富血小板血浆的抑菌作用及其与抗菌肽含量的关系

目的:探讨贫血小板血浆(PPP)、富血小板血浆(PRP)及血小板凝胶上清液(PGS)对大肠埃希菌的体外抑菌作用及其与抗菌肽血小板因子4(PF4)含量的关系。方法:从本市中心血站获取健康献血者的单采血小板作为PRP来源,采用平板培养细菌法观察PPP、PRP及PGS与大肠埃希菌共培养不同时间细菌生长情况,ELISA检测PPP、PRP及PGS中PF4的含量。结果:(1)PPP、PRP及PGS均可以抑制大肠埃希菌的生长。PPP、PRP在18 h内具有很强的抑菌作用,随后抑菌作用逐渐减弱,24 h后逐渐失去抑菌作用;PGS在9 h内具有抑菌作用,3 h时抑菌作用最佳,随后抑菌作用逐渐减弱,12 h时无抑菌作用。(2)凝胶缓释液也具有抑菌作用,抑菌时效同PGS。(3)PPP、PRP和PGS中PF4质量浓度分别为(300.65±75.46)、(23206.74±9753.90)、(5659.23±2847.99)ng·ml^(-1),差异有统计学意义。(4)PRP 24 h抑菌作用强弱与PF4含量无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PPP、PRP及PGS对大肠埃希菌均有抑菌作用,但有时效性,PPP与PRP抑菌效果一致,均优于PGS。同体积PRP中PF4含量高于PGS,PPP中PF4含量最低,但PRP在24 h的抑菌作用强弱与PF4含量无关。

血小板致金黄色葡萄球菌发生自溶的机制探讨

目的探索血小板抗金黄色葡萄球菌(SA)的效能并尝试阐明其抗菌作用机制。方法实验分为SA组和血小板处理组,采用紫外分光光度计测定3次SA组和血小板处理组共6份菌液OD600值及6份菌液涂板菌落计数评价血小板的抗SA效能;分别采用His Sq2000测序仪和Q-Exactive质谱仪做基因转录组学和蛋白质谱分析检测血小板处理金黄色葡萄球菌后在基因转录水平和蛋白水平细菌自溶能力的变化,并通过做qRT-PCR和Trition X-100诱导下细菌自溶能力检测进一步验证。结果菌液OD600值测定试验显示:终浓度(×109/L)为100、150、200的血小板处理SA 10 h后菌液OD600值分别为0.314、0.152、0.234,而对照组为1.223(P<0.01),其中血小板浓度为150×109/L时处理SA后OD600值下降幅度明显大于其他血小板浓度处理组(P<0.01);与对照组SA相比,血小板(150×109/L)处理SA后,在转录水平上调控细菌自溶活性的双组分系统基因lyt S、lytR及其下游基因lrg A、lrg B变化倍数分别为0.165、0.086、0.045、0.107,下调明显(P<0.01),自溶酶基因atl A为3.596,上调明显(P<0.01),在蛋白水平上,蛋白质谱分析SA水解酶和自溶酶相对定量:血小板处理组和对照组分别为1.307 vs 0.633、1.326 vs 0.834(P<0.01);血小板(150×109/L)处理SA后与对照组在Triton X-100的诱导下细菌的浊度(OD600)比较:0.5、1.5、2.5h分别为0.052 vs 0.112、0.046 vs 0.089、0.048 vs 0.061(P<0.01)。结论血小板通过作用于金黄色葡萄球菌双组份系统自溶调节基因致细菌发生自溶来发挥抗菌作用;本研究发现所发现的血小板对于金黄色葡萄球菌新的抑菌靶点和途径,或为临床综合治疗细菌性感染提供新的策略和思路。