血管靶向光动力疗法与血卟啉单甲醚光动力疗法治疗微静脉畸形临床对比研究

目的:比较血管靶向光动力疗法(V-PDT)与血卟啉单甲醚光动力疗法(HMME-PDT)治疗微静脉畸形(原称鲜红斑痣)的临床疗效。方法:选取2017年6月-2018年11月在笔者医院皮肤科就诊的42例微静脉畸形患者,根据治疗方法不同将所有患者分为V-PDT组(20例)和HMME-PDT组(22例),V-PDT组患者给予V-PDT治疗,HMME-PDT组患者给予HMME-PDT治疗。观察并比较两组的有效率、不良反应发生情况以及疼痛评分。结果:HMME-PDT组有效率95.45%,显著高于V-PDT组的70.00%,两组有效率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。HMME-PDT组不良反应发生率9.09%,显著低于V-PDT组的40.00%,且差异具有统计学意义(P<0.05)。HMME-PDT组手术疼痛评分显著低于V-PDT组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在微静脉畸形患者的治疗过程中,采用HMME-PDT进行治疗,临床疗效更加显著,可显著控制不良反应发生率,值得临床推广应用。

血卟啉单甲醚光动力疗法预防兔颈动静脉内瘘静脉内膜增生

目的研究血卟啉单甲醚光动力疗法(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME-PDT)对兔颈动静脉内瘘静脉内膜增生(venous neointimal hyperplasia,VNH)的影响。方法建立兔颈总动脉-颈静脉端侧吻合动静脉内瘘(arteriovenous fistulas,AVF)模型32例,按随机数字表法分为4组,每组8只:对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组、光动力治疗组。术后彩色多普勒超声检查吻合口通畅情况及血流频谱,术后30 d截取AVF吻合口静脉端血管组织,利用HE染色、Masson染色观测各组静脉内中膜厚度及管腔面积;利用免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、α-SMA、Caspase3的表达分布;利用Western blot技术检测PCNA、α-SMA、Caspase3、Caspase9、Bax、Bcl-2蛋白的表达量。结果HE染色显示光动力治疗组血管静脉内中膜厚度明显减小,Masson染色显示光动力治疗组管腔面积较其余3组明显增大(P<0.05)。免疫组织化学染色统计结果表明光动力治疗组PCNA、α-SMA表达较其余3组明显降低(P<0.05),Caspase3表达较其余3组明显增加(P<0.05)。Western blot结果显示光动力治疗组PCNA、Bcl-2、ɑ-SMA表达以及Bcl-2/Bax指数较其余3组明显增降低(P<0.05),Caspase3、Caspase9、Bax表达较其余3组明显增加(P<0.05)。结论HMME-PDT能够明显减轻兔AVF内中膜增生。HMME-PDT通过Bcl-2/Bax凋亡途径促进血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡,抑制其增殖,从而达到抑制动静脉内瘘静脉内膜增生的效果。

血卟啉光动力学疗法治疗光化性角化病的疗效及安全性

目的研究血卟啉光动力学疗法治疗光化性角化病的疗效及安全性。方法择取2020年10月至2022年10月在本院就诊的40例光化性角化病患者,随机分组,对照组纳入实施常规治疗的20例患者,观察组则纳入施以血卟啉光动力学疗法治疗的20例患者。将两组的治疗效果进行比对。结果观察组的疾病总缓解率高于对照组,复发率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不良反应发生率组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对光化性角化病患者实施血卟啉光动力学疗法安全有效,还可降低复发率。

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响。方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40μg/ml的HMME孵育1h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30min、1和2h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2·5、5、10、20和40μg/ml的HMME孵育2h,用532nm的倍频Nd∶YAG激光以20mW/cm2的功率密度分别照射0、2·5、5、10、20min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率。结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多。单独照光或以高达40μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P>0·05)。在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性。结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用。

钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用

目的了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后HeLa细胞中的变化和作用。方法Fura-2/AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度犤Ca2+犦i的变化,MTT法分析PDT及钙离子对HeLa细胞存活率的影响,Western印迹法分析HMME-PDT后HeLa细胞的肌浆/内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况。结果HMME-PDT处理后即刻HeLa细胞内犤Ca2+犦i就开始增高,且与PDT剂量成正相关用,BAPTA/AM拮抗犤Ca2+犦i的升高可增加HeLa细胞的存活率。同时HMME-PDT可引起SERCA2蛋白的降解。结论HMME-PDT处理后HeLa细胞内犤Ca2+犦i可迅速增高,犤Ca2+犦i升高可能与SERCA2蛋白的降解相关,并可促进HeLa细胞的死亡。

