血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5在创伤性骨关节炎早期软骨细胞凋亡中作用机制

目的探究血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(ADAMTS-5)基因对小鼠创伤性骨关节炎(PTOA)早期软骨细胞凋亡的影响及其具体的作用机制。方法分别随机选择3只8周龄转基因雌性C57BL/6小鼠(实验组),3只8周龄普通雌性C57BL/6小鼠(对照组),构建小鼠双侧膝关节骨折PTOA模型,术后4周取样。采用番红O染色、Mankin评分评估软骨损伤情况,通过TUNEL染色、免疫荧光染色检测软骨细胞凋亡情况,以明确ADAMTS-5对PTOA早期软骨细胞凋亡的影响。此外,利用ADAMTS-5体外转染ATDC5小鼠成软骨细胞系,通过干扰及过表达慢病毒转染方法构建过表达稳转株组、过表达对照组、干扰稳转株组、干扰对照组。采用MTT法检测软骨细胞增殖情况,通过免疫荧光染色观察ADAMTS-5、Caspase-9蛋白的表达情况,以明确ADAMTS-5影响软骨细胞凋亡的分子机制。结果番红O染色及Mankin评分显示,相较于对照组,实验组小鼠在骨折部位的软骨损伤较轻;TUNEL染色显示,相较于对照组,实验组绿色荧光染色更弱、数量更少;免疫荧光染色显示,相较于对照组,实验组Caspase蛋白红染更弱、数量更少。MTT法显示,第72 h时,与干扰稳转株组及过表达稳转株组相比,干扰对照组及过表达对照组光密度(OD)值显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色显示,过表达稳转株组与干扰稳转株组的ADAMTS-5及Caspase-9蛋白表达明显高于过表达对照组及干扰对照组,即随着ADAMTS-5基因的表达,Caspase-9蛋白的含量逐渐增加,最终促使软骨细胞发生凋亡。结论ADAMTS-5对小鼠PTOA早期软骨细胞凋亡具有促进作用,其可通过促进Caspase-9蛋白的生成加速软骨细胞发生凋亡。

miR-181a-5p在ACS患者血清中表达及对人HCASMC细胞增殖迁移的调控作用、与ADAMTS1靶向关系

目的观察微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)在急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清中的表达及对人冠状动脉平滑肌细胞(human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC)增殖和迁移的调控作用,探讨miR-181a-5p与血小板反应蛋白解整合素金属肽酶1(ADAMTS1)的靶向关系。方法采集100例ACS患者[ACS组,其中急性心肌梗死(AMI)患者55例、不稳定心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)患者44例]、40例冠脉造影结果阴性者(对照组)的外周静脉血,采用实时荧光定量PCR法检测两组血清miR-181a-5p。取对数生长期HCASMC细胞,分为一、二、三、四组,采用脂质体转染法分别转染miR-181a-5p模拟物(miR-181a-5p mimics)、模拟物阴性对照(mimics-NC)、miR-181a-5p抑制物(miR-181a-5p inhibitor)及抑制物阴性对照(inhibitor-NC),培养48 h时采用CCK-8法测算细胞增殖能力、采用Transwell迁移实验测算细胞迁移能力,培养24 h时采用采用Western Blotting法检测各组细胞ADAMTS1蛋白。取对数生长期HCASMC细胞分为A、B、C、D四组,A组先后转染突变型ADAMTS1荧光素酶报告基因质粒(ADAMTS1-MUT)、miR-181a-5p mimics;B组先后转染ADAMTS1-MUT、mimics-NC;C组先后转染野生型ADAMTS1荧光素酶报告基因质粒(ADAMTS1-WT)、miR-181a-5p mimics;D组先后转染ADAMTS1-WT、mimics-NC,培养24 h时取各组细胞采用双荧光素酶报告基因实验检测各组细胞相对荧光素酶活性。结果与对照组相比,ACS组患者血清miR-181a-5p相对表达量低(P<0.01);与UAP患者相比,AMI患者血清miR-181a-5p相对表达量低(P<0.01)。与二组相比,培养48 h时一组细胞增殖能力和迁移能力降低,培养24 h时一组细胞ADAMTS1蛋白相对表达量低(P均<0.01);与四组相比,培养48 h时三组细胞增殖能力和迁移能力高,培养24 h时三组细胞ADAMTS1蛋白相对表达量高(P均<0.01)。A、B、C、D组细胞荧光素酶活性分别为1.03±0.03、1.01±0.04、0.45±0.06、1.02±0.05;与B组相比,A组细胞荧光素酶活性明显低(P<0.05)。结论miR-181a-5p在ACS患者血清中低表达。miR-181a-5p可抑制HCASMC细胞的增殖、迁移,其机制可能为miR-181a-5p靶向促进细胞ADAMTS1蛋白表达。

