸(mI/Cr)、N-乙酰天冬氨酸/肌醇(NAA/mI)比值、尿AD7c-NTP水平、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)得分。结果治疗组治疗后较治疗前MoCA总分及各认知域评分提高,尤其在记忆力、视空间与执行力、注意力、定向力领域的提高优于对照组(P<0.05)。治疗组治疗后较治疗前NAA/Cr、Cho/Cr、NAA/mI升高,mI/Cr降低(P<0.05),且治疗组NAA/Cr、Cho/Cr、NAA/mI、mI/Cr改善程度优于对照组(P<0.05)。治疗组治疗后较治疗前尿AD7c-NTP水平降低,且治疗组尿AD7c-NTP改善程度优于对照组(P<0.05)。结论hUCB-MNC可明显改善轻中度AD患者的记忆力、视空间与执行力等认知域,并且能改善轻中度AD患者的脑代谢水平及减轻神经元损伤程度,1 H-MRS结合尿AD7c-NTP的评估模式可为临床治疗AD提供新的思路和方法。

外周血单个核细胞介导的HBV宫内垂直传播

目的:探讨HBV感染外周血单个核细胞在介导乙肝病毒母婴传播中的作用。方法:以Ficoll-Hypaque常规分离、纯化孕妇外周血单个核细胞(PBMCs)和新生儿脐血单个核细胞(CBMCs),PCR法检测孕妇外周血和新生儿脐血HBVDNA。结果:HBeAg(+)孕妇血清和PBMCs内HBV-DNA检出率分别为100.00%(25/25)和72.00%(18/25),其新生儿脐血血清和CBMCs内HBV-DNA检出率分别为60.00%(15/25)和44.00%(11/25),与HBeAg(-)组相比差异有显著性(P<0.05)。PBMCs内HBV高复制组其新生儿脐血及CBMCs内HBV-DNA阳检率均较高,与其他组相比,差异有显著性(P<0.05)。结论:HBV不仅可通过血清介导HBV宫内垂直传播,还可侵染外周血单个核细胞,并通过外周血单个核细胞→脐血单个核细胞途径介导HBV宫内垂直传播。

细胞因子对脐血单个核细胞端粒酶活性的影响

目的研究集落刺激因子对脐血单个核细胞(CBMC)端粒酶活性的影响。方法体外培养3例足月正常新生儿的CBMC,并加入集落刺激因子IL?3、SCF、GM?CSF及其组合,培养5d后用TRAP?ELISA法测定每份标本的端粒酶活性。结果CBMC培养前有较弱的端粒酶活性,加入集落刺激因子体外培养后端粒酶活性均有不同程度的上调,以加入IL?3、SCF、GM?CSF组最为显著;CBMC与PBMC培养前端粒酶活性差异无显著性,培养后比较差异有显著性(P<0.01)。结论IL?3、SCF、GM?CSF的组合对CBMC端粒酶活性有明显影响;集落刺激因子对CBMC和PBMC均有扩增作用,但CBMC具有更高扩增潜能。

多份人脐血单个核细胞静脉移植治疗老年期血管性痴呆18例

选取2005-05/2007-12郑州市第二人民医院收治的血管性痴呆老年患者18例,平均年龄72.6岁,平均病程24.5个月,均经CT、MRI确诊,符合第四届全国脑血管病学术会议修订的脑卒中诊断标准。采集足月新生儿脐带血,无菌塑料袋分离出单个核细胞,通过手背浅静脉将脐血单个核细胞输注入脑卒中患者体内,每例患者平均输注6份,细胞数≥1×108/份,每份间隔1～7d。与移植前比较,细胞移植后6个月患者神经功能缺损程度评分明显降低(t=-8.85,P<0.01);简易智能量表评分和评价日常生活能力的Barthel指数均明显升高(t=13.78,t=12.81,P<0.01)。整个治疗过程中未使用免疫抑制剂,细胞移植前后无并发症及不良反应发生。

