《法国遗传性血小板疾病中心血小板无力症患者急诊管理共识建议》解读

《法国遗传性血小板疾病中心血小板无力症患者急诊管理共识建议》是法国遗传性血小板疾病中心、法国急诊医学会、患者协会代表和Orphanet专家小组合作编写,由法国急诊医学会2023年06月发表于《Orphanet罕见病杂志》。该共识对血小板无力症(GT)患者可能出现的紧急情况、转运、麻醉相关风险和预防措施、联合用药及疫苗接种、器官和组织捐献等方面提出急诊管理意见。现针对该共识核心要点进行解读,旨在方便临床医务人员了解GT的急诊管理,也希望能为我国制定GT诊疗共识提供参考。

流式细胞术在检测血小板无力症中的意义

血小板上含有丰富的GPⅡ-Ⅲa,在血小板聚集时,GPⅡb-Ⅲa复合物上的纤维蛋白原受体与纤维蛋白原结合。血小板无力症(Glanzmann’s thrombasthenia,GT)患者是GPⅡb-Ⅲa复合物的质或量的缺陷所致血小板聚集异常。通常用聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western印迹等方法检测膜糖蛋白,但操作烦琐、费时费试剂。流式细胞术(FCM)及特异性单机的应用使血小板膜GP检测有了新突破,特别是纤维蛋白原结合试验使变异型GT的诊断成为可能。我们用FCM检测12例GT患者及其家属的血小板膜GP及纤维蛋白原结合并与SDS-PAGE和Western印迹做比较,以探索FCM方法对GT诊断的价值和意义。

25例血小板无力症基础和临床分析

目的：探讨中国人血小板无力症患者的临床和病理特点。方法：分析了２５ 例血小板无力症的临床表现、代偿机制、实验室检查、分子基础、治疗和预防措施。结果：２５ 例血小板无力症患者Ⅰ型２０ 例，Ⅱ型２ 例，变异型３ 例，已鉴定出血小板膜糖蛋白ＧＰⅡｂ，Ⅲａ 基因６ 种类型分子缺陷，包括错义突变、无义突变、剪接点突变和小片段ＤＮＡ丢失。结论：出血症状严重程度和分子缺陷之间无明显关系。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa测定在诊断血小板无力症中的应用

目的:探讨流式细胞术测定血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(CD41/CD61)及其在血小板无力症(GT)诊断中的初步应用。方法:以流式细胞术结合免疫荧光标记法检测血小板CD41和CD61的阳性百分率,观察30例正常人、1例血小板无力症疑似患者及其父母的血浆CD41和CD61的阳性表达率。结果:正常人血浆阳性表达率CD41和CD61的均值分别为93·10%和93·87%;患者、患者父亲和母亲CD41、CD61阳性表达率分别为0·02%、0·06%;97·4%、96·6%和98·1%、96·8%。结论:用流式细胞仪测定CD41和CD61的阳性表达率是检测GPⅡb/Ⅲa的可靠方法,可用于临床血小板无力症的诊断。

αⅡbA477P(A446P)——发生于血小板无力症患者的新突变

【目的】明确血小板无力症患者的基因缺陷 ,为进一步探讨其发病机理奠定实验基础。【方法】通过 4 0对引物对GT 5 7的αⅡb和 β3亚基基因的所有 4 5个外显子及其剪接点进行了全长的PCR扩增 ,然后对PCR产物进行了SSCP 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,发现αⅡb基因的 14号和 15号外显子 (Exon14 /15 )的PCR扩增产物出现了异常条带 ,对外显子 14 /15的PCR产物进行了直接测序。【结果】αⅡb基因外显子 14发生了点突变G→C ,导致氨基酸密码由GCT→CCT ,该突变位于αⅡb亚基cDNA第 14 30个碱基 ,导致第 4 77( 4 4 6 )位氨基酸残基由丙氨酸转变成脯氨酸 [αⅡbA4 77P(A4 4 6P) ]。【结论】通过查阅文献资料 ,αⅡbA4 77P(A4 4 6P)

