血小板输注无效患者中人类白细胞抗原抗体和人类血小板抗原抗体分布情况及其基因频率分析

目的分析血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)患者中人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)抗体和人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)抗体的分布情况以及PTR患者的HPA基因频率。方法选取2020年1—12月北京市红十字血液中心86例因PTR进行血小板抗体检测的血液系统疾病患者,包括急性髓细胞性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)、慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)、慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphoblastic leukemia,CLL)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)、再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)、特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP),采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析其血清中HLA抗体和HPA抗体,采用序列特异引物引导的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对患者进行HPA-1~6、9及l5系统的基因分型。结果86例患者中有33例的血清显示血小板相关抗体阳性,阳性率为38.4%,其中24例(27.9%)只表达HLA抗体,6例(7.0%)只表达HPA抗体,3例(3.5%)共同表达HLA抗体和HPA抗体。不同疾病之间血小板抗体的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HPA基因分型结果显示,HPA-3和HPA-15具有较高的多态性,HPA-3系统中a的基因频率高达61.5%,b为38.5%;HPA-15中a的基因频率为54.2%,b为45.8%。结论HLA和(或)HPA抗体的产生是导致PTR的重要因素,其中HLA抗体占主要地位,这些患者的HPA基因多态性分布特征与中国北方汉族人群的HPA分布特征一致,确定PTR患者的抗体特异性及HPA基因分布特征将为血小板库的建立提供数据支持。

血小板人白细胞抗原和/或人血小板抗原基因配型预防血小板输注无效的Meta分析

血小板输注是治疗因血小板减少或功能障碍疾病所致出血的重要手段，但多次输注血小板后出现血小板输注无效（platelet transfusion refractoriness，PTR）的情况日益突出。研究显示，血液病及肿瘤患者PTR发生率达7％-34％^[1-3]，血小板减少患者多次输血后门R发生率为30％-70％^[4]。阳R不仅延误病情，加重患者负担，也造成了血小板资源的浪费。

山东汉族人群血小板抗原基因多态性分析

目的:探讨山东汉族人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)1-17、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)A、B多态性分布。方法:对山东地区962位无血缘关系的汉族血小板自愿捐献者采用PCR-SSP方法进行HPA1-17系统的基因分型,采用PCR-SSOP技术对HLA-A、B位点进行基因分型,直接计数法计算基因频率,HPA1-17及HLA基因型组合用Arelequin 3.5进行分析。结果:HPA各等位基因频率分别是1a:0.9918,1b:0.0082,2a:0.9419,2b:0.0592,3a:0.5841,3b:0.4174,4a:0.9969,4b:0.0031,5a:0.9892,5b:0.0108,6a:0.9835,6b:0.0175,7-14a:1,7-14b:0,15a:0.5488,15b:0.4512,16a:1,16b:0,17a,17b:0;频率最高的HPA基因组合型为:HPA-(1,2,4,5,6,7-14,16,17)aa-3ab15ab(0.2048);HLA-A、B位点中频率最高的基因分别为A*2(0.3094)、B*13(0.1513),频率最高的HLA基因组合型为:HLA-A*02~B*13(0.1397)。结论:山东汉族人群HPA和HLA分布具有明显多态性,与其他人群相比显示出地域和种族性差异,应建立本地区的血小板捐献者HPA和HLA分型资料库。

