血小板第四因子PF4对人中性粒细胞粘附性与呼吸爆发的调节作用

目的研究血小板第四因子PF4对人中性粒细胞Np功能的影响。方法用结晶紫染色、免疫荧光标记、PKC试剂盒测定、NBT法及高香草酸HVA荧光分光光度法比较对照组与PF4作用的实验组在趋化因子刺激前后,PF4对中性粒细胞总粘附性、整合蛋白CD11b的表达、PKC水平及呼吸爆发作用产生活性氧物质reactiveoxygenspeciesROSO2·-、H2O2等的影响。结果PF4对静息中性粒细胞总粘附性有轻度的增强作用使总粘附性上调了12.24%P<0.01,而对整合蛋白CD11b的表达、呼吸爆发产生的ROSO2·-、H2O2则无影响。进一步研究发现PF4使经趋化三肽(FMLP)活化的中性粒细胞的总粘附性下调17.47%P<0.01;使经趋化三肽(FMLP)活化的中性粒细胞的整合蛋白CD11b的表达下调18.84%P<0.01;使经佛波酯(PMA)活化的中性粒细胞的呼吸爆发作用产生的O2·-、H2O2分别下调了50.29%P<0.01、226.53%P<0.05。研究同时发现PF4对静息及活化的中性粒细胞的PKC水平均无影响。结论首次证明PF4与其它经典的趋化因子不同,是中性粒细胞活化的一个负调节因子,对中性粒细胞功能主要起降调节的作用。这种降调节作用不是通过PKC信号转导途径完成的。

减毒沙门氏菌介导的血小板第四因子活性片段的放射保护作用研究

目的 :观察减毒沙门氏菌携带的血小板第四因子活性片段PF417 70 的放射保护作用。方法 :通过口服途经喂饲小鼠携带PF4活性片段的减毒沙门氏菌 ,在第 2次喂饲后小鼠接受 70 0cGy全身照射 ,然后观察PIRES2 EGFP PF417 70 在小鼠体内的表达 ,并观察小鼠的造血恢复情况。结果 :在小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、外周血及骨髓均能检测到GFP的表达和转基因的整合。与对照组比较 ,实验组小鼠的生存期明显延长 ,照射后第 7d和 1 4d骨髓有核细胞数、骨髓培养的CFU GM和HPP CFC数量明显增加 (P <0 0 5 )。结论 :首次应用减毒沙门氏菌SL32 61为载体来介导PF4活性片段的生物学作用 ,并证实通过口服途径可以保护小鼠免受放射损伤 ,并促进放射损伤后小鼠的造血恢复。

血小板第四因子对脐血CD34^+细胞趋化作用的研究

目的 :研究PF4及其小肽PF417 70对新鲜脐血CD34+细胞的趋化作用及对粘附分子表达的影响。方法 :采用免疫磁珠法 (MACS)分选CD34+细胞 ,利用Transwell穿孔板测定PF4对CD34+细胞的趋化作用 ;流式细胞仪检测免疫荧光标记的粘附分子及CXCR4的表达。结果 :①PF4对脐血CD34+细胞有趋化作用 ,PF4组的趋化百分比为 15 7.43%± 5 0 .0 6 %(P <0 .0 5 ) ,PF417 70组为 187.0 2 %± 10 .6 9%(P <0 .0 5 )。②PF4作用于CD34+细胞时 ,CD49d和CXCR 4表达增加 ,对其它粘附分子CD31,CD44 ,CD11a ,CD6 2 p ,CD6 2E的表达没有影响。 结论 :PF4对脐血CD34+细胞有趋化作用 ,促进整合素CD49d及CXCR4的表达 ,PF4有助于脐血干细胞的归巢。

