血小板型磷酸果糖激酶在恶性肿瘤中的研究进展

在恶性肿瘤中,有氧糖酵解一直是研究的热点,在氧气充足的条件下,肿瘤细胞会通过糖酵解途径代谢葡萄糖。磷酸果糖激酶-1(PFK-1)是糖酵解过程中的一种限速酶,可以调节细胞中葡萄糖的氧化。PFK-1包括3种亚型,其中血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)在肿瘤中的表达水平高于其他两种亚型,它是细胞代谢的重要介质。本文对PFKP在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

血小板型磷酸果糖激酶介导的代谢重编程机制及其在疾病中的作用研究进展

血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)是细胞能量代谢糖酵解途径中重要的限速酶,在细胞内的表达保持动态平衡且相对稳定,发挥着调控细胞生物合成和能量代谢的作用,是代谢类疾病和癌症领域的研究热点。当细胞所处微环境发生变化时,如氧供应不足、代谢底物匮乏或细胞癌变时,细胞内出现PFKP介导的通过改变自身代谢模式而形成的代谢重编程,从而改善环境变化引起的不利影响;另一方面,PFKP在调控以Warburg效应为主的代谢模式中发挥重要作用,使代谢模式向糖酵解转移,形成有氧糖酵解方式。本文主要围绕PFKP介导的代谢重编程作用机制及其参与肿瘤、呼吸系统等疾病的病理生理机制和靶向治疗研究进展进行综述。

改良型富血小板纤维蛋白与β⁃磷酸三钙复合物诱导成骨作用与机制

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(advanced platelet⁃rich fibrin,A⁃PRF)与β⁃磷酸三钙(β⁃tricalcium phosphate,β⁃TCP)构成比例对兔股骨缺损模型骨形成的作用及机制,为临床治疗骨缺损提供新思路。方法24只新西兰大白兔构建骨缺损模型并分为模型组、1∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=1∶1)、2∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1)与4∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=4∶1),每组6只。复合物组在骨缺损处填充复合材料,模型组不充填材料,8周后安乐法处死动物采标本。采用micro⁃CT测定股骨缺损区新生骨的骨密度(bone mineral densi⁃ty,BMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation/spacing,Tb.Sp)。HE染色观察新骨及新生血管形成情况;扫描电镜观察新生骨组织的形态变化;酶联免疫法检测新生股骨组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(phospho⁃p38 mitogen activated pro⁃tein kinase,p⁃p38MAPK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer⁃binding protein homologous pro⁃tein,CHOP)、磷酸化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(phospho⁃cysteine aspartic protease⁃3,p⁃Caspase3)含量;实时定量PCR检测新生骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨形态发生蛋白⁃2(bone morphogenetic protein⁃2,BMP⁃2)、核因子κ⁃B配体受体致活剂(receptor activator of nuclear factor kappa⁃B ligand,RANKL)、p38MAPK的mRNA表达量;免疫组织化学法观察新生骨组织中OPG、BMP⁃2、RANKL、p⁃p38MAPK、p⁃Caspase3蛋白表达情况;荧光Tunel染色观察新生股骨组织中细胞凋亡情况。结果模型组股骨缺损区域骨形成缓慢,成骨质量差。与模型组相比,复合物组动物股骨缺损区域成骨情况良好,BMD、BV.TV、Tb.Th、Tb.N升高,Tb.Sp下降,新生股骨组织中见新生毛细血管形成;p⁃p38MAPK、CHOP、p⁃Caspase3蛋白表达降低,OPG、BMP⁃2的mRNA与蛋白表达升高,RANKL与p38MAPK的mRNA表达降低(P<0.05);各组新生骨组织中的凋亡检测表明2:1复合物组样本中细胞凋亡率最低(P<0.05);A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1的配比成骨效果最佳。结论由A⁃PRF与β⁃TCP组成复合物能促进OPG表达,抑制RANKL表达和p38MAPK磷酸化,减少新生骨组织细胞凋亡,促进成骨分化。

磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3在增生型糖尿病性视网膜病变患者玻璃体和血清中的表达及其相关性分析