血小板无力症患者出血机制的初探

目的探讨血小板无力症(glanzmann’s thrombasthenia,GT)患者血小板聚集功能异常的可能机制。方法采用流式细胞仪检测血小板糖蛋白Ⅱb(GPⅡb,CD41)/Ⅲa(GPⅢa,CD61)含量,并通过血小板聚集试验、血小板黏附试验、血块收缩试验对血小板功能的检测。结果GT患者血小板糖蛋白Ⅱb(GPⅡb,CD41)/Ⅲa(GPⅢa,CD61)含量明显低于正常,血小板聚集试验、血小板粘附试验、血块收缩试验明显较正常低下,出血时间较正常明显延长。结论血小板GPⅡb/Ⅲa量的减少及功能障碍是导致血小板无力原因,可能机制与其相关基因突变有关。

遗传性血小板无力症的发病机制及产前诊断

目的探讨血小板无力症（GT）的基因测序与产前诊断。方法采集1例表型GT患儿、父母及1例正常对照者的静脉血,患儿母亲腹中孕23周胎儿的脐带血和羊水,及其出生2 d时的静脉血。检测患儿、患儿父母、胎儿脐血及正常对照者的血凝常规和血小板聚集试验;流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb和GPⅢa的表达;微卫星技术确定胎儿脐血是否被母体细胞污染;PCR技术扩增患儿及其父母,以及胎儿及出生2 d静脉血GPⅡb、GPⅢa所有外显子以及外显子和内含子交界区,扩增产物直接测序。结果二磷酸腺苷（ADP）不能诱导患儿的血小板发生聚集,胎儿脐血中ADP诱导的血小板最大聚集率约为正常人一半,患儿父母和胎儿出生2 d的ADP诱导的血小板最大聚集率与正常血小板聚集率相当。患儿血小板膜表面GPⅡb、GPⅢa的的平均荧光强度（Mn X）分别约为正常对照的10%及0,而患儿父母、胎儿脐血和胎儿出生2 d的Mn X分别为正常对照的90%以上和30%-50%。羊水胎儿脱落细胞和脐血DNA微卫星分析证实胎儿羊水、脐血未被母体细胞污染;基因分析结果显示,患儿GPⅢa 6号外显子A38293→C和9号外显子G42186→A的杂合突变,导致GPⅢa His281→Tyr和Cys400→Pro氨基酸的杂合改变。这两个突变分别来源于父亲和母亲。羊水胎儿脱落细胞、脐血或出生2 d静脉血中只有1个GPⅢa9号外显子G42186→A的杂合突变。结论 GT患儿GPⅢa的基因为双重杂合突变;胎儿出生后确证为GPⅢa基因杂合突变。

红细胞收缩:血小板无力症的可能代偿机制?

该文对２例Ⅰ型血小板无力症进行了１３年的临床观察。发现患者出血症状随年龄增长明显减轻，全血血块回缩（ＣＲ）也由初诊时的不良转变为良好。进一步研究发现：患者血小板ＣＲ仍有缺陷，Ｍｇ２＋对血小板ＣＲ缺陷无改善作用，但患者红细胞ＣＲ（分别为０．５２和０．６０）较正常（０．４０）好，将洗涤后的正常“Ｏ”型血红细胞分别悬浮在患者和正常新鲜血浆中所作的ＣＲ二者无区别，该研究表明：患者红细胞而不是血浆因素（纤维蛋白质）可能发挥了部份代偿全血ＣＲ的作用。

一例GPⅡb基因突变导致血小板无力症的诊断

目的对1例血小板无力症(GT)患者进行实验诊断,分析引起血小板膜糖蛋白(GP)缺陷的突变基因。方法通过对先证者凝血常规、血小板计数、血小板聚集功能、出血时间、GPⅡb/Ⅲa(CD41/CD61)含量等项目的检测和血涂片中血小板形态及分布的观察,进行临床表型诊断。通过聚合酶链反应(PCR)扩增结合测序的方法,分析先证者GPⅡb/Ⅲa基因的所有外显子区及其侧翼序列,家系成员仅在相应突变区域进行PCR扩增和测序。同时以100名健康人作为对照进行分析,以排除基因多态性。结果先证者凝血常规检测和血小板计数正常,但出血时间延长,血小板聚集功能异常;表现为对多种生理性诱聚剂反应低下,但对瑞斯托霉素反应正常,血块退缩不良;流式细胞术检测CD41、CD61含量显著降低;血涂片中血小板散在,无聚集现象。经测序,发现先证者GPⅡb基因23号外显子存在18183A>C杂合变异,导致GPⅡb蛋白Q778P替换。与100名健康对照者测序比较,排除基因多态性,证实其为基因突变。结论 GPⅡb基因的Q778P杂合突变是导致该先证者患GT的原因之一。

