血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠血清NO浓度的影响

目的研究血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠血清 NO浓度的影响。方法第 1次实验用 10 6 和 10 8CFU疫苗分别皮下注射免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组 ;第 2次实验用 10 6 CFU疫苗皮下和静脉分别注射免疫鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离血清 ,用 NO试剂盒检测小鼠血清 NO浓度。结果发现疫苗免疫 ,尾蚴攻击后血清 NO浓度降低 ;疫苗皮下和静脉注射免疫后 4～ 16周血清 NO浓度升高 ,分别于免疫后 10周或 16周达最高水平。结论血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗能降低感染鼠血清 NO浓度 ,提高宿主抗血吸虫感染的保护力。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种BALB/c鼠后肝脏病理学变化

血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗是一种新型疫苗。本文用 10 6克隆形成单位 ( Colony- froming unit,CFU)和10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ c鼠 ,接种后 8wk用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 wk剖杀小鼠 ,分离肝脏 ,观察其病理学变化 ,同时设 PBS对照组。光镜下观察发现肝脏病变明显减轻 ,肉芽肿数目少 ,体积小 ;电镜观察发现肝组织病变轻微 ,大部分肝细胞变性 ,肝纤维组织增生 ,有嗜酸粒细胞和淋巴细胞浸润。这些结果为阐明血吸虫重组 BCG- Sj2 6

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素

目的 探讨血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素。方法 将实验动物随机分为 8组 ,以免疫后不同攻击感染时间 ,不同免疫途径和不同免疫次数为主要参数。结果 各实验组减虫率为 2 9.6 9%～ 39.74% ,减卵率为 37.0 2 %～ 6 2 .86 % ,各实验组减虫率和减卵率与对照组相比 ,差异均有显著意义(P <0 .0 5 )或极显著意义 (P <0 .0 1)。结论 8周 。

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠T淋巴细胞亚群变化的研究

目的研究血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗对小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法实验一采用106和108CFU疫苗皮下接种BALB／c小鼠，接种后8WK用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染6wk剖杀小鼠，取脾制备脾细胞，同时设有PBS对照组。实验二分别用106CFU疫苗皮下和静脉注射免疫小鼠，分别于免疫后0、4、8、10、14和16wk各剖杀4只，分离脾脏，用FACsort流式细胞仪分析T细胞CD4＋和CD8＋亚群百分比。结果实验一疫苗免疫络小鼠经尾蚴攻击后脾T细胞CD4＋亚群明显升高，CD8＋亚群缓慢增加。实验二动态观察发现在皮下和静脉注射组，CD4＋亚群分别于免疫后10和18WK显著增加；皮下注射组CD8＋亚群在整个观察期间均无明显变化，静脉注射组则于免疫后4～16wk有轻度增加。结论T细胞CD4＋亚群可能在疫苗保护性免疫中起重要作用。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察

目的探讨日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用106和108CFU疫苗皮下接种免疫BALB/C鼠,免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后6周剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,观察肝脏病理变化,测量虫卵肉芽肿周长和面积,测定血清中CAg、IgG及其亚类水平,同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16.64%～46.20%,减卵率为55.75%～60.50%,肝组织病变明显减轻,虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少,血清IgG和IgG2a水平明显升高,108CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗,值得进一步深入研究。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG抗体反应的动态观察

目的：检测日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的IgG抗体。方法：将106CFU疫苗采用皮下和静脉注射分别免疫BABL/C鼠，分别于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只，收集血清，常规ELISA法检测IgG抗体，同时设PBS皮下注射对照组。结果：皮下注射组和静脉注射组IgG抗体水平都于免疫后4周显著增加，免疫后10周达最高水平，并持续在较高水平至免疫后16周。疫苗免疫后10周静脉注射组的抗体水平显著高于皮下注射组。结论：日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗静脉注射免疫效果优于皮下注射。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠血清IgG及其亚类免疫应答的研究