血小板第四因子在原核中的高效表达、分离纯化及活性测定

构建重组表达质粒pET - 32c PF4 ,并在原核中进行表达 ,以探讨其对白血病细胞系 (HEL)细胞增殖的作用。方法 :通过PCR方法从含有PF4基因的PQE - 6 0 PF4质粒中扩增PF4 ,用NcoⅠ HindⅢ双酶切 ,克隆到原核表达质粒pET - 32C中 ,使之在BL2 1表达 ,Ni-ChelatingSepharose亲和柱纯化 ,用细胞集落形成方法研究重组PF4对HEL的抑制作用。结果 :菌株筛选后在大肠杆菌中获得可溶性高效表达 ,重组PF4占菌体总蛋白的 2 2 %。肠激酶酶切除去N -端融合部分 ,获得了高纯度的重组人血小板第四因子 (rh -PF4 ) ,纯度为 95%以上。活性实验发现重组PF4可抑制HEL细胞集落的形成 ,抑制率为 4 7%。结论 :原核表达质粒pET - 32C可高效可溶性表达PF4 ,重组PF4对HEL细胞的增殖有抑制作用。

血小板第四因子对CD34^+白血病细胞系KG1a粘附功能的影响

目的研究血小板第四因子(PF4)对CD34+白血病细胞系KG1a细胞与人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞之间粘附性及对多种粘附分子表达的影响。方法采用粘附实验、粘附阻断实验、MTT染色、半定量RT-PCR、免疫标记流式细胞仪测定等方法。结果穴1雪PF4可以增加KG1a细胞与ECV-304细胞之间的粘附作用。PF4与KG1a及ECV-304细胞同时孵育或与KG1a或ECV-304细胞单独孵育,均使KG1a细胞粘附能力增加。穴2雪抗粘附分子CD49d、CD106、CD54单克隆抗体可显著减少PF4对KG1a粘附的增加作用,而抗粘附分子CD62L、CD62E、CD62P单抗则对PF4的这种增加粘附的作用没有影响。穴3雪在PF4作用的3h内,半定量RT-PCR检测粘附分子CD49d、CD106、CD54mRNA表达水平有不同程度的上调。(4)PF4作用2h后,流式细胞仪分析显示KG1a细胞上的CD49d、ECV-304细胞上的CD54蛋白表达水平显著增加。结论PF4通过上调粘附分子的表达促进KG1a细胞的粘附功能。

血小板第四因子与心脑血管疾病

血小板第四因子（platelet factor4．PF4）．由激活的血小板分泌。在巨核细胞中合成。贮存于a-颗粒中的大分子蛋白聚糖，具有中和肝素、炎症趋化、抑制血管形成和巨核细胞生长的功能^[1]。近年的研究多集中于研究PF4能可逆的抑制造血干（祖）细胞的生长，负性调节骨髓细胞增殖、分化。保护骨髓造血干（祖）细胞免受辐射和细胞毒剂的损伤：而关于血小板第四因子与心脑血管疾病的相关性研究。国内外报道较少，现简要综述。

肝素亲和柱与高效液相柱二步色谱法分离基因重组的人血小板第四因子

介绍利用肝素亲和色谱和高效液相色谱二步法分离纯化基因重组的人血小板第四因子（ｒｈＰＦ４）。采用肝素柱，用含不同浓度的ＮａＣｌ的磷酸盐缓冲液（ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｂｕｆｅｒ，即ＰＢＳ）（２０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．４）分级洗脱，得到初步纯化的ｒｈＰＦ４（纯度达８０％）；再采用Ｃ１８柱，乙腈（含０．１％三氟醋酸即ＴＦＡ）－水（含０．１％ＴＦＡ）为流动相梯度洗脱，得到进一步纯化的产物。方法快速、准确、分离效果好，经过两次分离后产物纯度达９５％以上。