一种新的整合素α_(Ⅱb)Pro126His突变导致的遗传性血小板无力症

目的:对1例遗传性血小板无力症(GT)先证者及其家系成员进行表型和基因诊断,并探讨其分子发病机制。方法:通过血小板计数、血涂片观察血小板、出血时间测定、凝血象检查和血小板聚集试验进行表型诊断;流式细胞术检测血小板表面α_(Ⅱb)和β_3的含量;PCR法扩增先证者基因组DNAα_(Ⅱb)和β_3的所有外显子及其侧翼序列;PCR产物采用末端标记双脱氧法进行直接基因测序,对发现的突变位点采用AS-PCR法扩增先证者及其家系成员和正常人相对应的片段。结果:先证者血小板计数正常、血涂片血小板分散不聚集,出血时间明显延长,凝血象正常,对ADP、凝血酶、肾上腺素、胶原、花生四烯酸等多种诱聚剂反应低下,而对瑞斯托霉素的反应基本正常;先证者血小板表面未检测到α_(Ⅱb),β_3阳性血小板仅占8%,平均荧光强度明显减弱;先证者在α_(Ⅱb)基因外显子4存在C470A纯合突变,导致α_(Ⅱb)氨基酸序列Pro126His(P126H)替换。父母为近亲婚配,均为该位点的杂合突变。AS-PCR排除了该突变为基因多态性的可能。结论:整合素α_(Ⅱb)基因外显子4C470A(P126H)纯合错义突变是导致该患者GT的分子机制,是国际上首次报道的一种新的整合素α_(Ⅱb)基因错义突变。

血小板无力症患者血小板GPⅡbⅢa受体亲和力的改变及临床意义(英文)

目的 探讨血小板无力症 (Glanzmann’sThrombasthenia ,GT)患者血小板聚集功能异常的可能机制。方法 采用Western印迹分别检测正常人、GT患者及其父母血小板CPⅡbⅢa的含量 ,流式细胞术分析血小板膜CPⅢa的表达和血小板结合活化型单抗PAC - 1的能力。结果 与正常人相比 ,GT患者GPⅡbⅢa明显减少 ,其血小板结合PAC - 1的能力亦明显低下。结论 GPⅡbⅢa激活受阻可能为部分GT患者血小板聚集功能障碍的分子基础。

五个遗传性血小板无力症家系的表型和基因型诊断

目的:对5个遗传性血小板无力症(GT)家系进行临床表型和基因型诊断。方法:通过止血和凝血指标检测、血小板(PLT)聚集试验和流式细胞术明确5个GT家系的诊断,用PCR扩增结合直接测序法分析先证者的αⅡb基因和β3基因的所有外显子及其侧翼序列,突变位点经直接测序证实排除基因多态性。同时选择100名健康人作为对照进行分析。结果:5个家系的先证者PLT计数均正常,凝血象正常,而出血时间(BT)延长;PLT对多种诱聚剂反应低下,而对瑞斯托霉素反应基本正常;流式细胞术结果显示,除家系3先证者为Ⅲ型GT外,其余4个家系的先证者均为Ⅰ型GT。基因分析共发现8种突变,均发生于αⅡb基因,分别为1750C>T(Arg553Stop)、2671C>T(Gln860Stop)、235G>T(Glu48Stop)、1084T>C(Phe331Leu)、1772A>C(Asp560Ala)、69-79del(移码突变)、2333A>C(Gln747Pro)和3060G>C(Lys989Asn)。结论:αⅡb1750C>T和αⅡb2671C>T复合杂合突变是导致家系1先证者发生GT的原因;αⅡb2671C>T和αⅡb235G>T复合杂合突变是导致家系2先证者发生GT的原因;αⅡb1084T>C和αⅡb1772A>C复合杂和突变是导致家系3先证者发生GT的原因;αⅡb69-79del纯合突变是家系4先证者发生GT的原因;αⅡb2333A>C和αⅡb3060G>C是家系5先证者发生GT的原因。235G>T、1084T>C、1772A>C和3060G>C突变为国际首次报道的发生于αⅡb基因的突变。