人脐血单个核细胞静脉移植心肌梗死模型兔心肌组织肿瘤坏死因子α的表达

背景:有报道指出心肌梗死部位及其周围区域炎性细胞浸润和炎性因子渗出,参与心室重构、心功能损害的发生和发展,干细胞移植治疗心肌梗死与移植干细胞抑制心肌梗死后局部炎症反应相关。目的:探讨静脉移植人脐血单个核细胞对兔心肌梗死后心肌组织炎症反应及炎性因子肿瘤坏死因子α表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-02/12在中南大学湘雅医院医学实验研究中心和中南大学实验动物学部完成。材料:6份脐血来自中南大学湘雅医院产科身体健康足月分娩的产妇。健康纯种中国家兔45只,随机分为细胞移植组、模型组、假手术组,15只/组。方法:Ficoll法分离培养人脐血单个核细胞,传至第2代用于移植,移植前24h行BrdU标记,调整浓度至0.04×1013L-1。细胞移植组、模型组兔结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,假手术组兔左前降支穿线不结扎。造模后24h,细胞移植组经耳缘静脉注入0.5mL人脐血单个核细胞悬液,含2×107个人脐血单个核细胞;模型组、假手术组同法注入等量生理盐水。分别于细胞移植后1,2,4周取材。主要观察指标:超声心动图测量结果,心肌组织切片白细胞计数,免疫组化检测心肌BrdU阳性细胞及肿瘤坏死因子α的表达水平,RT-PCR法检测心肌肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果:与模型组比较,移植后1,2,4周细胞移植组心功能明显改善,左室短轴缩短率及左室射血分数均明显升高(P<0.05);各时间点细胞移植组白细胞数均明显降低(P<0.05)。移植后第4周,假手术组心肌细胞无肿瘤坏死因子α表达;模型组可见明显肿瘤坏死因子α表达;细胞移植组肿瘤坏死因子α表达程度明显减弱,且呈黄褐色的BrdU阳性细胞散在分布于梗死周边区域。与模型组比较,移植后1,2,4周细胞移植组肿瘤坏死因子αmRNA的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:静脉移植人脐血单个核细胞可改善兔心肌梗死后心功能,抑制心肌组织肿瘤坏死因子α表达,减轻心肌梗死后局灶性炎症反应。

杂色曲霉素对人外周血单个核细胞TAP1及LMP2基因表达的影响

目的:探讨杂色曲霉素(ST)对体外培养的人外周血单个核细胞(HPBMc)抗原加工递呈相关基因TAP1、LMP2表达的影响。方法:采用RT-PCR和FCM方法,分析5种浓度ST处理对体外培养的HPBMcTAP1、LMP2基因在mRNA和蛋白水平表达的影响。结果:RT-PCR检测结果表明,ST处理24h后,低浓度ST组(0.125mg/L、0.25mg/L)HPBMcTAP1mRNA相对表达量明显高于对照组,而较高浓度组(0.5mg/L、1mg/L和2mg/L)TAP1mRNA则明显低于对照组,尤以1mg/L和2mg/L组为著。FCM定量分析表明,低浓度ST组HPBMcTAP1蛋白平均表达量略低于对照组,但无统计学意义,而较高浓度组TAP1表达则明显低于对照组(P<0.05)。在0.125mg/L到1mg/L浓度范围内,各ST处理组HPBMcLMP2蛋白表达量和mRNA的相对表达量均高于对照组。结论:ST对体外培养的HPBMcTAP1mRNA表达和蛋白表达的影响按ST剂量不同而变化,在0.125～1mg/L浓度范围内ST在mRNA及蛋白水平均可剂量依赖地提高体外培养的HPBMcLMP2的表达。

脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的变化

目的 :探讨脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的表达差异。方法 :采用RT PCR方法对脐血单个核细胞培养前后nestin ,神经丝亚单位M(NF M)及微管相关蛋白 2 (MAP2mRNA)的表达进行检测。结果 :nestin ,NF M及MAP2mRNA在培养前的脐血单个核细胞中表达呈阳性 ,培养后 3者表达增强。结论 :直接分离的脐血单个核细胞中存在着表达神经细胞特有分子的细胞 ,培养后 。

人脐血单个核细胞促进脊髓损伤后的轴突再生

[目的]讨论人脐血单个核细胞(human cord blood mononuclear cells,HCMNCs)移植治疗大鼠脊髓损伤后损伤区域轴突再生情况和功能恢复。[方法]利用Impactor ModelⅡ打击器制成30例T10脊髓损伤模型,分组为:实验对照组(DMEM细胞培养基),损伤后3 d HCMNCs移植组,损伤后14 d HCMNCs移植组,每组10例。以HE染色和免疫组化染色以及BDA顺行示踪染色观察脊髓损伤处轴突再生情况,结合对各组实验动物脊髓损伤后肢体功能的恢复情况进行行为学评分(BBB评分),综合评估脊髓功能恢复程度。[结果]与对照组比较,HCMNCs移植治疗能够明显促进神经轴突再生,改善功能恢复,损伤后14 d HCMNCs移植组优于损伤后3 d移植组,各组间疗效差异具有统计学意义(P<0.01)。[结论]HCMNCs在体内向神经元及神经胶质细胞分化,促进神经轴突再生和功能恢复。损伤后14 d是移植的较为理想的时间。