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用

目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚(HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用。方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型,将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组,每组4只兔。光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚HMME(15μg/ml)溶液充盈在移植静脉段,再以532nm波长半导体激光器在吻合口(每只兔2处吻合口)附近进行血管外照射5min,功率密度100mW/cm2,能量密度30J/cm2;单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段,再用激光照射;单纯光敏剂灌注组仅用HMME(15μg/ml)溶液充盈移植静脉段5min;空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段5min。术后第4周于各实验组移植静脉的动静脉连接部及其两侧0.5cm处的动脉端、静脉端取材,常规石蜡包埋切片HE染色,组织病理观察,采用IMAGE-ProPlus生物医学图像分析系统,观察不同处理组内膜增生程度的差异。结果在移植静脉吻合口的动静脉连接部、动脉端及静脉端,光动力学治疗组与其他各组相比内膜增生程度明显减低。结论光动力学疗法对移植静脉早期阶段的再狭窄有明显的抑制效应。

血卟啉单甲醚光动力学疗法对小鼠接触性超敏反应的抑制效应

目的探讨血卟啉单甲醚光动力学疗法(hematoporphyrin monomethyl ether mediated photodynamic therapy,HMME-PDT)对小鼠接触性超敏反应(contacthypersensitivity,CHS)的影响。方法雌性BALB/c小鼠按功率密度分为50和100mW/cm2两个实验组,同时设置单纯照光组、单纯光敏剂组、空白对照组以及DNFB组。PDT处理后3d,各实验组分别以2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱发小鼠右耳变应性接触性皮炎,以游标卡尺测量发敏前后右耳的厚度差;对于功率密度为50mW/cm2组,进一步观察了PDT处理前4d或PDT处理后1、3和12d,DNFB发敏前后小鼠右耳的厚度差,并对PDT后3d组行组织学检查,以目镜网格测微尺计算浸润炎症细胞数量。结果处理前4d预先以DNFB致敏,PDT对CHS无抑制作用(P>0.05)。反之,PDT照射后1、3或12d再以DNFB致敏,则PDT能对CHS产生显著抑制作用(P<0.01),其抑制率分别为58%,63%,47%。且无论是以50mW/cm2还是以100mW/cm2功率密度的激光照射,这种抑制作用均存在。未经任何干预,DNFB致敏组致敏右耳浸润的单核细胞和中性粒细胞的数量增加,而经PDT处理后,浸润的炎性细胞明显减少,二者之间存在显著性差异(P<0.01)。结论HMME-PDT能对正常小鼠接触性超敏反应产生明显抑制作用,并有短暂持续效应。

血卟啉单甲醚-光动力学疗法治疗实验性脉络膜新生血管

目的观察光敏剂血卟啉单甲醚-630nm半导体激光器光动力学疗法对实验性脉络膜新生血管的疗效及影响疗效的因素。方法BN大鼠共21只,随机分为空白对照组(C)和PDT治疗组(T1～T6)。氪激光光凝诱导BN大鼠建立脉络膜新生血管动物模型后14～21d,T1～T3组大鼠股静脉注射血卟啉单甲醚15mg/kg后20min,分别以400、600、1000 mW/cm^2功率密度,波长630nm半导体激光照射90s,即能量密度36、54、90 J/cm^2;T4～T6组大鼠在给予血卟啉单甲醚30mg/kg后,以波长630 nm半导体激光分别照射60、90、150s,即能量密度分别为36、54、90 J/cm^2。眼底光斑直径皆为800～1000μm。治疗后24 h、7 d行荧光素眼底血管造影枪查和组织病理学检查,治疗后7d行脉络膜平片的免疫组化检查。结果荧光素眼底血管造影显示各治疗参数的CNV闭合率不同,随能量密度的增加和光敏剂剂量的增加而提高。T1、T2、T3组PDT后第24小时CNV闭合率分别为39.1%、65.2%、87.5%,PDT后第7天闭合率分别为0%、5.6%、45.5%。T4、T5、T6组PDT后第24小时CNV闭合率分别为56.5%、78.3%、90.9%,PDT后第7天闭合率分别为25.0%、68.8%、93.3%。PDT后第24小时除T1组外,其余各组均可见不同程度的CNV和脉络膜毛细血管闭合及血栓形成;T2组视网膜毛细血管和脉络膜大血管未闭合;T4、T5组部分视网膜毛细血管有附壁红细胞聚集未堵塞管腔;T3、T6组视网膜毛细血管、CNV、脉络膜毛细血管及大部分脉络膜大血管闭合。PDT后第7天各组闭塞的视网膜血管和脉络膜大血管未见完全开放。脉络膜平片的免疫组化分析显示对形成血管腔和未形成血管腔的内皮细胞均有特异性表达,用方差分析统计方法结果显示C组与T1～T6组间差异有统计意义(P<0.01)。结论血卟啉单甲醚-光动力学疗法治疗实验性脉络膜新生血管疗效确切。

