血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ在脑梗塞中的临床意义

目的探讨脑梗塞患者外周血血小板胶原受体糖蛋白VI和CD62P含量以及临床意义。方法用流式细胞仪检测脑梗塞患者活化血小板标志物GPVI和CD62P,并与对照组比较。结果脑梗塞患者血小板表面表达GPVI和CD62P的荧光强度分别为20.52±5.80和31.52±15.67,均明显高于正常对照纽(P<0.01)。结论脑梗塞患者血栓的形成与血小板的活化密切相关,GPVI和CD62P的检测可以作为脑梗塞早期诊断的一项较特异指标。

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GPⅥ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTAResin纯化后复性;使用Westernblot方法鉴定重组蛋白性质。结果PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究

为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂,利用基因重 组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GP Ⅵ,转化大肠杆茵BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA Resin纯化、复性;使用Western blot方 法鉴定重组蛋白性质;采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力。结果表明,经测序证明PCR扩增产物与 GPⅥ胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后 出现新的相对分子量32 kD蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta- His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合;胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能。结论:正确构建了GPⅥ 表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性。

血小板胶原受体GPⅥ的研究进展

血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)作为血小板胶原受体,主要参与血小板与胶原粘附后的信号转导和血小板活化过程,并最终引起血小板聚集和促凝活性表达。GPⅥ的研究已受重视并有望成为抗栓治疗的新靶点。本文就GPⅥ有关进展进行综述。

血小板膜糖蛋白与胶原受体

血小板在止血、凝血反应中起重要作用,本文就粘附蛋白和血小板激动剂的胶原与血小板膜受体的相互作用进行了总结,重点介绍了三种主要胶原受体GPⅠa/Ⅱa、GPⅣ、GPⅥ。

检测脑梗死患者血小板膜表面P-选择素与纤维蛋白原受体的临床意义

目的探讨脑梗死急性期血小板活化在血栓形成中的作用。方法采用流式细胞术检测脑梗死患者全血标本血小板膜表面P-选择素(CD62P)与纤维蛋白原受体(FIB-R)的表达。结果与正常对照组比较,脑血栓形成组(例及腔隙性梗死组(例于发病后43)47)1～3d内CD62P与FIB-R的表达(阳性细胞百分率)均有显著性增高。脑血栓形成组FIB-R表达增加明显高于腔隙性梗死组,至病程第日7FIB-R表达增高仍有显著性差异。两患者组中发病前服用阿司匹林与否未见对检测结果有显著影响。结论脑血栓形成与腔隙性梗死急性期均存在血小板活化;阿司匹林对血小板膜表面表达CD62P及FIB-R无影响。

丝素胶原蛋白复合支架联合富血小板血浆修复皮肤损伤

背景:胶原与丝素蛋白复合构建的组织工程支架,在皮肤、神经、血管、骨、软骨等组织工程领域应用广泛。富血小板血浆是血液经过2次离心获得的血小板浓缩物,含有多种组织修复需要的生长因子,可促进组织再生与创面愈合。目的:观察丝素胶原蛋白支架复合富血小板血浆在皮肤创面愈合中的作用。方法:分别制备丝素胶原蛋白支架、SD大鼠富血小板血浆。取8周龄SD大鼠48只,每只背部制作2个直径2 cm的全层皮肤缺损创面,分4组处理:空白组缺损处注射生理盐水,单纯支架组缺损处植入丝素胶原蛋白复合支架,富血小板血浆组创缘注射同种异体富血小板血浆,联合组缺损处植入丝素胶原蛋白复合支架+创缘注射同种异体富血小板血浆,每组12只。造模后检测创面愈合率、创面炎症因子水平、创面组织学观察及相关蛋白表达。结果与结论:①联合组造模后第7,14天的创面愈合率大于空白组、单纯支架组、富血小板血浆组(P<0.05)。②联合组造模后第7,14天的肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平均低于空白组、单纯支架组、富血小板血浆组(P<0.05)。③造模后第14天的苏木精-伊红及Masson染色显示,空白组缺损处仅见少量的新生毛细血管与混乱排列的胶原纤维组织;其他3组可见大量的新生毛细血管与腺体样组织,胶原纤维排列较规律,其中以联合组新生血管最多、腺体样组织层次更清晰、胶原纤维排列更规则。免疫组化染色显示,空白组、单纯支架组、富血小板血浆组CD31+细胞密度少于联合组(P<0.05)。④Western blot检测显示,相较于空白组、单纯支架组、富血小板血浆组,联合组创面Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶抑制剂1的蛋白表达升高(P<0.05),基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9蛋白表达降低(P<0.05)。⑤结果表明,丝素胶原蛋白支架复合富血小板血浆可通过抑制炎症反应、增加微血管密度、调节细胞外基质的代谢平衡来促进皮肤创面愈合。

