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血小板生成素双体分子的融合构建、原核表达及其分子结构特性预测
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作者 郭斯启 奚永志 +2 位作者 袁志宏 崔建武 梁飞 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期380-384,F003,共6页
目的为了研制更稳定、高效、低毒的血小板生成素(TPO),拟设计构建TPO的双体分子(TT)并在原核中表达,同时预测其融合蛋白的分子结构特性。方法采用分子克隆方法分别构建TPO单体分子与双体分子的原核表达载体pET32/TPO和pET32/TT,并在大... 目的为了研制更稳定、高效、低毒的血小板生成素(TPO),拟设计构建TPO的双体分子(TT)并在原核中表达,同时预测其融合蛋白的分子结构特性。方法采用分子克隆方法分别构建TPO单体分子与双体分子的原核表达载体pET32/TPO和pET32/TT,并在大肠杆菌中进行表达,以Westernblot鉴定表达产物;用生物信息学方法DSGene1.1和ProtScale软件,对该融合蛋白的结构特征如电点、柔性、抗原性及亲水性等进行模拟分析。结果成功构建TPO双体分子pET32/TT的原核表达载体,并经NcoI和NotI双酶切电泳及测序证实。通过转化origamiTM(DE3)感受态菌及IPTG诱导获得高效表达,其产量在40%以上;Westernblot显示表达产物能与抗TPO单克隆抗体特异性结合。对TT双体分子融合蛋白的结构特性预测表明,其融合蛋白中的两个TPO单体分子等电点、抗原性及亲水性均无显著改变,接头处具有高柔性。与TPO的原始序列相比,TT的一级结构中有2个氨基酸发生改变,在接头(L)后插入一段34个氨基酸的新序列(N)。此序列具有一定的抗原性和亲水性,呈现β片层结构。结论本研究所构建表达的TPO单体和TT双体分子均可在大肠杆菌中获高效表达,TT双体分子的结构预测符合设计要求,为进一步研究新型TT双体分子融合蛋白的生物学特性提供了基础。 展开更多
关键词 血小板生成素双体分子 融合构建 原核表达 蛋白特性预测
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分子克隆人血小板生成素基因 被引量:6
2
作者 侯纬敏 陆爱丽 +1 位作者 岱美茹 董冬生 《北京医科大学学报》 CSCD 1996年第1期1-3,共3页
目的:克隆人血小板生成素基因,方法:采用RT一PCR的方法。结果:从人胎肝中克隆出全长的血小板生成素(TPO)基因,并亚克隆至PUCll8载体中。该cDNA全长1062BP,编码353个氨基酸,经序列测定与Bartl... 目的:克隆人血小板生成素基因,方法:采用RT一PCR的方法。结果:从人胎肝中克隆出全长的血小板生成素(TPO)基因,并亚克隆至PUCll8载体中。该cDNA全长1062BP,编码353个氨基酸,经序列测定与Bartley等人报道的完全一致[1]。结论:已获得人血小板生成素基因,此项工作为基因工程生产TPO奠定了良好基础。 展开更多
关键词 分子克隆 基因 血小板生成素
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老年多发性骨髓瘤患者血清增殖诱导配体、可溶性细胞间黏附分子-1、血小板生成素和血管内皮生长因子表达水平 被引量:8
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作者 王欢 陈曦 +1 位作者 刘艳春 刘庆荣 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期6489-6491,共3页
多发性骨髓瘤主要特征是恶性变的细胞分泌大量单克隆免疫球蛋白。由于树突细胞是重要的抗原递呈细胞,在激发和控制获得性免疫反应的程度和范围中起重要的作用,也是免疫应答的起始细胞〔1,2〕,因此与其相关的蛋白,可能是促使骨髓瘤... 多发性骨髓瘤主要特征是恶性变的细胞分泌大量单克隆免疫球蛋白。由于树突细胞是重要的抗原递呈细胞,在激发和控制获得性免疫反应的程度和范围中起重要的作用,也是免疫应答的起始细胞〔1,2〕,因此与其相关的蛋白,可能是促使骨髓瘤发生和发展的因子〔3〕。血清增殖诱导配体( APRIL)、可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1、血小板生成素(TPO)和血管内皮生长因子( VEGF)均为此类相关蛋白,骨髓瘤患者四种蛋白血清表达升高〔4~7〕,四者对病变有一定促进作用。本文关注 A-PRIL、sICAM-1、TPO和VEGF在老年人多发性骨髓瘤中的表达及其相关性。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 血清增殖诱导配体(APRIL) 可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1 血小板生成素(TPO) 血管内皮生长因子(VEGF)