塞来昔布联合血卟啉单甲醚-光动力疗法对人鼻咽癌CNE-2细胞作用的初步研究

目的:探讨环氧化酶-2抑制剂塞来昔布联合血卟啉单甲醚(HMME)光动力对鼻咽癌细胞的作用。方法:实验分对照组、单独PDT组、单独塞来昔布组和联合作用组。光敏剂HMME的剂量为2.5μg/mL,光能量密度分别为0.125J/cm2、0.25J/cm2和0.5J/cm2,MTT法检测各组作用24h后的细胞抑制率,并用金氏公式分析联合效应。HE染色观察细胞形态变化和数量改变,并用Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况。结果:64μM和80μM的塞来昔布对CNE-2细胞的抑制率分别是4.84%和13.23%,2.5μg/mL HMME+0.25J/cm2PDT组的抑制率为28.34%,80μM的塞来昔布与2.5μg/mL HMME+0.25J/cm2PDT联合组的抑制率为44.57%,金氏公式分析显示在所选的剂量中所有的HMME-PDT与塞来昔布联合处理均有协同或相加效应。HE染色显示,各处理组与对照组相比细胞稀少,形态不规则,部分细胞呈凋亡样改变,联合处理组细胞稀少更明显,死亡细胞更多,Hoechst 33342荧光染色可见细胞核出现明显染色质浓集、核碎裂,核固缩、蓝色荧光强度增加的凋亡现象,联合处理组的细胞死亡更多,凋亡现象更明显。结论:单用塞来昔布或HMME-PDT均能抑制CNE-2细胞的生长,塞来昔布联合HMME-PDT产生相加或协同效应。

氟比洛芬酯在鲜红斑痣血卟啉单甲醚光动力疗法中镇痛效果的临床初步观察

目的观察氟比洛芬酯在鲜红斑痣血卟啉单甲醚光动力治疗过程中的镇痛效果。方法选择门诊大面积运用光动力治疗的面颈部鲜红斑痣成人患者20例,年龄18~30岁。第一次光动力治疗时不使用镇痛药物,术后5 min让患者用数字评分法对术中疼痛程度进行自我评估;第二次治疗前20 min静滴氟比洛芬酯注射液50 mg,术后5 min让患者再次评估术中疼痛程度。每次治疗后2个月对单次的疗效再进行评估。结果第二次治疗组(氟比洛芬酯组)疼痛评分低于第一次治疗组(对照组)的疼痛评分,差异具有统计学意义(P<0.001);两组治疗的单次疗效差异无统计学意义(P>0.05)。结论氟比洛芬酯用于鲜红斑痣血卟啉单甲醚光动力疗法的镇痛是安全有效的。

血卟啉单甲醚介导的光动力疗法对胃癌细胞MGC-803的光动力杀伤效应

目的探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导光动力疗法(PDT)对胃癌细胞MGC-803的生长抑制作用。方法荧光显微镜观察血卟啉单甲醚在胃癌细胞MGC-803内的分布情况,应用荧光光谱分析仪检测MGC-803细胞内HMME的荧光光谱,从而确定最佳孵育时间。将胃癌细胞MGC-803与不同浓度的HMME孵育90 min后,分别采用不同的光强度照射,使用CCK-8试剂盒分析MGC-803细胞的存活率。结果荧光强度与孵育时间在90 min内呈正相关,在90 min处达到峰值。随着HMME浓度或光照强度的逐渐增加,胃癌细胞MGC-803的生长抑制率显著增加,细胞存活率与HMME浓度、光强度的乘积呈e指数衰减,光动力因子B=光输出功率×照射时间×HMME浓度(B=I_(0)×t×C)。结论HMME介导的PDT可显著抑制HMC-803细胞的增殖,光动力因子B可为临床的个体化治疗提供依据。