重型肝炎患者肝组织Ⅰ型胶原和血小板衍生生长因子-1 mRNA的表达及Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达的研究

目的:了解重型病毒性肝炎患者肝组织Ⅰ型胶原mRNA、血小板衍生生长因子-1(PDGF-1)mRAN及Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达情况,探讨重型病毒性肝炎肝纤维化发生的分子机制。方法:重型病毒性肝炎肝组织标本20例。正常肝组织6人份,用原位杂交检测肝组织Ⅰ型胶原和PDGF-1mRNA的表达,用免疫组化法观察肝组织Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的沉积、分布和含量,用天狼红染色观察肝组织总的胶原含量。结果:与正常肝组织相比,重肝患者的肝组织Ⅰ型胶原和PDGF-1mRNA的表达显著增加,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白大量沉积,PDGF-1mRNA的表达与Ⅰ型胶原mRNA的表达呈显著正相关,和总的胶原含量,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达也呈显著性正相关,Ⅰ型胶原mRNA的表达和Ⅰ型胶原蛋白的表达呈显著正相关。结论:重型肝炎患者PDGF-1mRNA与Ⅰ型胶原mRNA表达的增加是导致肝组织胶原蛋白合成增加,重型肝炎发展成肝纤维化乃至肝硬化的原因之一。

冠心病患者纤维蛋白原浓度与血小板膜糖蛋白受体活性表达

目的:探讨高浓度的纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)对冠心病患者血小板膜糖蛋白受体活性表达的作用。方法:对60名诊为急性冠脉综合征的患者检测血小板CD62PE恬性,后进行冠状动脉造影,图像分析后根据冠状动脉损害程度评分。所有患者检测FIB、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)和高密度脂蛋白(HDL-c)等。在控制其他影响因素后,分析FIB与血小板CD62PE活性及冠状动脉危险评分的定性和定量关系。结果:以FIB浓度正常值400mg/dL为分界点,将所有入组患者分为正常组和异常组两组,分析两组间的血小板CD62PE活性表达及冠状动脉病变程度,发现两组间差别明显。偏相关分析在控制了其它危险因素后,显示FIB浓度与CD62PE活性表达及冠状动脉病变程度仍呈相关性;进一步进行多元逐步回归分析,在逐步去除高血压、血糖、血脂如TG,CHO,LDL-c等因素的作用后,发现FIB浓度和CD62PE活性表达对冠状动脉的病变程度的作用有显著性。结论:高浓度的FIB可促进血小板糖蛋白CD62PE受体的表达,从而促进血小板活化,并且这可能是FIB促进冠状动脉病变的重要中间环节。

血小板衍化生长因子对血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 (PDGF)对培养的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 :采用培养的兔动脉 VSMC,应用 3H- Td R的 3H-脯氨酸掺入方法 ,观察 PDGF- BB对兔 VSMC DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果 :PDGF- BB可促进处于静止状态的兔 VSMC DNA及胶原蛋白的合成 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg/ L 的浓度时 DNA及胶原蛋白的合成达到高峰 ,DNA及胶原蛋白分别处于 36 h和 48h合成最为显著。结论 :PDGF- BB可明显促进培养的 VSMC增殖及胶原蛋白的合成。