人类血小板抗原1—16基因与血小板输注无效风险研究

目的探讨HPA-1—16基因多态性分布与血小板输注无效相关性。方法应用PCR-SSP法对上海地区268名汉族人群行HPA-1—16基因检测;应用ELISA法对49名反复输血的恶性血液病患者行血小板抗-HLA-Ⅰ与抗-HPA筛查试验。结果上海地区汉族人群HPA-1—16系统中,HPA-1—6,15系统等位基因频率1a=0.9889,1b=0.0111,2a=0.8881,2b=0.1119,3a=0.5989,3b=0.4011,4a=0.9963,4b=0.0037,5a=0.9907,5b=0.0093,6a=0.9832,6b=0.0168,15a=0.6418,15b=0.3582,均呈多态性分布;其余HPA-7—14,16系统等位基因均呈单线性分布。HPA-1,2,4—6,15系统主要以aa纯合子基因型频率分别为0.9776,0.7799,0.9925,0.9813,0.9664,0.4328。在HPA-2、3、15系统中出现bb纯合子基因型,其频率均为0.0037,0.1530,0.1492外,其余系统均未出现bb纯合子基因型。另外,在HPA-1—6,15系统中出现ab杂合子基因型,其频率分别为0.0224,0.2164,0.4963,0.0075,0.0187,0.0336,0.4180,以HPA-3杂合度最高,其次次序为HPA-15、HPA-2。在随机输血中,HPA不合发生率以HPA-3为最高(0.3650),其次分别为HPA-15(0.3541)、HPA-2(0.1790)。49名反复输血的恶性血液病患者中,有61.22%(30名)输血后相继出现抗-HLA-Ⅰ,而始终未检出抗-HPA。结论上海地区汉族人群血小板输注无效的主要原因是抗-HLA-Ⅰ所致;只需检测供者与受(患)者的HPA-2、-3、-15基因相合,就可基本达到血小板匹配性输注。

深圳地区汉族人类血小板抗原1-6系统基因多态性分析

目的 研究人类血小板抗原基因多态性,为人类学研究及临床输血实践提供依据。方法 采用PCR-SSP方法对深圳地区222名汉族随机献血者HPA1-6系统进行基因分型研究,对其基因及基因型频率进行统计,并与HPA在不同人群中的分布进行对比分析。结果 在6个HPA系统中,HPA-3基因型的杂合程度最高,HPA-3a/3a、HPA-3a/3b、HPA-3b/3b的频率分别为0.265 8,0.518 0,0.216 2;其余5个HPA系统均以a/a纯合子为主,a基因的频率范围为0.997 7～0.955 0,且均未发现b/b纯合子。1b、4b的基因频率很低,分别为0.009 O和0.002 3。结论 深圳汉族人群HPA1-6系统的基因频率与中国台湾人及中国香港人均很相似(P>0.05)。HPA-1、HPA-5与美国黑人、白人及荷兰人差异显著(P<0.05);HPA-2、HPA-3与日本人、韩国人、美国黑人、白人差异显著(P<0.05);HPA-4与日本人差异显著(P<0.05)。在未来的临床实践中要警惕HPA-2,3,5,6系统同种抗体导致的同种免疫血小板减少综合征的可能。

浙江汉族人群血小板抗原1-16多态性调查

目的了解浙江汉族人群血小板抗原1-16多态性分布。方法采用PCR-SSP方法对120份浙江无血缘关系汉族样本作HPA-1—16等位基因分型。结果HPA-1b、-2b、-3b、-6bw、-15b的基因频率分别为0.0125、0.0542、0.3833、0.0125、0.4833,未检出HPA-4b、-5b、-7bw、-8bw、-9bw、-10bw、-11bw、-12bw、-13bw、-14bw、-16bw等位基因。浙江汉族人群HPA-3、15抗原系统血小板随机输注错配概率分别为0.36、0.37。结论浙江汉族人群HPA多态性分布与中国其他地区汉族人群比较没有差异,HPA-3和15系统多态性较丰富,因此在随机血小板输注或胎母之间比较容易发生同种免疫反应。

血小板抗原基因分型及配型的研究与初步应用

目的 对患者进行血小板抗原基因分型及配型的研究 ,以探讨临床血小板输注的安全、有效性。方法 应用聚合酶链 序列特异性引物技术 (PCR SSP) ,对南京地区 5 5例患者HPA1 5系统等位基因进行分型 ,并为其进行血小板基因配型输注。结果 经血小板基因配型的吻合组血小板输注效果明显优于未经配型的对照组。结论 对患者进行血小板抗原基因分型及配型可提高血小板输注的安全、有效性。