目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗接种小鼠 ,尾蚴攻击后诱导的血清 Ig G及其亚类变化。方法 采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ C鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周扑杀小鼠 ,收集血清 ,用常规 EL ISA法检测 Ig G及其亚类。结果 疫苗免疫后 8周血清 Ig G水平明显升高 ;疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 6周血清 Ig G2 a显著增加 ,但 Ig G1 和Ig G2 b无明显变化。结论 日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可能诱导宿主产生高水平的 Ig G和Ig G2 a。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究

为检测血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗免疫小鼠血清 Ig G动态变化和免疫保护力 ,采用 10 6 CFU疫苗皮下 1次和 3次接种小鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后 6周剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,同时设有 BCG对照组。结果发现 :实验组免疫后血清 Ig G抗体迅速升高并持续于高水平 ;减虫率分别为 39.74%和 39.74% ,减卵率分别为 6 2 .86 %和 5 5 .6 2 % ,与对照组相比均有非常显著的差异 (P<0 .0 1)。而免疫 3次和免疫 1次小鼠血清 Ig G抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗皮下注射 1次即能诱导小鼠较高水平的 Ig G抗体和免疫保护力 ,是一种比较理想的新型疫苗 。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠脾细胞TNF-α和IL-1变化的研究

目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞产生 TNF-α和 IL - 1的影响。方法 实验 1分别采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8w用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 w剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。实验 2用 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16 w各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或丝裂原刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 TNF-α水平 ,用成纤维细胞增殖法检测 IL - 1的生物活性。结果 疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,TNF-α和 IL - 1水平显著升高。动态观察发现皮下注射组 TNF-α和 IL - 1于免疫后 4～ 8w达最高水平 ;静脉注射组 TNF-α和 IL - 1分别于免疫后 16 w和 4～ 8w达较高水平。结论 日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗促进小鼠脾细胞较早分泌 TNF-α和IL - 1。

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和CAg的动态观察

目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和CAg反应。 方法 10 6CFU疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/C鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14、16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg。结果 皮下注射组IgG在免疫后 14周 ,IgG1在免疫后 14～ 16周 ,IgG2a在免疫后 4周和IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,未能测到CAg ;静脉注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1和IgG2a在免疫后 8周以及IgG 2b在免疫后 16周达最高水平 ,CAg在免疫后 10周升高。结论 日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b,静脉注射的免疫效果优于皮下注射。

日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/26GST)的免疫原性鉴定

目的 鉴定纯化的重组日本血吸虫线粒体相关融合蛋白 (r Sj3 3 8/2 6GST)的免疫原性。方法 对已构建的阳性表达菌 p GEX-6p-1/Sj3 3 8进行大量诱导表达 ,并对纯化蛋白进行活性分析。将粗提包涵体蛋白、复性包涵体蛋白、经分子筛纯化并复性的蛋白分别免疫新西兰家兔 2只。用 West-ern blot及 Dot-EL ISA方法检测特异性抗体的免疫原性及各组抗体水平。结果 用分子筛纯化的融合蛋白 r Sj3 3 8/2 6GST经 SDS-PAGE电泳鉴定显示达电泳纯 ;Western blot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及 r Sj3 3 8/2 6GST免疫兔血清识别。Dot-ELISA法检测结果表明 ,经分子筛纯化并复性的 r Sj3 3 8/2 6GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高 ,为 1∶ 5 12 0 0。结论 纯化后的融合蛋白 r Sj3 3 8/2 6GST具有较高的纯度及较强的免疫活性 ,可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子 。

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，制成单个悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高，ConA刺激时于4～18周显著升高，均于免疫后8周达最高水平；IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高，均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高，并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）；两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高，分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著，均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）；IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖，增加cD＋T细胞的数目，抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。

重组日本血吸虫26kDa GST抗原诱导水牛产生抗体及减少排卵的初步观察

目的 观察rSjc2 6GST抗原诱导水牛产生特异性抗体水平以及排卵数量的减少。 方法 2 0头水牛随机分为两组 ,每组 1 0头。试验组免疫rSjc2 6GST抗原 ,对照组注射佐剂 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴后 ,定期检测抗rSjc2 6GST抗体、粪检虫卵和毛蚴。 结果 水牛免疫rSjc2 6GST抗原后 1个月 ,产生抗rSjc2 6GST抗体 ,至 1 2个月一直维持较高水平。试验组水牛感染后 50～ 90d,粪便EPG和MPG几何均值明显低于对照组 ,但在 1 0 0d以后两组的EPG和MPG均逐渐降低 ,至 330d均为 0。结论 水牛免疫rSjc2 6GST抗原后能产生特异性抗体 ,维持较高水平至 1 2个月 ,在感染后 3个月内有显著的减卵效果 。