口服携带人血小板第四因子的减毒沙门氏菌对放射损伤的保护作用

目的以减毒沙门氏菌SL3261为载体研究通过口服途径血小板第四因子(plateletfactor4PF4)对小鼠放射损伤的保护作用。方法将携带PF4基因的真核表达载体pIRES2EGFP转化减毒沙门氏菌SL3261,通过口服途经1×108个3d个菌株的剂量饲服小鼠,在第3次饲服后12h小鼠接受700cGy剂量60Co全身照射。以绿色荧光蛋白(greenfluorescenceproteinGFP)、外周血象及流式的检测、骨髓集落培养、小鼠生存期的观察研究PF4对造血系统的保护作用。结果照射后SL3261PF4治疗小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、外周血及骨髓分别检测到绿色荧光蛋白的表达。照射后第7和14天SL3261PF4组小鼠骨髓细胞总数(marrowmononuclearcellsMNC)、粒巨集落细胞形成细胞(granulocytemacrophagecolonyformingunitCFU-GM)和高增殖潜能集落形成细胞(highproliferatingpotentialcolonyformingcellsHPP-CFC)数量与对照组有明显差异(P<0.05),生存期明显延长。结论本研究首次证实以减毒沙门氏菌SL3261为载体,口服PF4基因治疗可以保护小鼠免受放射损伤,并促进放射损伤后小鼠的造血恢复。

血小板第4因子对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的调控机制

目的:检测小鼠骨髓细胞p53、Cyclin D1及CDK4蛋白表达量的变化,以探讨血小板第4因子(PF4)对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞保护作用的机制。方法:雄性BALB/c小鼠随机分为3组,第1组(正常对照组)、第2组(单纯照射组)、第3组(PF4保护组),第3组在照射前26 h及20 h腹腔注射PF4 40μg/kg,第2、3组全身一次性5 Gy60Co-γ射线照射,照射后4 h取小鼠骨髓细胞,Western blot检测小鼠骨髓细胞内p53、Cyclin D1、CDK4蛋白量表达的变化。结果:第2组、第3组小鼠骨髓细胞p53蛋白量与第1组相比明显升高,而Cyclin D1、CDK4则明显降低(P<0.05);第2组与第3组p53蛋白表达量的表达有明显差异(P<0.05),而Cyclin D1与CDK4无统计学意义(P>0.05)。结论:p53蛋白在PF4对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞周期调控作用中起一定作用。

血小板活化指标与缺血性脑卒中

血小板活化包括血小板形态的改变、血小板聚集、血小板成分的释放。近年来发现血小板活化因子、血小板第4因子、β血小板球蛋白、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、可溶性P选择素等血小板活化标志物在血栓形成、缺血性脑卒疾病中发挥重要作用。血小板活化指标物可引导缺血性脑卒中的临床诊断、预后情况及治疗反应。监测血小板活化指标物可辅助于抗栓治疗,预测预后。

重组血小板第4因子在甲醇酵母中的高效表达

目的 利用甲醇酵母高效表达重组人血小板第 4因子 (rhPF4)。方法 用PCR方法扩增出血小板第 4因子 (PF4)的cDNA序列 ,插入到穿梭质粒pPIC9的MFα信号肽后 ,在醇氧化脱氢酶 1(AOX1)启动子的下游 ,得到重组质粒pPIC9 PF4。转化到甲醇酵母宿主菌GS115 ,经筛选得到PF4高表达菌株进行表达 ,并测定表达产物氨基酸序列和生物学功能。结果 rhPF4氨基酸序列与天然PF4相同 ,可中和肝素抗凝作用 ,并呈剂量相关。结论 rhPF4可在甲醇酵母中获得生产规模表达 。

血小板黏附作用相关因子研究进展

血小板在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥、修复破损的血管等生理和病理过程中发挥重要作用。血小板黏附是其发挥生理功能的初始步骤。本文就近年来国内外有关血小板黏附作用有关因子研究展开综述。相关的因子主要有血小板膜糖蛋白Ⅰa-Ⅱa、膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa、P-选择素、溶酶体膜蛋白以及胞浆颗粒成分中的三磷酸腺苷(adenosine triphosphatase,ATP),14C-5-羟色胺(5-Hydroxtryptamine,5-HT),血小板第4因子(platelet factor 4,PF4)、β-血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)、血栓烷B2(thromboxane B2,TXB2)、CD40配体(CD40 ligand,CD40L)和溶酶体膜蛋白1(lysosomal granule membrane protein 1,Lamp1)和溶酶体膜蛋白2(lysosomal granule membrane protein 2,Lamp2)等。血小板活化后这些黏附因子也会相应激活表达,可作为指标用于临床血液相关疾病的筛查,同时也可作为凝血功能材料筛选的指标。