脐血单个核细胞体外培养和诱导后神经干细胞标志物mRNA的表达

目的:探讨人脐血单个核细胞(humancordbloodmonocytes,HCMNCs)培养增殖过程中的形态变化及诱导后神经干细胞标志物mRNA的表达。方法:采用OLYMPUS倒置显微镜观察培养过程中HCMNCs形态的变化;RT-PCR方法鉴定MNCs用神经生长因子(NGF)和维甲酸(RA)诱导前后神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)标志物巢蛋白(Nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达。结果:HCMNCs培养前,胞体较小,呈均一的圆形;培养后,细胞胞体增大,有破骨样细胞和间质样细胞两种形态。破骨样细胞胞体较大,呈圆形,多个核。间质样细胞胞体呈较均一的长梭形,形态类似于骨髓MSCs,但较骨髓MSCs稍小。RT-PCR检测提示,诱导前HCMNCs中Nestin弱表达,Musashi-1无表达;诱导后两者均表达增强,之后逐渐减弱。结论:使用密度梯度离心法可以从脐血中分离得到具有多向分化潜能的HCMNCs,经过EGF和RA诱导后,神经干细胞标志表达一过性增强后减弱。

人胎盘源间充质干细胞与人脐血单个核细胞联合移植促进SCID鼠早期造血重建

目的:利用骨髓腔内注射(IBMI)技术初步探讨人胎盘源间充质干细胞(PMSC)联合脐血单个核细胞(MNC)共移植入SCID鼠体内后的早期造血重建效应。方法:将人胎盘组织经胶原酶消化、贴壁和传代培养获得人PMSC,运用流式细胞仪术(FCM)检测其表面标志,并将其诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,继而对其进行成骨分化、脂肪分化鉴定;以人PMSC和脐血MNC为供体,通过IBMI方法或结合静脉注射(IV)方法,将两种细胞联合或单独移植入经亚致死量辐照预处理的SCID受鼠体内,50只受鼠随机分为5组:联合移植A组(PMSC+脐血MNC,IBMI)、单独移植B组(脐血MNC,IBMI)、联合移植C组(PMSC经IBMI,脐血MNC经IV)、生理盐水对照D组(辐照后仅注射生理盐水,IBMI)、空白对照E组(不辐照仅注射生理盐水,IBMI),每组10只。在移植后14 d取各组SCID小鼠注射侧和对侧胫骨腔内骨髓细胞,并用FCM检测分析人CD34+、CD45+细胞的植入水平。结果:从人胎盘组织中成功分离和培养PMSC,FCM检测其表型正常,并成功向成骨和成脂肪细胞诱导分化;SCID小鼠移植后14 d,照射对照组小鼠仅剩4只存活,其他组小鼠全部存活,B组注射侧及对侧胫骨骨髓腔内的人CD34+、CD45+细胞的百分比均明显低于A组小鼠的注射侧和对侧。结论:人PM-SC可以提高脐血MNC的植入率,促进早期造血重建。