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促血小板生成素(TPO)的分子生物学特性及其临床应用前景 被引量:2
4
作者 杨洁 刘文军 +1 位作者 阮力 蔡有余 《中国实验动物学杂志》 1996年第3期174-178,共5页
促血小板生成素(TPO)的分子生物学特性及其临床应用前景杨洁,刘文军(综述)阮力,蔡有余审校(中国医学科学院,中国协和医科大学实验动物研究所,北京)早在五十年代末期就有人提出假说,认为血液中血小板的数量是由某些体液因... 促血小板生成素(TPO)的分子生物学特性及其临床应用前景杨洁,刘文军(综述)阮力,蔡有余审校(中国医学科学院,中国协和医科大学实验动物研究所,北京)早在五十年代末期就有人提出假说,认为血液中血小板的数量是由某些体液因子调控的,并将此因子命名为促血小板... 展开更多
关键词 血小板生成素 临床应用 体液因子 巨核细胞 TPO 分子生物学特性 G-CSF 成熟过程 调控 发育
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血小板生成素分子生物学研究现状
5
作者 李景斗 郑以州 《国外医学(输血及血液学分册)》 北大核心 1996年第6期331-334,共4页
“孤儿”受体c-MPL的配体血小板生成素(TPO)为新近纯化和分子克隆的一种造血细胞生长因子,具有能特异性地刺激巨核系祖细胞增殖分化和促进巨核细胞成熟的活性。本文就TPO分子结构特征及其信号传递的分子机制研究现状作一综述。
关键词 血小板生成素 分子结构 基因结构 信号传递
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血小板生成素基因的克隆及在原核细胞的表达 被引量:1
6
作者 王怀宇 刘陕西 +1 位作者 郑树 陈念祖 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第6期509-511,共3页
目的 克隆人血小板生成素 (hTPO)基因 ,并使其在原核细胞中获得表达。方法 先从人胚胎肝脏中提取总RNA ,进行RT -PCR获得编码氨基端 1 95个氨基酸残基的hTPO1 95cDNA。将该片段亚克隆至pGEM -Teasy克隆质粒中 ,以双脱氧链末端终止法... 目的 克隆人血小板生成素 (hTPO)基因 ,并使其在原核细胞中获得表达。方法 先从人胚胎肝脏中提取总RNA ,进行RT -PCR获得编码氨基端 1 95个氨基酸残基的hTPO1 95cDNA。将该片段亚克隆至pGEM -Teasy克隆质粒中 ,以双脱氧链末端终止法对克隆质粒直接测序。接着将hTPO1 95cDNA插入到原核表达质粒 pET2 8-a中 ,转化大肠杆菌BLR2 1 (DE3) ,进行诱导表达 ,以SDS -PAGE方法及免疫印迹法进行检测。结果 得到的hTPO1 95cDNA与文献报道的序列完全一致。经诱导后hTPO基因在大肠杆菌中获得表达 ,目的蛋白占总菌体蛋白约 1 0 % ,以免疫印迹法证实表达产物正确。结论 得到hTPO1 95cDNA ,并在原核细胞中获得表达 ,得到截短形式的rhT PO1 95。 展开更多
关键词 血小板生成素 基因表达 分子克隆 血小板减少
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血小板生成素的研究及临床应用 被引量:5
7
作者 周宏 王进雪 曲冬梅 《基础医学与临床》 CSCD 2000年第2期12-16,共5页
Thrombopoietin(TPO) acts primarily as a megakaryocytic lineage-specific hematopoietic growth factor through a specific cell surface receptor encoded by c-Mpl proto-oncogene. It has been shown successfully to stimulate... Thrombopoietin(TPO) acts primarily as a megakaryocytic lineage-specific hematopoietic growth factor through a specific cell surface receptor encoded by c-Mpl proto-oncogene. It