血小板血型抗原HPA-2在CHO细胞中的表达

目的 在 CHO细胞中表达血小板血型抗原 HPA- 2 a和 2 b。方法 从人巨核细胞系 MO7e中采用 RT- PCR方法扩增出血小板血型抗原 HPA- 2抗原位点所在的血小板糖蛋白 b氨基端 30 2个氨基酸的 c DNA,并将第 4 34位的 C突变为T,使得相应的氨基酸苏氨酸 (Thr)突变为蛋氨酸 (Met)。将 HPA- 2 a和 2 b基因插入真核表达质粒 pc DNA3.1(+) ,将重组质粒 p HPA2 a和 p HPA2 b以脂质体介导的转染方法导入 CHO细胞中 ,以 G4 18筛选获得抗性克隆 ,表达产物用瑞斯托菌素诱导血小板凝集试验的抑制作用测定活性。结果 获得了人血小板血型抗原 HPA- 2 a和 HPA- 2 b的基因 ,并在 CHO细胞中进行了表达。表达产物具有 v WF结合功能。结论 成功地表达了人血小板血型抗原 HPA- 2 a和 HPA- 2 b,对进一步研究血型抗原特定表位及功能。