血卟啉单甲醚介导的光动力疗法对裸鼠人食管癌移植瘤的实验研究

目的探究血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人食管癌生长的抑制作用。方法以人食管癌ECA-109细胞制备出裸小鼠人食管癌移植肿瘤模型,经裸小鼠尾静脉注入HMME液(20 mg/kg),光敏化2 h后用半导体激光仪(波长为630 nm)垂直照射肿瘤(能量密度4 J/cm2),荷瘤对照组、单纯激光组、单纯HMME组和HMME-PDT治疗组分别治疗后,测量裸鼠肿瘤大小并计算肿瘤体积,末次测量后切除肿瘤经HE染色后行病理形态学观察。结果 HMME-PDT治疗组肿瘤体积明显小于其他三组,差异有统计学意义(P<0.05),经HMME-PDT治疗后肿瘤细胞大片凝固性坏死,HMME-PDT治疗组平均生存时间(35 d)长于对照组(24 d)。结论 HMME-PDT治疗能明显抑制人食管癌裸小鼠移植瘤的生长,并可延长荷瘤裸小鼠的生存期限,而单纯激光组和单纯HMME组不能明显抑制裸鼠移植瘤的生长。

血卟啉单甲醚介导的光动力抗微生物化疗法对牙龈卟啉单胞菌体外杀菌效果的研究

为了研究血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力抗微生物化疗法(PACT)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyrom-onas gingivalis)的杀菌效果,采用荧光分光光度计观察HMME光照后产生活性氧的荧光量,后采用平板菌落计数法检测HMME介导的PACT对牙龈卟啉单胞菌的体外杀菌效果,并用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察各组处理后死活菌的分布情况,使用电泳光散射法检测HMME与牙龈卟啉单胞菌的zeta电位。结果表明:HMME在光照下主要产生单线态氧(P<0.05),其介导的PACT组细菌存活率明显下降,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);CLSM观测PACT组发现大量红色荧光,说明HMME介导PACT可有效杀灭牙龈卟啉单胞菌,HMME与牙龈卟啉单胞菌均为负电位,影响二者结合。HMME介导的PACT可有效杀灭牙龈卟啉单胞菌,为PACT应用于临床治疗牙周炎提供了试验依据,也表明后期需要研发带正电荷的新型光敏剂,以提高光动力杀菌效果。

血卟啉单甲醚光动力疗法治疗鲜红斑痣的临床观察

目的观察血卟啉单甲醚(hematopophyrin monomethyl ether,HMME)光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗鲜红斑痣的临床疗效和不良反应。方法鲜红斑痣患者91例,粉红型34例,紫红型53例,增厚型4例,静脉注射HMME 5 mg/kg后,采用波长532 nm激光照射,首次治疗8周后进行第二次治疗。每次治疗后4 d、8周随访,进行疗效和安全性评价。结果 PDT治疗1次后,鲜红斑痣患者的基愈率、总显效率、总好转率分别为18.7%、58.2%、85.7%,不同鲜红斑痣分型疗效比较,粉红型优于紫红型和增厚型;不同部位皮损疗效比较,颈部疗效最佳,其次是面外侧区,面正中区疗效最差。二次治疗后的基愈率、总显效率、总好转率分别为44.4%、60.0%、93.3%,与治疗1次的疗效比较,差异具有非常显著意义(P<0.001)。所有患者治疗过程中均出现不同程度的灼热、疼痛、肿胀、结痂反应,无需处理,1～2周内自行消退。治疗的主要不良反应为局部出现轻微一过性色素沉着及色素减退,发生率分别为36.3%、6.6%,无需特殊处理,3～9个月时自行恢复。结论 HMME-PDT治疗鲜红斑痣高效、安全,不良反应发生率低。