人脐血单个核细胞静脉移植联合复方丹参滴丸对急性心肌梗死局灶炎症反应的影响

目的观察复方丹参滴丸(Compound Danshen Dripping Pill,CDDP)对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)心肌组织炎症反应的影响,观察人脐血单个核细胞(human umbilical cord blood mononuclear cells,HUCBMCs)静脉移植联合CDDP对家兔AMI心肌组织炎症反应、炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及心功能的影响,并探讨其联合治疗对AMI可能的保护机制。方法对40只健康家兔结扎冠状动脉左前降支,制备AMI模型。40只建模成功家兔随机分为4组,即对照组、CDDP组、单纯移植组及联合治疗组,每组10只。对照组:术后24 h生理盐水0.5 mL耳缘静脉注射,生理盐水5 mL/天灌胃;CDDP组:术后24 h经耳缘静脉注入生理盐水0.5 mL,CDDP 270 mg/d溶入生理盐水5 mL灌胃;单纯移植组:术后24 h经耳缘静脉注入含3×107个绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记HUCBMCs生理盐水0.5 mL,生理盐水5 mL/天灌胃;联合治疗组:术后24 h经耳缘静脉注入含3×107个GFP标记HUCBMCs的生理盐水0.5 mL,CDDP 270 mg/d溶入生理盐水5 mL灌胃。每组随机选取5只家兔分别于移植术后1、4周超声心动图检测家兔心功能指标,包括左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)及左室短轴缩短率(left ventricular fractional shorting,LVFS);HE染色光镜下观察心肌病理变化和白细胞计数;免疫组化检测心肌组织TNF-α蛋白表达量;荧光显微镜观测GFP阳性细胞。结果 (1)与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后1、4周心功能指标LVFS及LVEF改善(P<0.05),其中联合治疗组心功能指标改善优于单纯移植组、CDDP组(P<0.05),而后两组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后1、4周心肌组织白细胞计数及TNF-α蛋白表达均显著减低(P<0.05),且联合治疗组心肌组织白细胞计数及TNF-α蛋白表达均显著低于单纯移植组、CDDP组(P<0.05),而后两组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)联合治疗组、单纯移植组术后1、4周均可见GFP阳性细胞散在分布于梗死周边区域,且联合治疗组细胞计数多于单纯移植组(P<0.05)。结论本研究提示HUCBMCs静脉移植联合CDDP治疗AMI,可提高移植细胞在心肌组织内的存活率,并进一步改善心功能。其机制可能与联合治疗减轻心肌局部炎症反应及抑制促炎因子TNF-α蛋白的表达作用增强有关。

脐血单个核细胞移植后缺氧缺血性脑损伤新生鼠组织学及远期行为学的改善

背景:脐血单个核细胞移植治疗缺血性脑损伤的研究多集中于成体脑卒中模型,且涉及脑内移植后细胞存活和脑损伤鼠远期疗效的文献甚少。目的:观察脐血单个核细胞侧脑室移植后,缺氧缺血性脑损伤新生鼠远期学习记忆能力、感觉运动功能及脑神经元数目的变化。设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2006-12/2007-09在潍坊医学院分子影像学研究中心完成。材料:脐血来源于健康、足月妊娠产妇,由潍坊医学院附属医院产科提供,产妇均签署知情同意书。清洁级健康7d龄SD新生鼠36只,随机分为正常对照组、脑损伤组、细胞移植组,12只/组。方法:Ficoll法分离培养脐血单个核细胞,移植前3d体外行BrdU标记。脑损伤组、细胞移植组新生鼠建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后24h,细胞移植组新生鼠于左侧侧脑室注入脐血单个核细胞悬液,共1×105个活细胞。正常对照组不做任何处理。主要观察指标:通过放射性迷宫检测新生鼠空间学习记忆能力,通过足错误试验、肢体放置试验来检测新生鼠感觉运动功能。采用免疫荧光法检测脐血单个核细胞脑内移植情况,尼氏染色检测脑皮质与海马CA1区的神经元数量。结果:36只鼠均进入结果分析。移植后4周与脑损伤组比较,细胞移植组平均觅水时间缩短(P<0.05),记忆错误次数减少(P<0.01),两侧足错误次数的差值及两侧爪放置得分的差值均明显降低(Q=6.368,P<0.01),但仍未达到正常水平。移植后8周鼠脑皮质BrdU阳性细胞广泛存在,细胞移植组脑皮质及海马CA1区神经元数量明显高于脑损伤组(P<0.05或0.01)。结论:脐血单个核细胞侧脑室移植可减轻缺氧缺血性脑损伤,显著改善脑损伤鼠的远期学习记忆及感觉运动功能,具有神经保护作用。

脐血单个核细胞移植治疗失代偿期肝硬化

背景:原位肝移植是目前治疗终末期肝病的最有效手段,但是供肝来源匮乏、免疫排斥、无法有效控制反复感染等问题限制了其应用。干细胞移植技术的应用为该病种的治疗提供了新的思路和研究方法,许多研究证实可以通过各种不同的方法在体外成功诱导脐血来源的间充质干细胞向肝细胞转化。目的:探讨人脐血单个核细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效及可行性。方法:异体人脐血单个核细胞移植治疗23例肝硬化失代偿期患者,检测移植后2,4,8,24周的血清丙氨酸氨基转移酶、白蛋白、胆碱酯酶、总胆红素和凝血酶原时间,并观察患者临床症状体征改善情况以及不良反应。结果与结论:人脐血单个核细胞移植后2周,肝功能各项指标较治疗前无明显改善(P>0.05);移植后4周,谷丙转氨酶有显著改善(P<0.05)、其余指标无明显改善;移植后12周肝功能各项指标均有改善(P<0.05),且肝脏硬度有所改善(P<0.05);移植后24周各项指标有显著性改善(P<0.01)。移植后4周时患者临床症状有明显改善,20例乏力好转(87%)、21例食欲改善(91%)、19例腹水减轻(83%);所有患者移植期间及治疗后随访24周无严重不良反应。结果显示异体人脐血单个核细胞移植治疗肝硬化失代偿期患者临床疗效肯定,安全性好,可作为中晚期肝硬化患者的临床治疗手段。