重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠sIL-2R和IFN-γ的变化

目的研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞 s IL- 2 R和 IFN- γ的影响。方法第 1次实验采用 1× 10 6 和 1× 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/ C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。第 2次实验用 1× 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或 Con A刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 s IL 2 - R和 IFN -γ含量。结果疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,s IL- 2 R和 IFN- γ水平显著升高 ;动态观察发现 s IL- 2 R和 IFN- γ分别于免疫后 8～ 10周和 4～ 8周达最高水平。结论日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可加强宿主 Th1反应 ,促进 Th1细胞分泌 IL- 2和 IFN- γ,它们与免疫细胞相互作用 。

重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠体液免疫应答的动态观察

目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和循环抗原 (circulat ingantigen ,CAg)反应。方法 1× 10 6克隆形成单位 (colony formingunit,CFU)疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/c鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg ,同时设PBS皮下注射对照组。结果皮下注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1在免疫后 14～ 16周 ,IgG2a在免疫后 4周和IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,未能测到CAg ;静脉注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1和IgG2a在免疫后 8周以及IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,CAg在免疫后 14周升高。结论 日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b 。

日本血吸虫重组Bb疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠不同时间诱导的免疫应答作用

目的：探讨日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（rBb）疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠后不同时间诱导的免疫应答作用,阐明该疫苗的免疫应答机制。方法：将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经皮下注射（皮下注射组,SC组）和鼻腔黏膜（鼻腔黏膜接种组,IN组）接种免疫小鼠,在免疫后0-20周每2周每组随机取4只小鼠,无菌取脾,制备悬浮脾细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测脾细胞增殖活性,流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡率,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞上清液中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素17（IL-17）的动态变化。结果：与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞增殖活性于免疫后8周达到峰值（P〈0.05）,IN组小鼠于免疫后4周达到峰值（P〈0.05）。与免疫0周时比较,SC组和IN组小鼠CD4＋T细胞均于免疫后8周达到峰值（P〈0.05）;CD8＋T细胞分别于8周和6周达到峰值,但差异无统计学意义（P〉0.05）。与免疫0周时比较,2组小鼠脾细胞上清液中IFN-γ水平均于免疫后2周达到峰值（P〈0.05）,SC组和IN组IL-17水平分别于免疫后14和12周达到峰值（P〈0.05）。与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞凋亡率于免疫后2周达到峰值（P〈0.05）,IN组于4周达到峰值（P〈0.05）。IN组与SC组小鼠各检测指标比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：经皮下注射和鼻腔黏膜途径接种的日本血吸虫重组Bb疫苗早期即可诱导小鼠产生有效的免疫应答,以Th1型免疫应答为主,2种免疫途径所诱导的免疫应答无明显差异。

重组IFN-γ用作reSj26kDaGST佐剂的实验观察

目的探讨重组ＩＦＮ－γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法用ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加鼠重组ＩＦＮ－γ，ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加福氏佐剂以及ＩＦＮ－γ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后４５ｄ解剖小鼠，比较各组小鼠成虫检获数及克肝卵数。结果ＩＦＮ－γ／ＧＳＴ组小鼠的减虫率和减卵率均略高于ＦＣＡ／ＧＳＴ组。结论ＩＦＮ－γ可以增强ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ保护性免疫效果，初步提示ＩＦＮ－γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。

日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α(+),构建重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1991bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pET32α(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000Mr的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22%;Western-blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。

日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST的构建及其表达

目的构建日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎日本血吸虫成虫,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST抗原编码基因,克隆至原核表达载体pET28α,构建重组质粒pET28α-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出676 bp的Sj26GST基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST基因成功插入pET28α中,SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约为36×103的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的26%;Western blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。