人类血小板抗原HPA-15系统PCR-SSP基因分型技术的建立

本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。采用第11届国际输血协会(ISBT)血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-15系统基因分型技术。该分型技术的准确性和可靠性,采用第11届ISBT血小板协作组提供的质控样本进行验证,同时采用本研究合成的引物及商品化试剂盒,对50名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,作为平行对照。应用本研究的方法,对第11届ISBT送检的10份考核样本进行基因分型。结果表明:基因分型结果与ISBT公布的结果完全一致。50名随机的血小板志愿捐献者,经本研究的方法及美国G&T公司的试剂检测,基因分型的结果相符合;观察到的基因频率:HPA-15a和-15b分别为0.5100和0.4900。结论:本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景。

用PCR-SSP方法对血小板抗原-1基因分型

人类血小板特异性抗原（ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉ－ｇｅｎ，ＨＰＡ）的分型对于诊断同种免疫血小板减少性紫癜、输血后紫癜以及血小板输注无效等具有重要意义［１］。已发现的ＨＰＡ至少有１６个，其中血小板特异性抗原系统－１（ＨＰＡ－１）的对偶抗原有ａ、...

广西地区壮族 瑶族人群人类血小板抗原基因的多态性分析

目的研究广西地区壮族、瑶族人群人类血小板抗原(HPA)1～17bw基因的表达差异。方法采用序列特异引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对广西地区100例壮族和100例瑶族健康个体进行HPA 1～17bw系统基因分型,比较壮族和瑶族的HPA基因频率。结果等位基因a是广西地区壮族、瑶族健康个体主要的HPA1～17bw基因型别。在H-W平衡检验中,瑶族健康人群HPA1～17bw基因多态性中除HPA1、2、6外,其他均符合H-W群体遗传平衡法则(P>0.05);壮族健康个体中,所有HPA各系统符合H-W群体遗传平衡法则(P>0.05)。瑶族和壮族HPA系统抗原不配合率分析中,HPA3和HPA15不配合率最高,皆超过30%。比较两个民族的基因频率,发现瑶族的HPA-3和HPA-15的基因多态性明显低于壮族(χ2=12.242,P=0.002;χ2=6.209,P=0.045)。结论广西地区壮族和瑶族HPA基因多态性分布存在明显的种族差异,特别是HPA-3和HPA-15系统杂合度最高,抗原分布不配合比例相对高,在临床配合性血小板输注中必须加以重视。

新疆柯尔克孜族人群血小板抗原1～6、15系统基因多态性分析

目的探讨新疆柯尔克孜族人群人类血小板抗原HPA1-6,15(Gov)系统多态性,分析HPA基因在柯尔克孜族人群中的遗传多态性。方法采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法105例无血缘关系的新疆柯尔克孜族血样进行HPA基因分型。结果新疆柯尔克孜族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、6a、15a基因频率分别是0.900 0、0.923 80、.576 2、1、0.952 4、10、.566 7;HPA-1b、2b、3b、4b、5b、6b、15b基因频率分别是0.100 00、.076 2、0.423 8、0、0.047 6、00、.433 3,新疆柯尔克孜族HPA基因频率与新疆汉族相比,HPA-1a、1b、2a、2b、15a、15b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05)。与新疆维吾尔族相比,HPA-15a、15b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论新疆柯尔克孜族人群中HPA-1、2、3、5、15系统均具有多态性,其中HPA-3,15系统具有高度多态性,这使免疫暴露的机会增加。

人类血小板抗原1～6系统同步基因分型的研究

为研究采用PCR SSP技术,建立可靠的人类血小板抗原HPA 1,2,3,4,5,6系统的同步基因分型方法,并以所建立的方法研究血小板抗原。设计合成18条序列特异性引物,探索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+离子浓度,使HPA 1～6系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳。引物的特异性和灵敏度采用基因型已知的质控DNA进行验证。应用此方法,对2000年度国际输血协会(ISBT)第十届血小板基因定型与血清学工作组送检的15份考核样本(其中血样2份,DNA样本13份)进行了基因分型。用此方法检测质控DNA,结果与已知的HPA基因型完全相符;15份第十届血小板基因定型与血清学工作组的考核样本的检测结果,与ISBT公布的结果完全相同,准确率达100%。