PF4对造血干/祖细胞系KG1a总粘附性、粘附分子表达及细胞骨架蛋白聚合的作用

目的研究ＰＦ４单用及与ＩＬ－３联合应用对造血干／祖细胞系ＫＧ１ａ总粘附性、粘附分子表达及细胞骨架蛋白聚合的影响。方法采用结晶紫染色、免疫标记流式细胞仪测定、ＭＴＴ、荧光分光光度等方法。结果１．单用１００ｎｇ／ｍｌ ＰＦ４作用于ＫＧ１ａ细胞时，ＫＧ１ａ细胞总粘附性增长８０％，单用２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－３作用于ＫＧ１ａ细胞时，ＫＧ１ａ细胞总粘附性增长９６％，ＰＦ４与ＩＬ－３联合作用于ＫＧ１ａ细胞时，ＫＧ１ａ细胞总粘附性增长９７％。２．ＰＦ４作用于ＫＧ１ａ后，ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ表达分别增加了２１％、２２％、１７％、１８％，较前均有显著性（Ｐ＜０．０５＝，而ＰＦ４对ＫＧ１ａ细胞的ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｅ表达无影响；ＰＦ４与ＩＬ－３联合作用于ＫＧ１ａ时，ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ表达并没出现互相促进作用。３．分别用抗ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ等单克隆抗体阻断ＫＧ１ａ粘附分子时，对ＰＦ４引起的ＫＧ１ａ粘附性分别下调了３９％、４３％、３４％、３８％。４．ＰＦ４、ＩＬ－３作用ＫＧ１ａ细胞时，能够引起ＫＧ１ａ细胞肌动蛋白的聚合。结论ＰＦ４可刺激早期的白血病性造血干／祖?

辛伐他汀对肺纤维化鼠肺组织血管新生及VEGF和PF4基因表达的影响

目的:观察辛伐他汀对肺纤维化大鼠肺组织血管新生及部分调控基因表达的影响。方法:选取SD大鼠96只,随机分为4组:空白组(A组)、模型组(B组)、泼尼松组(C组)、辛伐他汀组(D组),建模后,于7、14、28 d随机处死8只,取肺组织为检测标本,消化法测定羟脯氨酸(HYP),免疫组化法测血管新生微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)、血小板第四因子(PF4)蛋白的表达,RT-PCR法测VEGF及PF4mRNA表达。结果:(1)C、D组HYP较B组减轻(均P<0.01);(2)B、C、D组MVD及VEGF表达高于A组,PF4表达低于A组(均P<0.01);D组MVD及VEGF表达低于B组,PF4表达高于B组(均P<0.05)。结论:辛伐他汀有改善纤维化作用,其机制可能与其调节肺组织内VEGF及PF4表达、抑制病理性血管新生有关。

TSPmRNA表达、血浆PF4水平与甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的关系

目的探讨血小板反应素(TSP)mRNA表达、血浆血小板第四因子(PF4)水平与甲状腺乳头状癌(PTC)颈部淋巴结转移的关系。方法应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测40例PTC癌组织和10例癌旁正常组织TSP1和TSP2mRNA的表达,并用酶标记免疫分析法(ELISA)测定40例PTC患者、20例健康体检者(对照组)的血浆PF4水平。结果(1)PTC癌组织TSP1mRNA、TSP2mRNA阳性表达率分别为45%、47.5%,它们均明显低于正常组织(80%)(P<0.01),而且TSP1mRNA、TSP2mRNA阳性表达PTC组的颈部淋巴结转移率均明显低于TSP1mRNA、TSP2mRNA阴性表达PTC组(33.3%vs 90.9%、42.1%vs 85.7%,P<0.01)。(2)正常对照组、无淋巴结转移的PTC组和伴淋巴结转移的PTC组间的PF4血浆浓度呈线性递减趋势,其中无淋巴结转移组的PF4血浆浓度(2.96±0.21 ng/ml)高于转移组(0.98±0.17 ng/ml)(P<0.05)。(3)TSP1mRNA、TSP2mRNA阳性表达PTC组的血浆PF4水平分别明显高于TSP1mRNA、TSP2mRNA阴性表达组(2.36±0.91 ng/ml vs 1.11±0.60 ng/ml,2.15±1.00 ng/ml vs 1.23±0.72 ng/ml)(P<0.01)。结论缺乏TSP1mRNA、TSP2mRNA表达及血浆低水平的PF4诸因素可能为促进PTC发生颈部淋巴结转移起到了推波助澜的作用,TSP1、TSP2与PF4在抑制PTC颈部淋巴结转移中起着互相协同的作用。