血小板无力症患者其血小板GPⅡb/Ⅲa受体检测及其机制的探讨

目的:探讨血小板无力症(Glanzmann's thrombasthenia,GT)患者血小板聚集功能异常的可能机制。方法:采用流式细胞仪检测血小板糖蛋白Ⅱb(GPⅡb,CD41)/Ⅲa(GPⅢa,CD61)含量,并通过血小板聚集试验、血小板黏附试验和血块收缩试验对血小板功能进行检测。结果:GT患者血小板糖蛋白Ⅱb(GPⅡb,CD41)/Ⅲa(GPⅢa,CD61)含量明显低于正常,血小板聚集试验、血小板黏附试验和血块收缩试验明显较正常低下,出血时间较正常明显延长。结论:血小板GPⅡb/Ⅲa量的减少及功能障碍是导致血小板无力的原因,其机制可能与相关基因突变有关。

血小板无力症致月经过多临床诊治研究

血小板无力症是一种常染色体隐性遗传疾病,是由于先天性血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(简称GPⅡb/Ⅲa)基因缺陷,使得GPⅡb/Ⅲa异常,引起血小板聚集功能异常而导致的出血性疾病。该病好发于青少年,临床表现主要为自幼皮肤、粘膜反复出血,在妇产科就诊的患者多以月经过多为主诉,明确诊断主要依靠实验室检查,治疗以输血和(或)输血小板对症支持治疗为主,妇科处理常以雌、孕激素止血、曼月乐环和手术切除子宫为主。为提高妇产科医师对血小板无力症的诊治认识,该文就此疾病作以综述。

血小板无力症97例临床发病特征分析

目的:调查和分析汉族血小板无力症患者的诊疗现状,进一步认识血小板无力症的临床特点,提高诊疗水平。方法:回顾性分析97例血小板无力症患者的临床资料,总结人口学资料、临床特点及诊治经过。结果:97例患者分布17个省,仅18.7%患者来自近亲结婚家庭。按照不同部位发生出血的频率依次为皮肤瘀点瘀斑(77.32%),鼻出血(69.07%),牙龈出血(36.08%),外伤后出血(19.59%),消化道出血(12.37%),极少数患者出现血尿和关节出血。90.57%初潮后女性患者月经增多,13.21%女性曾有过黄体破裂,5.67%女性不孕。男性和女性患者平均出血分数分别为2.96和2.61。90.72%的患者自幼开始出血,9.28%的患者幼年无明显异常出血,直到成年后才出现明显的出血症状。97例患者中1例死于颅内出血,26例患者随着年龄增长而出血症状自行缓解。结论:汉族血小板无力症以非近亲结婚的复合杂合子为主,早期诊断率较低,误诊率和死亡率较高,需进一步提高临床医生对该病的认识,提高其早期诊断率。

血小板无力症与GPIIb-IIIa分子缺陷

血小板膜糖蛋白GPIIb IIIa复合物是在血小板粘附聚集过程中起重要作用的粘附分子受体 ,能结合纤维蛋白原、VWF等多种粘附蛋白。GPIIb IIIa质或量的缺陷导致血小板无力症 ,根据GPIIb IIIa缺陷程度分为I,II,III型 ,临床表现为出血时间延长 ,聚集反应明显减弱。GPIIb IIIa的研究已进入分子水平 。

血小板无力症的分子基础和基因治疗前景

血小板无力症(Glanzmann Thromboathenia,GT)是一种遗传性的血小板膜糖蛋白Ⅱb,Ⅲa(Glycoprotein,GP Ⅱb,Ⅲa)数量减少或结构异常所致的出血性疾病。临床上以自幼的出血症状,血小板对ADP肾上腺素、胶原等诱聚剂无聚集反应为特征,我国已有不少病例报道。1974年Nurden和Gaen首先发现GT缺乏血小板GP Ⅱb,Ⅲa。随后由于单克隆抗体,免疫印迹,配基结合及抑制实验,放射受体分析等技术的发展和应用。

一种新的GP Ⅱb基因540A缺失移码突变引起的血小板无力症

目的:为了明确1例血小板无力症患者发生的分子机制。方法:用40对引物对血小板无力症患者GPⅡb/Ⅲa(αIIbβ3)基因的45个外显子序列及其剪切点进行全长扩增,用SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行基因突变筛选,将筛选出的PCR产物进行直接测序。结果:患者GPⅡb基因Exon4的PCR产物经SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现异常条带,PCR产物直接测序显示GPⅡb基因540A缺失导致后面的氨基酸编码发生移码突变。结论:GPⅡb基因540A缺失发生移码突变是GPⅡb基因的一种新突变,是血小板无力症发病的分子基础之一。