血液滤过对重型肝炎患者血小板衍生生长因子及Ⅲ型前胶原肽、层粘蛋白、透明质酸影响的研究

目的 通过人工肝支持治疗 (ALSS)重型肝炎 ,探讨各项检验指标含量变化的临床价值。方法 治疗组 4 0例予基础综合治疗的同时采取血液滤过 ,对照组 4 0例仅予基础综合治疗 ,检测两组患者的血清血小板衍生生长因子 (PDGF)、Ⅲ型前胶原肽 (PⅢP)、层粘蛋白 (LN)、透明质酸(HA)的水平 ,并对两组结果作比较。结果 治疗组早、中期患者治疗前血清PDGF为 (12 2 84 5 0± 7882 0 0 ) pg/L ,PⅢP为 (2 6 0 6 2± 92 74 )pg/L ,LN为 (32 8 4 6± 2 2 0 4 6 ) pg/L ,HA为 (6 80 80±2 34 80 ) pg/L ;治疗后分别为 (74 92 5 0± 4 779 6 0 )pg/L ,(16 4 32± 5 2 78) pg/L ,(2 4 8 32±14 8 94 )pg/L ,(4 4 6 6 8± 15 8 38) pg/L ,前后比较均有显著性差异 (P <0 0 1) ,其中血清PDGF更加明显低于置换前含量 (P <0 0 1) ,且随着病情的好转PDGF继续下降。晚期患者治疗前后无明显变化。滤过后PDGF下降与PⅢP、LN、HA下降呈正相关 (r =0 70、r =0 5 6、r =0 6 7)。对照组治疗前后PDGF、PⅢP、LN、HA含量无显著变化。结论 血液滤过可使细胞因子PDGF、PⅢP、LN、HA下降 ,对减轻肝细胞的损伤、缓解肝纤维化的进程有积极作用。

血小板衍化生长因子对人牙髓成纤维细胞DNA和胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 (platelet-derivedgrowthfactor ,PDGF)对人牙髓成纤维细胞(humandentalpulpfibroblast,HDPF )DNA合成和胶原蛋白合成的影响。 方法 :应用3 H -TdR和3 H -脯氨酸掺入方法 ,观察PDGF对体外培养的HDPFDNA合成和胶原蛋白合成的情况。结果 :2 0～ 6 0ng/mLPDGF可明显促进HDPFDNA的合成 ,4 0ng/mL浓度使细胞DNA合成在 36h达最大值 ;对细胞的胶原蛋白合成无明显促进作用。结论 :PDGF明显促进HDPFDNA的合成 。

重症病毒性肝炎肝组织胶原蛋白和血小板衍生生长因子-1的表达

目的 了解重症病毒性肝炎患者肝组织I型前胶原mRNA、血小板衍生生长因子-1(PDGF-1)mRNA及Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达情况,探讨重症病毒性肝炎纤维化发生的分子机制。方法 将重症病毒性肝炎肝组织标本20例,非肝病患者肝组织6例,用原位杂交法检测肝组织I型前胶原和PDGF-1 mRNA的表达,用免疫组化法观察肝组织Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的沉积、分布和含量,用天狼红染色观察肝组织总的胶原含量。结果 与正常肝组织相比,重症病毒性肝炎患者的肝组织Ⅰ型前胶原和PDGF-1 mRNA的表达显著增加,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白大量沉积。PDGF-1mRNA的表达与Ⅰ型前胶原mRNA的表达呈显著正相关,和总的胶原含量,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达也呈显著正相关,Ⅰ型前胶原mRNA的表达和Ⅰ型胶原蛋白的表达呈显著正相关。结论 PDGF-1 mRNA与Ⅰ型前胶原mRNA表达的增加是导致肝组织胶原蛋白合成增加,重症病毒性肝炎发展成肝纤维化乃至肝硬化的原因之一。

促血小板生成素受体——原癌基因c-Mpl蛋白的研究进展

促血小板生成素(TPO)专一性促进巨核细胞的生长发育和血小板的生成,其生物学功能由其受体c-Mpl介导。c-Mpl的发现源于其同源对应物v-Mpl的克隆。c-Mpl是位于造血干细胞、巨核细胞、血小板表面的跨膜蛋白。其表达专一而保守。c-Mpl属于造血因子受体超家族,保守的造血功能区决定结合TPO的能力,其膜内结构具有一些与传导细胞生长、增殖和分化信号相关的保守结构。TPO的信号传导途径涉及c-Mpl自身及部分相关蛋白的磷酸化,除了Jak-STAT途径和Ras途径外,TPO可能还激活其他与c-Cbl有关的途径。

IgA肾病肾间质纤维化患者血清胶原蛋白Ⅰ、血小板衍生生长因子、转化生长因子-β1水平变化及意义

目的探讨IgA肾病肾间质纤维化患者血清胶原蛋白-Ⅰ(Col-Ⅰ)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平变化及意义。方法选取90例IgA肾病肾间质纤维化患者为观察组,根据牛津分型又分为轻度组、中度组和重度组,每组30例;另选取60例肾小球微小病变患者为对照组,60例健康体检者为健康组。检测各组患者血清β2微球蛋白(β2-MG)、血肌酐(Scr)、血尿酸(UA)、胱抑素C(CysC)水平及血清Co1-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平,采用Pearson相关性分析观察各指标间相关性。结果观察组患者血清β2-MG、Scr、UA、CysC水平显著高于对照组和健康组,且随着肾间质纤维化程度的加重,观察组患者血清β2-MG、Scr、UA、CysC水平也显著增高(P均<0.05)。观察组患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平均显著高于对照组和健康组,且随着肾间质纤维化程度的加重,观察组患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平也显著升高(P均<0.05)。观察组患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平与肾功能指标β2-MG、Scr、UA、CysC水平均呈显著正相关(P<0.05)。结论 IgA肾病肾间质纤维化患者血清Co1-Ⅰ、PDGF、TGF-β1的表达显著增加,其水平与患者肾功能损伤和肾间质纤维化程度有关。