钆血卟啉单甲醚介导的光动力疗法治疗口腔舌鳞状细胞癌移植瘤的实验研究

目的:探讨钆血卟啉单甲醚(gadolinium coordinated hemetoporphyrin monomethyl ether,Gd-HMME)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对裸鼠口腔舌鳞状细胞癌(oral tongue squamous cell carcinoma,OTSCC)移植瘤的治疗效果,为今后的临床治疗提供理论依据。方法:选取36只BALB/c-nu裸鼠随机分为4组,分别为对照组、PDT组、Gd-HMME组和Gd-HMME-PDT组,每组9只。治疗后定期测量裸鼠体重以及肿瘤体积,14 d后各组随机处死裸鼠6只,计算抑瘤率和生命延长率,行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色后病理形态学观察,评估Gd-HMME-PDT对移植瘤的治疗效果。结果:实验结果显示,各处理组的肿瘤体积均小于对照组,Gd-HMME-PDT组肿瘤体积减小最明显(P<0.01);PDT组、Gd-HMME组、Gd-HMME-PDT组的抑瘤率分别为3.17%、6.13%、59.62%。HE染色可见Gd-HMME-PDT组肿瘤细胞坏死和空泡性变,对照组及PDT组、Gd-HMME组均未见明显改变;PDT组、Gd-HMME组、Gd-HMME-PDT组的生命延长率分别为2.82%、7.04%、73.24%。结论:Gd-HMME-PDT对口腔舌鳞状细胞癌移植瘤的生长具有抑制作用,并且可以延长裸鼠的生存时间。

光动力疗法治疗鲜红斑痣的基础研究——血啉甲醚与血卟啉衍生物吸收特性的比较

目的 观察新型光敏剂———血啉甲醚 (HMME)在鸡冠皮肤组织和血管内皮细胞 (EC)的吸收特点。方法 莱亨鸡 12只 ,分为HMME组和血卟啉衍生物 (HpD)组 ,每组 6只。分别静脉注射HMME或HpD10mg kg ,每隔 10min取血 2 5ml和鸡冠皮肤组织 2 5g。培养新生儿脐带EC ,培养液中加入HMME或HpD ,孵育浓度分别为 2 0、40、6 0、80和 10 0μg ml,孵育时间为即刻、15、30、6 0、12 0、180和 2 40min。采用荧光分析法测定光敏剂含量 ,并绘制EC吸收光敏剂的浓度—含量和时间—含量关系曲线。结果 静脉注射HMME或HpD后 ,其血清浓度的峰值出现在注射后 10min ,以后随时间迅速下降 ,二者的曲线形态基本一致。HMME在鸡冠组织中的含量于注射后 10min显著高于HpD(P <0 0 1) ,以后虽然下降速率较快 ,但在注射后 80min仍显著高于HpD(P <0 0 5 )。培养EC可迅速吸收HMME和HpD ,30min达峰值的 89%以上 ;其吸收量与孵育浓度呈线性关系 ,对HMME的吸收量显著高于HpD(P <0 0 1)。结论 HMME较HpD更容易被皮肤微血管EC摄取 。

原子力显微镜观测血卟啉单甲醚对细菌光动力杀伤作用

【目的】探讨血卟啉单甲醚(Hematoporyrin monomethyl Ether,HMME)对革兰氏阳性(G+)、阴性(G-)菌的光动力杀伤作用。【方法】通过平板菌落计数法和原子力显微镜(AFM),观察细菌与HMME作用前后形貌的变化。【结论】当HMME浓度为50μg/mL,可见光(光功密度为200mW/cm2)光照30min时90%以上的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)能被杀死,无光照时对S.aureus杀灭效果显著。同等条件下,无论光照还是无光照,HMME对大肠杆菌(E.coli)无明显的杀伤作用。AFM图像显示,S.aureus细菌表面破坏严重,完全碎裂成鱼鳞状的片状堆积。对HMME作用后的E.coli扫描可见,菌体原来光滑的表面变成网格状的裂纹排列。【讨论】HMME对G+有明显的光失活效应,而对G-效果不明显。AFM的超微图像显示HMME对细菌细胞的攻击位点主要在细胞膜上。AFM为我们研究光敏剂对细菌的光动力损伤作用机制的可视化提供了依据。