河南汉族人群血小板抗原HPA1-16bw基因多态性研究

目的研究河南地区汉族人群血小板抗原基因分布频率,建立地区性血小板抗原基因库,为血小板配合输注提供实验依据。方法用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对160例无血缘关系的河南汉族体检健康者进行HPA1-16bw系统基因分型。结果 HPA1-6和HPA-15基因频率分别为1a 0.987 5,1b 0.012 5;2a 0.946 9,2b 0.053 1;3a 0.590 6,3b0.409 4;4a 0.996 9,4b 0.003 1;5a 0.990 6,5b 0.009 4;6a 0.981 2,6b 0.018 8;15a 0.540 6,15b 0.459 4。HPA7-14bw,16bw仅检测到a/a等位基因,基因频率均为1.000 0。经χ2检验各系统HPA符合Hardy-Weinberg平衡法则。HPA基因分布存在种族和地区差异。结论河南汉族人HPA-15和HPA-3基因型杂合率最高。HPA基因分型有助于输注血小板时降低免疫性血小板减少症的发生概率。

人类血小板抗原1～6和Gov系统的PCR-SSP同步基因分型

目的：采用序列特异性引物PCR（PCR—SSP）对人类血小板抗原（HPA）1-6、Gov系统进行同步基因分型，以确定中国大陆汉族人群中的HPA等位基因频率。方法：随机采集100名中国大陆汉族无偿献血者外周血标本，采用酚／氯仿方法提取基因组DNA。设计合成21条序列特异性引物，在相同的PCR循环条件下对HPA-1-6和Gov进行PCR-SSP同步基因分型。结果：100名随机供血者中观察到的基因频率分别是HPA-1a和1b为1．000和0．000，HPA-2a和26为0．995和0．005，HPA-3a和36为0．655和0．345，HPA-4a和46为1．000和0．000，HPA-5a和56为0．990和0．010，HPA-6a和66为0．980和0．020，Gov^a和Gov^b为0．515和0．485。中国人HPA—1．6、Gov的基因频率与亚洲其他人群相一致，HPA-3a／3b和Gov^a／Gov^b基因频率在包括高加索人在内的不同人群中基本相等。结论：中国大陆汉族人群中Gov和HPA-3等位基因分布有其自身特点。

重组表达糖蛋白GPIIIa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体

目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。

北方汉族人群血小板抗原1～6、15系统基因多态性分析

目的 了解中国北方汉族人群HPA-1～6、15系统的基因多态性及分布差异。方法 采用Luminex结合序列特异性寡核苷酸探针（FLOW-SSO）方法对904名籍贯为北方汉族的深圳巿机采血小板无偿捐献者做HPA-1～6、15系统基因分型。采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法对有疑问的标本及罕见抗原（如HPA-1b/1b、2b/2b、4a/4b等）做进一步确认。结果 本组北方汉族人群来自河南、陕西、山东、黑龙江、吉林5个省,以HPA-3、15基因型的杂合度最高,杂合度约在50%左右,HPA-1、2、4、5、6以a/a纯合子为主（88%以上）,将北方这5个地区汉族人群的HPA基因频率和基因型频率两两比较,在HPA-2、5、6、15系统中存在显著性差异。吉林、陕西和山东汉族人群HPA-2a/2b基因型频率为0.027 8、0.115 9、0.110 3,同时HPA-2b基因频率为0.013 9、0.058 0、0.055 1;吉林和黑龙江汉族人群HPA-5a/5b基因型频率为0.0741、0.007 5,同时HPA-5b基因频率为0.037 0、0.003 8;山东、陕西和吉林汉族人群HPA-6a/6b基因型频率为0、0.029 0、0.037 0,同时HPA-6b基因频率为0、0.014 5,0.018 5;黑龙江、河南和吉林汉族人群HPA-15b/15b基因型频率为0.270 7、0.188 6、0.185 2,同时HPA-15b基因频率为0.530 1、0.4478、0.425 9（均为P〈0.05）,符合Hardy-Weinbery遗传定律。结论 中国北方汉族人群中HPA-1～6、15分布不论基因频率还是基因型频率都存在明显的地域性,地域性较南方汉族人群更为明显。