血小板源生长因子对人血管内皮细胞DNA及胶原蛋白合成的影响

为研究血小板源生长因子对血管内皮细胞增殖及胶原蛋白合成的影响 ,采用培养的人脐静脉内皮细胞 ,应用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷和氚标记脯氨酸掺入方法 ,观察血小板源生长因子BB对人血管内皮细胞DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果发现 ,血小板源生长因子BB可促进处于静止状态的人血管内皮细胞DNA合成 ,并呈现出明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg L时DNA的合成达到高峰 ,DNA于血小板源生长因子BB作用 48h时合成最为显著。血小板源生长因子BB对人血管内皮细胞胶原蛋白合成无明显促进作用。结果表明 ,血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管内皮细胞DNA合成 。

胶原蛋白与浓缩血小板混合物注射治疗牙龈乳头黑三角效果观察

目的观察胶原蛋白与浓缩血小板混合物注射治疗牙龈乳头黑三角的效果。方法牙龈乳头黑三角患者164例,随机分为混合组与对照组各82例。对照组给予胶原蛋白注射治疗,混合组给予胶原蛋白与浓缩血小板混合物注射治疗。治疗前后测定两组牙周相关指标[临床附着水平(CAL)、探诊深度(PD)]、牙龈相关指标[角化龈宽度(KTW)与牙龈厚度(GT)],测量黑三角面积与龈乳头高度;计算治疗后6个月根面覆盖百分比与完全根面覆盖率。结果两组治疗后CAL、PD低于治疗前,且混合组治疗后低于对照组(P均<0.05)。两组治疗后KTW、GT高于治疗前,且混合组治疗后高于对照组(P均<0.05)。两组治疗后黑三角面积低于治疗前,龈乳头高度高于治疗前(P均<0.05);混合组治疗后黑三角面积低于对照组,龈乳头高度高于对照组(P均<0.05)。混合组治疗后6个月根面覆盖百分比及完全根面覆盖率高于对照组(P均<0.05)。结论胶原蛋白与浓缩血小板混合物注射治疗牙龈乳头黑三角能改善患者的牙周与牙龈状况,缩小黑三角面积,提高龈乳头高度,加快骨组织形成,疗效优于胶原蛋白单独注射。

血流波动在胶原蛋白Ⅲ黏附表面对血小板黏附的影响

目的观察血流波动状态对血小板黏附功能的影响。方法将血液在剪切率300S-1下流动10秒和在剪切率1000S-1时流动10秒之间交替进行,获得血流波动状态;血液分别保持在剪切率300S-1和1000S-1流动作为稳定血流;并应用单向灌流小室进行灌流,以胶原蛋白Ⅲ作为黏附表面,观察血小板黏附率和形态学变化。结果血液灌流5分钟后,波动状态下的血小板黏附率比剪切率为300S-1时和1000S-1时明显增高(均P<0.001),黏附血小板的形态成团块状分布。结论血流波动能够增加血小板对胶原蛋白的黏附功能。

流式细胞术测定血小板纤维蛋白原受体活性

正常人周围血中血小板表面纤维蛋白原活化率很低(2％左右),心脑血管疾病患者却明显增加,ADP刺激后,血小板表面纤维蛋白原受体活性明显增高。

富血小板血浆与胶原蛋白海绵联合用于创面修复的研究进展

创面的形成原因与发病机制比较复杂,创面的愈合又是通过细胞因子和生长因子等多种因子共同作用的过程,愈合所需时间较长,严重时还会引发感染。创面迁延不愈会给患者的生活和工作造成不良影响,同时还会增加其经济负担。临床上修复创面的方法除了包括手术治疗外,还会使用外源性生长因子以及新型生物材料。近年来富血小板血浆(PRP)和胶原蛋白海绵在创面修复中被广泛应用。本文就PRP与胶原蛋白海绵联合用于创面修复的研究进展进行综述。