has been shown successfully to stimulate megakaryocytic development from CD34+ precursor cells, megakmpocytic proliferation and enlargement both in vitro and in vivo. Then, platelet(PLT ) production will be increased. TPO also plays a role in mobilization of erythroid and myeloid progenitor cells. It works with a dose-dependent manner on the PLT number. TPO can reduce the degree and duration of chemotherapy or radiation induced thrombocytopenia both in animals and in human. And it has on effect on platelsts count in volunteer PLT donors and the number of peripheral progenitors transplantation. No severe complications occur during TPO use in clinic trials. So it may be practiced in clinic medicine in the near future, perhaps in treatment of acute leukemia, post-chemotherapy bone marrow inhibition, bone marrow transplantation, transfusion medicine and platelet collection and Storage. 展开更多
关键词 血小板生成素 临床应用 分子生物学 药代动力学
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血小板生成素的研究进展 被引量:4
8
作者 陆华 魏明竟 蒲晓允 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 2001年第4期205-206,共2页
血小板生成素被成功克隆不到 4年的时间 ,便被迅速用于临床。本文试从分子生物学特征、生物学作用、以及其在临床上的应用几个方面 。
关键词 血小板生成素 分子生物学 生物学作用 临床应用
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血小板生成素与新生儿血小板减少 被引量:2
9
作者 王欲琦 刘翠青 《中国小儿血液》 2003年第2期93-95,92,共4页
关键词 血小板生成素 新生儿血小板减少 调控机制 分子生物学 受体
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人促血小板生成素(TPO)原核表达载体pQE30-TPO的构建
10
作者 梁婷 侯桂华 李璐娜 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2003年第1期67-69,共3页
目的:获得人血小板生成素全长cDNA克隆,并构建重组表达载体pQE30-TPO。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝细胞mRNA中扩增目的基因,将扩增产物克隆至pMD18-T载体,经菌落PCR鉴定后,DNA序列分析重组质粒pMD18-T-TPO。构建并鉴定原核表达载体pQE3... 目的:获得人血小板生成素全长cDNA克隆,并构建重组表达载体pQE30-TPO。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝细胞mRNA中扩增目的基因,将扩增产物克隆至pMD18-T载体,经菌落PCR鉴定后,DNA序列分析重组质粒pMD18-T-TPO。构建并鉴定原核表达载体pQE30-TPO。结果:构建了重组克隆载体pMD18-T-TPO和重组表达载体pQE30-TPO,序列分析表明,获得的TPOcDNA序列与国内外报道的人促血小板生成素核苷酸序列完全一致。结论:成功构建了重组表达载体pQE30-TPO,为TPO的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 血小板生成素 克隆 分子 序列分析 原核表达 人类