人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞移植用于大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤功能恢复的影响,寻找一种更适合治疗脊髓损伤的细胞源。方法:采集新鲜人脐带血和脐带,分离培养单个核细胞和MSCs。将脊髓损伤模型随机分成3组:单个核细胞移植组、MSCs移植组和低糖必需培养基(L-DMEM)培养组。采用免疫组化和免疫荧光检测细胞移植后1—4周细胞在脊髓内的存活情况和迁移情况,使用BBB行为学评分评估大鼠脊髓功能恢复情况。结果:L-DMEM培养液组在术后各时间点观察评分无明显差异,而细胞移植组脊髓功能处于逐渐恢复过程,与L-DMEM培养液比较,差异有显著性意义。单个核细胞移植组对损伤脊髓功能的修复作用较MSCs移植组显著,且差异有显著性意义。结论:与MSCs相比较,人脐血单个核细胞更适合作为治疗脊髓损伤的细胞源。

脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞治疗儿童孤独症的安全性与有效性

背景:目前国内外尚没有治疗儿童孤独症的金标准,康复治疗效果不佳。目的:评价脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞治疗儿童孤独症的临床安全性和有效性。方法:37例儿童孤独症患者非随机分为脐血组、混合组和对照组。脐血组应用脐血单个核细胞加康复训练治疗;混合组联合应用脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞加康复训练治疗;对照组单纯行康复训练治疗。脐血组和混合组患者在干细胞治疗前和首次治疗后1,2,6个月分别行相关指标实验室检查,并观察有无不良反应发生。3组患者在治疗前和首次治疗后1,2,6个月分别行儿童孤独症评定量表(CARS)和异常行为量表(ABC)评估。结果与结论:脐血组和混合组患者在干细胞治疗前和首次治疗后1,2,6个月相关指标实验室检查未发现有意义异常变化,干细胞治疗后无严重不良反应发生;根据CARS和ABC评分,3组治疗均有效,其疗效比较:混合组优于脐血组,脐血组优于对照组。

人脐血单个核细胞静脉移植联合复方丹参滴丸对急性心肌梗死心肌组织内环境及心肌细胞凋亡的影响

目的:观察复方丹参滴丸(compound Danshen dripping pills,CDDP)和人脐血单个核细胞(human umbilical cord blood mononuclear cells,HUCBMCs)静脉移植联合复方丹参滴丸对家兔急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的心肌组织炎症反应、心肌细胞凋亡、氧化应激指标及心功能的影响,并探讨其联合治疗对急性心肌梗死可能的保护机制。方法:对健康家兔结扎冠状动脉左前降支,制备AMI模型。建模成功者40只随机分为4组,每组10只。对照组:术后24h生理盐水0.5mL耳缘静脉注射,生理盐水5mL/d灌胃;CDDP组:术后24h经耳缘静脉注入生理盐水0.5 mL,CDDP 270 mg/d溶入生理盐水5 mL灌胃;单纯移植组:术后24 h经耳缘静脉注入含3×107绿色荧光蛋白(green luorescent protein,GFP)标记人脐血单个核细胞生理盐水0.5 mL,生理盐水5 mL/d灌胃;联合治疗组:术后24 h经耳缘静脉注入含3×107GFP标记人脐血单个核细胞的生理盐水0.5 mL,CDDP 270 mg/d溶入生理盐水5mL灌胃。每组随机5只家兔分别于移植术后1周、4周超声心动图检测家兔心功能指标左室射血分数(let ventricular ejection fraction,LVEF)及左室短轴缩短率(let ventricular fractional shorting,LVFS);苏木精-伊红(HE)染色光镜观察心肌病理变化并在光镜下进行白细胞计数。氮蓝四唑(nitrotetrazolium blue chloride,NBT)法测定心肌组织浆液超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;硫代巴比妥酸比色法测心肌组织浆液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。根据荧光显微镜检测到的GFP阳性细胞进行移植细胞计数。结果:1)与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后1周、4周心功能指标LVFS及LVEF改善(均P<0.05),其中联合治疗组心功能改善优于单纯移植组、CDDP组(均P<0.05),而后两组组间比较差异无统计学意义;2)与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后1周、4周心肌组织白细胞计数及心肌细胞凋亡指数均显著减低(均P<0.05),且联合治疗组均显著低于单纯移植组、CDDP组(均P<0.05),而后两组比较差异无统计学意义;3)与对照组比较,CDDP组、单纯移植组、联合治疗组术后4周心肌组织MDA水平均显著降低(均P<0.05),SOD活性显著增高(均P<0.05),且联合治疗组均优于单纯移植组、CDDP组(均P<0.05),而后两组比较差异无统计学意义;4)联合治疗组、单纯移植组术后4周均可见GFP阳性细胞散在分布于梗死周边区域,且联合治疗组细胞计数多于单纯移植组(P<0.05)。结论:HUCBMCs静脉移植联合CDDP治疗AMI,可提高移植细胞在心肌组织内存活率,拮抗心肌细胞凋亡,并进一步改善心功能。其机制可能与联合治疗减低心肌组织局部炎症反应及拮抗氧化应激作用增强有关。