心脏超声造影联合血清ADAMTS-4、OPG评估冠心病病人冠状动脉病变程度的临床价值

目的:探讨心脏超声造影联合血清血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-4(ADAMTS-4)、骨保护素(OPG)评估冠心病病人冠状动脉病变程度的临床价值。方法:选取2019年10月—2022年10月四川绵阳四0四医院收治的90例冠心病病人作为研究对象,根据Gensini评分将病人分为重度病变组(30例)、中度病变组(28例)、轻度病变组(32例),均行心脏超声造影检查及血清ADAMTS-4、OPG检测。比较3组心脏超声造影定量参数(A值、β值)及血清ADAMTS-4、OPG检测值;采用Pearson相关性分析心脏超声造影定量参数及血清ADAMTS-4、OPG水平与Gensini评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估心脏超声造影定量参数及血清ADAMTS-4、OPG水平对重度冠状动脉病变的评估效能。结果:中度病变组、重度病变组心脏超声造影定量参数A值、β值低于轻度病变组,血清ADAMTS-4、OPG水平高于轻度病变组,差异均有统计学意义(P<0.05);重度病变组心脏超声造影定量参数A值、β值低于中度病变组,血清ADAMTS-4、OPG水平高于中度病变组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,心脏超声造影A值、β值与Gensini评分均呈负相关(P<0.05),血清ADAMTS-4、OPG水平与Gensini评分均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线显示,A值、β值及血清ADAMTS-4、OPG单独诊断重度冠状动脉病变的最佳截断值分别为3.38、0.30、107.57 ng/mL、0.20 ng/mL,对应的曲线下面积(AUC)分别为0.797,0.883,0.895,0.680,4项指标联合诊断的AUC为0.937。结论:心脏超声造影定量参数A值、β值及血清ADAMTS-4、OPG与冠心病病人冠状动脉病变程度存在相关性,联合检测在重度冠状动脉病变的评估中具有较高的应用价值。

内脂素上调ADAMTS-4表达增加动脉粥样硬化斑块易损性的研究

目的:探讨内脂素对冠状动脉粥样硬化(AS)斑块易损性的影响。方法:入选中日友好医院心脏科2016年1月—2017年1月间60例ST段抬高性心肌梗死(STEMI)患者,收集患者外周动脉(桡动脉或股动脉)的血样和本次导致STEMI发生的冠状动脉罪犯病变局部血样,比较外周动脉与冠状动脉罪犯病变局部内脂素及血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-4(ADAMTS-4)的表达水平,并对两者的表达水平行相关性分析,进而通过体外细胞试验在mRNA及蛋白水平上观察内脂素对巨噬细胞中ADAMTS-4表达的作用。结果:冠状动脉罪犯病变局部内脂素及ADAMTS-4水平高于外周动脉(内脂素:15.13±6.30ng/ml vs.9.20±4.13ng/ml,P<0.001;ADAMTS-4:101.27±9.56ng/ml vs 74.36±12.43ng/ml,P<0.001),同时,冠状动脉罪犯病变局部内脂素及ADAMTS-4的表达水平成正相关(R2=0.86,P<0.001)。体外实验证实,内脂素呈时间和浓度依赖性地上调ADAMTS-4mRNA及蛋白水平的表达。结论:内脂素通过促进AS斑块内巨噬细胞ADAMTS-4的表达从而导致斑块易损性的增加。

附子汤对三种骨关节炎大鼠IL-1β、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5表达的实验研究

目的:分析附子汤对寒湿痹阻、机械损伤和化学损伤三种不同病因病机骨关节炎(OA)模型的药效作用,并阐明其作用机理。方法:选取SPF级健康SD大鼠42只,随机分成7组:正常组、寒湿痹阻OA组、寒湿痹阻附子汤组、机械损伤OA组、机械损伤附子汤组、化学损伤OA组、化学损伤附子汤组,每组6只。干预组灌胃给予附子汤,正常组及模型组灌胃给予等量生理盐水,每天1次,共持续12周。每2周记录一次大鼠体重;HE染色,观察膝关节软骨病理变化;ELISA法检测12周各组大鼠血清及关节液白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(ADAMTS 4)、ADAMTS5水平;qRTPCR法检测软骨和滑膜组织IL-1β、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5水平。结果:各模型组大鼠体质量显著降低;与各模型组相比,各对应给药组大鼠体质量无统计学差异(P>0.05)。与各模型组相比,附子汤干预组能显著降低三种OA模型大鼠血清、关节液、软骨和滑膜组织IL-1β、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5水平(P<0.01或P<0.05);寒湿痹阻附子汤组效果更为显著。结论:附子汤通过降低OA模型大鼠血清、关节液、软骨和滑膜组织IL-1β、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5水平表达,抑制炎症反应,减轻软骨细胞和细胞基质的损害,达到促进软骨修复的作用。附子汤对症干预寒湿痹阻型骨关节炎效果更佳。