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血小板生成素cDNA体内转送促进血小板生成的研究
11
作者 李景泰 越建增 刘丽 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期150-151,共2页
血小板生成素(TPO)是巨核-血小板系分化和生长的特异调控因子,在临床骨髓抑制症的治疗中有很大的应用价值。重组多肽细胞因子一般因难以避免的污染,体内半衰期短等因素,造成其生物活性不能有效发挥或产生毒副作用。若相关基因经适当途... 血小板生成素(TPO)是巨核-血小板系分化和生长的特异调控因子,在临床骨髓抑制症的治疗中有很大的应用价值。重组多肽细胞因子一般因难以避免的污染,体内半衰期短等因素,造成其生物活性不能有效发挥或产生毒副作用。若相关基因经适当途径转送后在体内表达,可克服此类不良因素,同时为研究细胞因子对机体长期作用提供了比较理想的模型。我们曾观察到把hTPO cDNA通过质粒载体转送到小鼠体内后,使小鼠对环磷酰胺的毒性作用产生明显的耐受。 展开更多
关键词 血小板生成素 细胞因子 临床分子生物学 CDNA 小鼠 血小板计数 环磷酰胺 生物活性 调控因子 重组多肽
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人血小板生成素的基因克隆及序列分析
12
作者 赵跃然 游力 +2 位作者 张建 高春义 田志刚 《山东医科大学学报》 2000年第2期134-135,共2页
目的 :为获得人血小板生成素全长cDNA克隆。方法 :用RT PCR技术 ,以特异性寡核苷酸为上、下游引物自胎肝总RNA中扩增目的基因。结果 :PCR扩增产物克隆至pUC18 T载体 ,获得重组质粒pUCT TPOM。 结论 :序列分析显示 。
关键词 血小板生成素 分子克隆 序列分析 RT-PCR
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血小板生成素的研究进展
13
作者 蓝柯 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1998年第2期196-199,共4页
血小板生成素的研究进展病理生理教学研究室蓝柯综述范维珂审校中图分类号R331.143血小板的发生需经历多能干细胞(multipo-tentialstemcell)、定血干细胞(committedstemcell)、原... 血小板生成素的研究进展病理生理教学研究室蓝柯综述范维珂审校中图分类号R331.143血小板的发生需经历多能干细胞(multipo-tentialstemcell)、定血干细胞(committedstemcell)、原巨核细胞(megakaryobla... 展开更多
关键词 血小板生成素 分子结构 基因结构
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血小板生成素研究进展
14
作者 李文 朱美财 《空军总医院学报》 1996年第3期157-160,共4页
血小板生成素研究进展临床实验科李文,朱美财主题词:血小板生成素血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)是一种刺激巨核细胞增殖、分化和成熟,并影响血小板生成的重要细胞因子,是维持循环血小板水平恒定的主要生理... 血小板生成素研究进展临床实验科李文,朱美财主题词:血小板生成素血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)是一种刺激巨核细胞增殖、分化和成熟,并影响血小板生成的重要细胞因子,是维持循环血小板水平恒定的主要生理调节剂。五十年代,人们在探讨体液因... 展开更多
关键词 血小板生成素 研究进展 生化特性 分子生物学 临床应用
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双重血浆分子吸附系统模式人工肝治疗对血小板的影响 被引量:7
15
作者 贾金凤 梁菲 +2 位作者 黄建伟 王昊 韩璞青 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期548-551,共4页