人脐血单个核细胞移植治疗裸鼠放射性卵巢早衰

背景:干细胞移植成为近年来成为治疗卵巢早衰的热点之一;脐血中的单个核细胞含有大量间质干细胞、未成熟的干/祖细胞、内皮祖细胞等,可作为干细胞移植的重要来源。目的:观察人脐血单个核细胞移植对裸鼠放射性卵巢早衰的治疗作用。方法:将120只雌性BALB/C裸鼠随机分为4组,空白对照组不进行任何干预;模型组、静脉移植组、原位移植组进行^(60)Coγ射线照射,0.5 Gy/d,持续30 d,建立卵巢早衰模型;造模成功后,模型组双侧卵巢注入10μL DMEM,静脉移植组尾静脉注射10μL人脐血单个核细胞(1×10^(13) L^(-1)),原位移植组在双侧卵巢注入10μL人脐血单个核细胞(1×10^(13)L^(-1))。细胞移植30 d后,检测各组血清中雌二醇、卵泡激素、黄体生成素、抑制素B及血管内皮生长因子水平,病理观察裸鼠卵巢组织细胞凋亡及静脉移植组细胞存活情况。结果与结论:(1)血清指标检测结果:与空白对照组比较,模型组雌二醇、抑制素B、血管内皮生长因子水平降低(P<0.01),卵泡激素、黄体生成素水平升高(P<0.01)。与模型组比较,原位移植组雌二醇、抑制素B、血管内皮生长因子水平升高(P<0.01),卵泡激素、黄体生成素水平降低(P<0.01);静脉移植组卵泡激素、黄体生成素水平降低(P<0.05,P<0.01);(2)细胞凋亡:与模型组比较,静脉移植组、原位移植组可有效减少颗粒细胞的凋亡(P<0.05);(3)细胞存活:人脐血单个核细胞移植后可在裸鼠卵巢中存活;(4)结果表明:人脐血单个核细胞移植治疗裸鼠卵巢早衰,可调节内分泌水平,抑制卵巢细胞凋亡。

脐血单个核细胞治疗大脑中动脉闭塞性脑梗塞大鼠后行为学及胆碱能变化

目的:观察人脐血单个核细胞(Umbilical cord blood mononuclear cells,UCBMC)对大脑中动脉闭塞性脑梗塞大鼠的治疗作用。方法:制备脑梗塞大鼠大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将UCBMC给予脑梗塞大鼠进行治疗。用平横木行走实验评价大鼠运动功能;用TTC染色法观察脑梗塞区坏死比例;测定各组大鼠脑组织和血浆中乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)浓度和乙酰胆碱酯酶(True choline esterase,TChE)活性。结果:与MCAO组相比,给UCBMC组大鼠行为学评分明显升高(P<0.05),大脑坏死面积显著减少(P<0.01),脑组织中TChE活性和血浆中的TChE活性及Ach水平明显增强和增高(P<0.05)。结论:静脉注射UCBMC可促进脑梗塞大鼠中枢神经系统功能恢复及胆碱能系统恢复。