目的定量检测增生型糖尿病性视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)患者玻璃体和血清中磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phospofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3,PFKFB3)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平,探讨PFKFB3在PDR患者中可能的作用机制。方法纳入确诊为PDR拟行单眼玻璃体切割术的患者42例(42眼)作为试验组,并根据术前是否行玻璃体内注射抗VEGF药物进一步将试验组分为非注药组和注药组,纳入同期诊断为全层黄斑裂孔(full thickness macular hole,FTMH)及黄斑前膜(preretinal membrane of the macula,PRMM)的20例(20眼)患者作为对照组。收集各组患者的玻璃体和血清标本,定量检测各组标本中的PFKFB3和VEGF表达水平,并进行统计学分析。结果试验组患者玻璃体中PFKFB3水平为(463. 17±381. 28) ng·L^-1,明显高于对照组[(158. 43±86. 88)ng·L^-1](t=4. 919,P <0. 001),试验组血清中PFKFB3水平为(153. 45±83. 78) ng·L^-1,明显高于对照组[(92. 72±32. 42)ng·L^-1](t=4. 098,P <0. 001)。非注药组患者玻璃体中PFKFB3水平为(797. 29±387. 44) ng·L^-1,明显高于注药组[(257. 56±181. 49) ng·L^-1](t=5. 230,P <0. 001),而非注药组血清中PFKFB3水平与注药组差异无统计学意义(t=0. 679,P=0. 501)。非注药、注药组和对照组患者玻璃体与血清中的PFKFB3水平无相关性(非注药组:r=0. 194,P=0. 471;注药组:r=0. 071,P=0. 731;对照组:r=0. 254,P=0. 279)。试验组患者玻璃体中VEGF水平为(1713. 50±1386. 90) ng·L^-1,明显高于对照组[(205. 52±92. 93) ng·L^-1](t=7. 014,P <0. 001);试验组血清中VEGF水平为(224. 98±168. 08) ng·L^-1,明显高于对照组[(86. 80±36. 51) ng·L^-1](t=5. 082,P <0. 001)。非注药组患者玻璃体中VEGF水平为(3399. 72±510. 06) ng·L^-1,明显高于注药组[(675. 82±242. 57) ng·L^-1](t=20. 014,P <0. 001),非注药组血清中VEGF水平为(373. 40±174. 23) ng·L^-1,明显高于注药组[(133. 65±73. 10) ng·L^-1](t=5. 228,P <0. 001)。非注药、注药组和对照组患者玻璃体与血清中的VEGF水平均存在正相关关系(非注药组:r=0. 952,P <0. 001;注药组:r=0. 423,P=0. 031;对照组:r=0. 776,P <0. 001)。非注药组、注药组和对照组患者玻璃体中PFKFB3与VEGF水平均存在正相关关系(非注药组:r=0. 865,P <0. 001;注药组:r=0. 587,P=0. 002;对照组:r=0. 807,P <0. 001),而在血清中仅注药组的PFKFB3与VEGF水平存在正相关关系(r=0. 444,P=0. 023)。结论PFKFB3可能参与了PDR的发生发展过程;VEGF可能通过上调PFKFB3的表达而参与PDR的发生发展。

1,6-二磷酸果糖与维生素C联用治疗重度有机磷中毒并心肌损害

目的探讨1,6-二磷酸果糖联合维生素C治疗急性重度有机磷中毒并心肌损害的效果。方法将40例急性重度有机磷中毒并心肌损害的患儿分为治疗组25例和对照组15例。均予常规治疗,治疗组则在常规治疗的基础上加用1,6-二磷酸果糖及维生素C治疗,疗程均为14d。分别检测并比较二组治疗前及疗程结束时心肌肌钙蛋白I(cTnI)和血清肌酸激酶心型同工酶(CK-MB)。结果治疗及对照组治疗前血清cTnI和CK-MB水平差异无统计学意义;疗程结束时,与对照组及治疗前比较,治疗组血清cTnI和CK-MB水平均显著降低,差异有统计学意义(Pa<0.05)。结论1,6-二磷酸果糖联合维生素C可改善急性重度有机磷中毒患儿的心肌损害。

1,6-二磷酸果糖联用维生素C佐治一氧化碳中毒并发心肌损害的临床研究

目的探讨在常规治疗的基础上加用1,6-二磷酸果糖及维生素C治疗急性一氧化碳中毒并发心肌损害的有效性。方法将40例急性一氧化碳中毒合并心肌损害的患儿分为治疗组(25例)和对照组(15例),均予以常规治疗(高压氧及对症治疗),治疗组加用1,6-二磷酸果糖及维生素C,疗程均为14 d,比较两组治疗前后血清心肌肌钙蛋白I(cTn-I)和肌酸激酶心型同工酶(CKMB)水平。结果两组治疗前血清cTn-I和CKMB水平比较差异无统计学意义;疗程结束时,治疗组血清cTn-I和CKMB水平与对照组及治疗前比较,均显著降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论1,6二磷酸果糖联用维生素C可改善急性一氧化碳中毒患儿的心肌损害。