目的:比较双重血浆分子吸附系统(double plasma molecular absorb system,DPMAS)模式和传统血浆置换(plasma exchange,PE)模式人工肝治疗对患者血小板的影响,评价重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO)对此类血... 目的:比较双重血浆分子吸附系统(double plasma molecular absorb system,DPMAS)模式和传统血浆置换(plasma exchange,PE)模式人工肝治疗对患者血小板的影响,评价重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO)对此类血小板下降的临床疗效。方法:选择2018年1月—2020年11月入住广州医科大学附属第五医院的15例DPMAS模式人工肝患者,纳入DPMAS组,另选择同期、年龄匹配(±5岁)广州医科大学附属第五医院接受PE的患者15例纳入PE组,对两组患者进行回顾性分析。比较两组患者人工肝治疗前后的临床症状(如乏力、黄疸、少尿、水肿等)是否改善,并比较两组患者治疗前后的血常规(特别是血小板)、凝血功能等指标,记录患者治疗期间重组人血小板生成素的使用情况以及血小板的输注量。结果:DPMAS组患者临床症状改善率为86.67%,高于PE组,但差异无统计学意义(P>0.05),两组患者90 d内转归情况相比,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组白细胞、血红蛋白相比差异无统计学意义(P>0.05),但DPMAS组患者治疗后血小板水平明显低于治疗前(P<0.05),且显著低于治疗后PE组(P<0.05)。治疗后PE组患者的国际标准化比值得到明显改善(P<0.05),但DPMAS组患者国际标准化比值水平变化组间差异无统计学意义(P>0.05)。DPMAS组使用重组人血小板生成素平均约(8.2±3.1)支,住院期间输注血小板(1.5±0.3)IU,DMPAS组患者输注重组人血小板生成素后血小板明显上升。结论:与PE模式相比,DPMAS人工肝模式可降低患者血小板水平,应用重组人血小板生成素可刺激患者血小板再生,提高血小板水平,从而降低因血小板低下而发生的出血风险。 展开更多
关键词 人工肝 双重血浆分子吸附系统 血浆置换 血小板 重组人血小板生成素
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2M型VWD突变通过不同机制减弱VWF与血小板的结合
16
作者 方金花 吴芝伟 +3 位作者 杨俊贤 方颖 吴建华 林蒋国 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期403-403,共1页
目的血管性血友病因子(VWF)招募血小板是形成血栓的关键步骤,受VWF-A1与A2互作的调节。VWF的功能异常会引起血管性血友病(VWD),但A1/A2互作在VWD中对血小板黏附的调节作用尚未明确。方法采用分子动力学模拟探究VWF-A1与A2互作的结合界面... 目的血管性血友病因子(VWF)招募血小板是形成血栓的关键步骤,受VWF-A1与A2互作的调节。VWF的功能异常会引起血管性血友病(VWD),但A1/A2互作在VWD中对血小板黏附的调节作用尚未明确。方法采用分子动力学模拟探究VWF-A1与A2互作的结合界面,并研究位于该界面上的2M型VWD突变如何影响A1/A2互作,同时使用原子力显微镜在单分子层面进行验证;此外,还利用流动腔技术研究了2M型VWD突变对A1及A1A2双体在流动环境中招募血小板的能力。结果在A1/A2结合界面发现了8种2M型VWD突变,其中S1358N、E1359K、V1360A、K1362T和Y1363C突变显著增强了A1/A2的互作,而L1361W、L1365R和F1369I突变对A1/A2的互作无明显影响。原子力显微镜的单分子力谱实验也证实了这些2M型突变对A1/A2互作具有不同的影响。除了E1359K突变在招募血小板能力上与野生型A1相当外,其他7种突变都表现出不同程度的减弱效果。在A1A2双体招募血小板的实验中,所有2M型突变都显示出减弱血小板黏附的趋势。结论2M型VWD突变可能通过两种不同的机制影响血小板招募:一种是突变直接改变VWF-A1招募血小板的能力,另一种是突变通过促进自抑制的A1/A2互作来削弱对血小板的招募,例如E1359K突变。 展开更多
关键词 血小板黏附 血管性血友病 原子力显微镜 功能异常 分子力谱 双体 分子 自抑制
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促血小板生成素的分子生物学研究进展
17
作者 汪治清 杨新科 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期394-397,共4页
促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)是近年分离的一种造血生长因子,能特异地刺激巨核细胞增殖、分化、成熟和血小板的产生,对维持机体的正常凝血功能有着重要意义。本文拟对其分子生物学研究进展作一综述。1T... 促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)是近年分离的一种造血生长因子,能特异地刺激巨核细胞增殖、分化、成熟和血小板的产生,对维持机体的正常凝血功能有着重要意义。本文拟对其分子生物学研究进展作一综述。1TPO的基因克隆与基因结构1994年... 展开更多