长期低温下βTG和PF4ELISA试剂盒性能的再分析

长期低温下βＴＧ和ＰＦ４ＥＬＩＳＡ试剂盒性能的再分析上海第二医科大学病理生理教研室上海血液学研究所（２０００２５）张启良β血小板球蛋白（βＴＧ）和血小板第４因子（ＰＦ４）血浆浓度的测定迄今仍是估计体内血小板活化程度较敏感的指标。我们建立的βＴＧ和ＰＦ...

血栓前状态指标与不明原因复发性流产的相关性研究

目的检测凝血、纤溶系统、血小板活化指标,探讨血栓前状态指标在不明原因复发性流产(URSA)临床诊断中的意义。方法选取URSA患者108例及健康体检人员100例,采用凝固法检测PT、APTT、纤维蛋白原(Fg);采用免疫比浊法检测D-二聚体(D-D);采用ELISA法检测组织纤溶酶原激活物(t PA)、纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)、血小板第四因子(PF4)、P选择素,并对检测结果进行统计分析。结果与对照组比较,URSA组Fg、D-D、t PA、PAI-1、PF4和P选择素水平均增高(均P<0.05);流产次数≥3次组Fg、D-D、t PA、PAI-1、PF4和P选择素水平高于流产次数2次组(均P<0.05);早期流产组PF4和P选择素水平高于晚期流产组(均P<0.05)。结论检测不明原因复发性流产患者Fg、D-D、t PA、PAI-1、PF4、P选择素等指标,采取预防治疗措施,对改善妊娠结局具有重要的意义。

腺病毒介导的PF4cDNA对HUVEC的抑制作用

目的 :用一种简便方法构建了含血小板第四因子 (PF4)cDNA的腺病毒载体 ,体外检测其抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)活性。方法 :将含有信号肽的PF4cDNA克隆至腺病毒穿梭质粒 pAdshuttle CMV中 ,形成转移质粒pAdshuttle/PF4,将之用PmeI酶切线性化后与腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ5 183 ,抽提并鉴定含目的基因的重组体质粒 ,PacI酶切后用磷酸钙共沉淀方法转染HEK2 93细胞 ,包装成重组腺病毒AdPF4。经鉴定后扩增、纯化、测病毒滴度及感染率。直接转导HUVEC检测表达蛋白活性。结果 :经鉴定此病毒DNA有PF4cDNA插入 ,病毒滴度可达 1× 10 1 0 pfu/ml,转导AdPF4病毒后的人脐静脉内皮细胞较对照含空载体病毒增殖减低 5 3 %。结论 :实验证实腺病毒介导的PF4cDNA体外具有抑制内皮细胞增殖活性。

血浆βTG、PF_4在糖尿病微血管病变中的初步研究

通过酶联免疫吸附法测定10名正常人和48名Ⅱ型糖尿病患者血浆β-血小板球蛋白（βTG）和血小板第四因子（PF4_）的水平，来观察和探讨糖尿病患者体内血小板活性状态，以及与糖尿病激血管病变发病机理的关系。研究发现糖尿病患者血浆βTG水平显著高于正常人（P＜0.01），而血浆PF_4水平在糖尿病患者和正常人中无显著差异（P＞0.05），伴或不伴视网膜病变的糖尿病组间血浆βTG、PF_4水平也无显著差异（P值分别＞0．5、＞0．05）。糖尿病患者血浆β水平与空腹血糖浓度之间呈正相关（r=+0.48,P＜0.05）。提示糖尿病患者体内血小板活性升高，可能是由精代谢紊乱所致；是糖尿病做血管病变发生的原因而并非结果。