血清ANXA2、ADAMTS4水平与短暂性脑缺血发作患者颈动脉斑块性质的关系

目的探讨血清膜联蛋白A2(ANXA2)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(ADAMTS4)水平与短暂性脑缺血发作(TIA)患者颈动脉斑块性质的关系。方法选择TIA患者156例(观察组)、同期体检健康的志愿者78例(对照组),采集所有研究对象外周静脉血,离心留取血清,采用ELISA法检测血清ANXA2、ADAMTS4。TIA患者入院后接受颈动脉血管超声检查,由两名经验丰富的影像科医师评估颈动脉斑块形成及稳定性。采用多因素Logistic回归模型分析TIA患者颈动脉斑块不稳定的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ANXA2、ADAMTS4水平对TIA患者颈动脉斑块不稳定的预测价值。结果观察组血清ANXA2、ADAMTS4水平均高于对照组(t分别为16.636、25.358,P均<0.05)。颈动脉血管超声检查发现,TIA患者颈动脉斑块不稳定者76例、颈动脉斑块稳定或无颈动脉斑块者80例,颈动脉斑块不稳定的发生率为48.72%(76/156)。单因素分析发现,TIA患者颈动脉斑块不稳定与年龄、吸烟、饮酒、合并高血压、卒中风险及血清ANXA2、ADAMTS4水平有关(P均<0.05);多因素Logistic回归分析显示,吸烟、饮酒、卒中风险增加以及血清ANXA2、ADAMTS4水平升高为TIA患者颈动脉斑块不稳定的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清ANXA2、ADAMTS4水平单独和联合预测TIA患者颈动脉斑块不稳定的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.780、0.874,血清ANXA2、ADAMTS4水平联合预测TIA患者颈动脉斑块不稳定的AUC大于二者单独(Z分别为3.151、3.326,P均<0.05)。结论血清ANXA2、ADAMTS4水平升高是导致TIA患者颈动脉斑块不稳定的独立危险因素;血清ANXA2、ADAMTS4水平对TIA患者颈动脉斑块不稳定均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

血清sOX40L和ADAMTS-4联合检测对老年急性脑梗死患者的预后价值

目的分析老年急性脑梗死患者血清可溶性OX40配体(sOX40L)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-4(ADAMTS-4)联合检测对患者预后的预测价值。方法选取2019年7月-2023年8月就诊于河北省保定市第一中心医院的老年急性脑梗死患者作为脑梗组(n=121),并根据预后mRS评分分为预后良好组(n=78)和预后不良组(n=43),根据不同脑损伤程度分为轻度(n=31)、中度(n=57)和重度损伤组(n=33),另选取体检健康者作为健康组(n=68)。用酶联免疫吸附法检测血清sOX40L、ADAMTS-4水平并进行比较;收集患者临床资料并分析;用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清sOX40L、ADAMTS-4水平对老年急性脑梗死患者预后的预测价值;logistic回归分析影响老年急性脑梗死患者预后的因素。结果脑梗组血清sOX40L、ADAMTS-4水平高于健康组,差异均有统计学意义(t=13.946、14.297,P均<0.05);且血清sOX40L、ADAMTS-4水平随着脑损伤程度的加重而升高,差异均有统计学意义(F=31.900、22.080,P均<0.05)。预后不良组血清sOX40L、ADAMTS-4水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(t=10.240、9.433,P均<0.05),两组患者的脑梗死部位、入院时NIHSS评分、Hcy水平差异均有统计学意义(t=5.178、8.818、6.121,P均<0.05)。后循环脑梗死、NIHSS高评分、Hcy、sOX40L、ADAMTS-4水平升高均是老年急性脑梗死患者预后不良的危险因素(P均<0.05)。sOX40L、ADAMTS-4、两者联合预测老年急性脑梗死患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.872、0.879、0.952,联合预测价值更高(Z_(联合vs.sOX40L)=2.794,P=0.005;Z_(联合vs.ADAMTS-4)=2.340,P=0.019)。结论老年急性脑梗死患者血清sOX40L、ADAMTS-4水平显著升高,两者水平变化可能成为预测急性脑梗死预后的指标,且两者联合预测价值更高。