关键词 血小板生成素 分子生物学 基因克隆 基因结构
原文传递
重组双体化促血小板生成素模拟肽人血清白蛋白融合蛋白(HSA-TMP-TMP)体内生物活性与药效学研究 被引量:1
18
作者 杨洋 支德娟 +3 位作者 汤伟 王梅竹 王娜 李红玉 《药物生物技术》 CAS 2016年第4期304-307,共4页
探索双体化重组人白蛋白与促血小板生成素模拟肽二联体融合蛋白(HSA-TMP-TMP)对正常小鼠促血小板生成活性的影响,并探讨双体化HSA-TMP-TMP对卡铂诱导继发性血小板减少症模型小鼠的治疗作用。给予正常小鼠不同剂量的双体化HSA-TMP-TMP,... 探索双体化重组人白蛋白与促血小板生成素模拟肽二联体融合蛋白(HSA-TMP-TMP)对正常小鼠促血小板生成活性的影响,并探讨双体化HSA-TMP-TMP对卡铂诱导继发性血小板减少症模型小鼠的治疗作用。给予正常小鼠不同剂量的双体化HSA-TMP-TMP,观察其促血小板生成活性;给予小鼠单次腹腔注射卡铂,建立化疗药物卡铂诱导的血小板减少症模型,并给予不同剂量的双体化HSA-TMP-TMP进行治疗,观察治疗效果。单体和双体HSA-TMP-TMP均可显著提高正常小鼠血小板计数水平,双体HSA-TMP-TMP提高正常小鼠血小板计数水平是单体HSA-TMP-TMP的1.57倍。而且,双体HSA-TMP-TMP对卡铂诱导继发性血小板减少症模型小鼠具有显著的治疗作用。双体HSA-TMP-TMP具有显著增加正常小鼠血小板计数水平的生物活性,而且对卡铂诱导的血小板减少症小鼠具有显著的治疗作用。 展开更多
关键词 双体 人血清白蛋白 血小板生成素模拟肽 融合蛋白 生物活性 继发性血小板减少症
原文传递
人体c-Mpl分子配体不同表达载体的构建及其优化表达策略 被引量:2
19
作者 张擎 葛怡琛 +1 位作者 潘瑞敏 徐培林 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期59-62,81,共5页
利用酵母双杂交系统从人体肝脏cDNA文库筛选到血小板生成素受体Mpl分子配体的xp1基因,构建pET_28(b)_xp1,pBV220_xp1和pBAD gⅢA_xp1表达质粒,分别进行IPTG、温度和果糖诱导,表达产物利用小鼠巨核细胞集落形成单位测定活性。表达分... 利用酵母双杂交系统从人体肝脏cDNA文库筛选到血小板生成素受体Mpl分子配体的xp1基因,构建pET_28(b)_xp1,pBV220_xp1和pBAD gⅢA_xp1表达质粒,分别进行IPTG、温度和果糖诱导,表达产物利用小鼠巨核细胞集落形成单位测定活性。表达分析显示BL21 pET_28(b)_xp1水溶性XP1目的蛋白表达量为最高,活性最大;BL21 pBV220_xp1被短时、低温诱导后可增加表达目的蛋白的水溶性,但稳定性差,表达量和活性均不及BL21 pET_28(b)_xp1高;TOP10 pBAD gⅢA_xp1不能分泌到细胞质周膜,以包涵体形式存在细胞内中,并且为无活性表达。 展开更多
关键词 人体c-Mpl分子配体 血小板生成素受体 xpl基因 基因表达 表达载体 表达策略 表达量
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rhTPO的分子克隆表达及活性测定 被引量:2
20
作者 陆爱丽 岱美茹 +3 位作者 董冬生 侯纬敏 许尉林 马明信 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第3期196-197,共2页
目的;分子克隆并表达具有生物学活性的人血小板生成素(rhTPO)。方法:采用PCR、序列测定、原核表达及亲和层析法。结果:以人全长的TPOCDNA为模板[1],用PCR法获得了编码195个氨基酸残基的hTPO195cDNA并克隆至原核表达质粒pMal-p2... 目的;分子克隆并表达具有生物学活性的人血小板生成素(rhTPO)。方法:采用PCR、序列测定、原核表达及亲和层析法。结果:以人全长的TPOCDNA为模板[1],用PCR法获得了编码195个氨基酸残基的hTPO195cDNA并克隆至原核表达质粒pMal-p2中,以麦芽糖融合蛋白(MBP)方式进行了表达。经Amylose树脂系和层析纯化获得了较高纯度的rhTPO195融合蛋白。生物学活性测定结果显示,其促进体外培养的巨核细胞集落形成与日本麒麟(Kirin)公司产品类似。结论;获得了具有天然生物学活性rhTPO,并在原核细胞中获得表达。 展开更多
关键词 血小板生成素 分子克隆 巨核细胞
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