缺氧诱导因子1α/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3信号通路对糖酵解诱导胰岛β细胞去分化作用的研究进展

胰岛β细胞去分化是导致T2DM患者Ins分泌缺陷或IR的重要原因。缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)信号通路是与T2DM相关的生物途径,参与高糖环境下无氧糖酵解诱导胰岛β细胞去分化。本文综述HIF-1α/PFKFB3信号通路对糖酵解诱导胰岛β细胞去分化作用的研究进展。

1,6-二磷酸果糖治疗新生儿缺血缺氧性心肌损害的临床效果分析

研究1,6-二磷酸果糖治疗新生儿缺血缺氧性心肌损害的临床效果。方法:选取本院2017年4月至2019年4月新生儿缺血缺氧心肌损害250例,按照护理方法不同分为两个组别,每组各125例,1组为对照组,使用常规治疗;2组为实验组,使用1,6-二磷酸果糖治疗,比较两组治疗总有效率、不良反应发生率、症状消失时间、住院时间及血清心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)。结果:对照组125例患者中有83例患者症状明显好转(总有效率为66.40%),30例出现不良反应;观察组125例患者有105例患者症状明显好转(总有效率为84.00%),6例出现不良反应,观察组效果和安全性更优,P<0.05;观察组症状消失时间、住院时间显著低于对照组,差异分明,P<0.05;在实施治疗前,两组血清心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)无统计学意义,P>0.05;在治疗后,观察组血清心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)显著优于对照组,差别显著,P<0.05。结论:对新生儿缺血缺氧性心肌损害患儿采用1,6-二磷酸果糖实施治疗,可有效提升治疗效果,降低并发症发生率,在临床上显示卓越成效,值得进一步推广使用。

扩增人肝型磷酸果糖激酶基因对唐氏综合征进行定量基因诊断的研究

目的 扩增位于唐氏综合征关键区域的人肝型磷酸果糖激酶基因 (PFKL基因 ) ,对唐氏综合征进行定量基因诊断。方法 采用定量PCR—微孔板杂交检测PCR产物量的方法 ,对 2 6例唐氏综合征患者及 2 78例正常人外周血DNA标本 ,扩增PFKL基因 ,扩增片段长度为 185bp ;另外 ,将人肌型磷酸果糖激酶基因 (PFKM基因 )作为内参照同时扩增 ,扩增片段长度为 36 5bp ,定量PCR产物用微孔板杂交检测。 结果 2 6例患者 (包括 1例易位型 )PFKM与PFKL扩增产物的OD值比值介于 0 4 0～ 0 6 0之间 ,平均值为 0 5 1;正常人扩增产物的OD值比值介于 0 80～ 1 2 0之间 ,平均值为 1 12 ,两者比较差异显著 (P <0 0 0 1)。对 2 78例正常人进行同样基因扩增和检测无一例假阳性 ,所得结果与染色体核型分析结果完全符合。结论 定量PCR—微孔板杂交检测PFKL基因拷贝数的方法 ,简便、快速、特异 。

PFKL在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对预后的影响

目的探究肝型磷酸果糖激酶(PFKL)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况及其对患者临床预后的影响。方法从癌症基因组图谱(TCGA)中下载OSCC患者的转录组数据和临床数据,使用R软件对癌组织和正常组织的基因表达差异进行统计分析。通过Lasso和多因素回归分析筛选出5个与PFKL共表达的预后相关基因,并以此构建预后模型。对模型中高、低风险组的差异表达基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果TCGA数据分析结果显示,PFKL在OSCC肿瘤组织中显著上调且与患者的不良预后相关;由PFKL相关基因构建的预后模型对OSCC患者的生存期有着良好的预测效果;KEGG富集结果显示在高风险组显著富集的通路集中在细胞增殖和促癌相关基因集。结论PFKL在OSCC患者肿瘤组织中高表达,其表达水平与临床分期、N分级和G分级有关,并且是OSCC预后不良的独立危险因子,可能通过多种信号途径促进OSCC的发生发展。

PDGF-BB活化PSCs的分子机制研究

血小板生长因子(PDGF)是诱导胰星状细胞(PSCs)活化的重要细胞因子,其分子机制尚不清楚。用PDGF-BB诱导体外培养的PSCs,旨在探讨PDGF信号转导通路在胰纤维化形成的分子发生机制中的可能作用。PSCs与不同剂量PDGF-BB(10ng/mL,25ng/mL和50ng/mL)共培养,24h后收集细胞,采用Westernblotting检测PSC中磷酸化细胞外信号调节激酶-1(pERK1)蛋白水平和RT-PCR检测Colα1(I)mRNA的表达。结果表明,不同剂量PDGF-BB作用于PSCs后,各组pERK1蛋白表达比空白对照组有不同程度上调;Colα1(I)mRNA在PSCs中表达也明显上调,且在一定范围内与PDGF-BB剂量呈正相关。

定量PCR诊断Down's综合征方法比较

目的 比较两种染料进行定量PCR检测Down’s综合征时的特点。 方法 采用PCR方法同时扩增人肝型磷酸果糖激酶基因(PEKL-CH21)和人肌型磷酸果糖激酶基因(PEKM-CHI),分别用SYBRGreen Ⅰ和银染两种染料处理扩增产物,琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳-银染后在凝胶成像系统进行分析,得出扩增产物的荧光强度对比值。以吸光度理论比值为标准,分别比较两种荧光染料的敏感性、特异性。结果 SYBR Green Ⅰ和银染两种染料进行定量PCR诊断26例Down s综合征患者和20例正常人其敏感性、特异性均为100％,两种染料检测结果无差别。结论 SYBR Green Ⅰ是一种敏感、特异、实用、低毒的荧光染料。

cGMP及其介导的信号通路在血小板聚集中的作用的研究进展

血栓是缺血性心脑血管疾病的主要杀手,血小板聚集在血栓形成过程中发挥着重要的作用。抗血小板聚集在血栓性疾病的治疗中无可替代。cGMP对血小板功能的调节起到非常重要的作用,且主要通过eNOS-NO-cGMP-PKG通路进行调节。本综述主要阐明cGMP在血小板聚集中的作用和机制。

1，6-二磷酸果糖联用维生素C佐治传染性单核细胞增多症并发心肌损害的临床研究

目的探讨在常规治疗的基础上加用1，6-二磷酸果糖及维生素C治疗传染性单核细胞增多症并发心肌损害的有效性。方法将220例传染性单核细胞增多症并发心肌损害的患儿分为治疗组和对照组各110例，均予以常规治疗（更昔洛韦及对症治疗），治疗组加用1，6-二磷酸果糖及维生素C，疗程均为7d，比较两组治疗前后血清心肌肌钙蛋白I（cTn—I）和肌酸激酶心型同工酶（CKMB）水平。结果两组治疗前血清cTn—I和CKMB水平比较差异无统计学意义；疗程结束时，治疗组血清cTn—I和CKMB水平与对照组及治疗前比较，均显著降低，差异有统计学意义（P均〈n05）。结论1，6-二磷酸果糖联用维生素C可促进传染性单核细胞增多症患儿心肌损害的痊愈。

同源基因定量PCR方法快速产前诊断Down综合征

目的 探讨同源基因定量PCR方法在预防Down综合征患儿出生及无创性产前诊断中的应用价值。方法 对178名正常对照和38例Down综合征患者同时扩增位于2 1号染色体Down综合征致病关键区域的人肝型磷酸果糖激酶基因(PFKL- CH2 1)和位于1号染色体的人肌型磷酸果糖激酶基因(PFKM- CH1) ,计算机软件(Fluor Chem V2 .0 Stand- Alone)分析PFKM- CH1及PFKL- CH2 1产物的相对比。结果 正常人比值为1.4 0±0 .36 7,Down综合征患者比值为0 .4 6±0 .2 1,经t检验差异有统计学意义。结论 这种定量PCR方法不但能检测2 1三体型,也可检测易位型Down综合征。

清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶HK2,PFK2,PKM2的影响

目的:观察清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2),6-磷酸果糖激酶2(phosphofructokinase,PFK2),M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase isoform M2,PKM2)的表达及葡萄糖含量的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为模型组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。所有小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组剂量分别为11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积生理盐水灌胃给药,接种后继续给药2周,处死小鼠取瘤组织;氧化酶法检测葡萄糖含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HK2 mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测PFK2蛋白表达;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)检测PKM2活性。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞HK2 mRNA表达及PKM2活性显著降低,葡萄糖含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组肺癌细胞PFK2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清燥救肺汤可有效抑制荷Lewis肺癌细胞增殖,降低肺癌细胞葡萄糖摄取速率,糖酵解关键限速酶HK2,PFK2,PKM2可能是其药效作用靶点。