金丝桃苷调控胰岛素受体底物1/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对糖尿病肾病大鼠肾组织损伤的保护作用

目的 探索金丝桃苷对糖尿病肾病(DN)大鼠胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,及其对肾组织损伤的保护作用。方法 用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立DN大鼠模型,并随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组12只;另取12只SD大鼠设为假手术组。低、中、高剂量实验组按10 mL·kg^(-1)的剂量分别灌胃给予12.5,25.0和50.0 g·kg^(-1)金丝桃苷,qd;对照组按10 mL·kg^(-1)的剂量灌胃给予7.0 mg·mL^(-1)二甲双胍溶液,qd;假手术组与模型组大鼠均灌胃给予等量0.9%NaCl。6组大鼠连续给药21 d。检测大鼠血糖、尿微量白蛋白(UMA)水平,用蛋白质印迹法检测肾组织IRS-1/PI3K/Akt通路蛋白的表达水平。结果 低、高剂量实验组和对照组、模型组、假手术组的血糖分别为(21.04±2.65),(5.86±0.82),(5.72±0.93),(28.23±3.17)和(5.12±0.73)mmol·L^(-1),UMA分别为(100.76±20.49),(10.02±1.71),(9.97±1.78),(145.82±32.07)和(8.26±1.13)mmol·L^(-1),p-PI3K/PI3K值分别为0.32±0.05,0.97±0.17,0.96±0.16,0.10±0.02和0.99±0.19,p-Akt/Akt值分别为0.27±0.04,0.84±0.14,0.83±0.15,0.07±0.02和0.87±0.13,p-IRS-1/IRS-1值分别为0.76±0.15,0.18±0.05,0.17±0.04,1.02±0.23和0.12±0.02。低、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 金丝桃苷可降低IRS-1磷酸化水平,激活PI3K/Akt通路,减轻DN大鼠肾组织病理损伤。

骨化三醇通过B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB通路抑制大鼠高原肺水肿的发生

目的 :探讨骨化三醇通过B细胞受体/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)通路抑制大鼠高原肺水肿的发生及其机制。方法 :雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧+骨化三醇组(0.252μg/kg),连续灌胃给药5 d后,除常氧组外,其余2组均置于模拟海拔6 000 m的低压氧舱内低氧胁迫48h,建立高原肺水肿大鼠模型。干湿比重法测定肺含水量;H-E染色观察大鼠肺组织病理变化,并进行炎症评分;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率;ELISA检测肺组织B细胞激活因子(BAFF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量;免疫荧光染色观察肺组织CD21和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;免疫印迹检测肺组织PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)的表达。结果 :与常氧组比较,低氧组大鼠肺组织见轻微肺泡隔增宽,炎症细胞浸润;肺含水量升高,肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及CD21、p-PI3K、p-AKT表达明显升高;肺组织IL-4、IL-10含量及IκBα、p-IκBα表达明显降低。与低氧组比较,低氧+骨化三醇组炎症细胞浸润减轻;肺含水量降低、肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及CD21、p-PI3K、p-AKT表达明显降低;肺组织IL-4、IL-10含量及IκBα、p-IκBα表达明显升高。结论 :骨化三醇可抑制高原肺水肿炎症反应,其作用机制可能与抑制B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB信号通路有关。

抑制糖尿病大鼠PI3K/Akt信号通路对其氧化应激水平及血管内皮生长因子的影响

目的探讨抑制糖尿病大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对其氧化应激水平及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法36只雄性SPF级SD大鼠按照随机数字表法平分为3组:正常组、模型组与LY294002组。模型组与LY294002组均建立糖尿病大鼠模型,然后分别给予5%二甲基亚砜与溶于5%二甲基亚砜中的LY2940023 mg/kg治疗,正常组不进行建模,在相同时间内给予5%二甲基亚砜溶液治疗。3组连续给药7 d。记录大鼠摄食量、饮水量、尿量、体重、血糖以及超氧化物歧化酶、丙二醛含量、VEGF表达变化情况。结果所有大鼠都未出现死亡情况。模型组与LY294002组大鼠的摄食量、饮水量、尿量均高于正常组,体重低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05),LY294002组大鼠的摄食量、饮水量、尿量均低于模型组,体重高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠的血糖高于正常组,LY294002组大鼠血糖低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组与LY294002组大鼠的血清超氧化物歧化酶含量低于正常组,丙二醛含量和肝脏VEGF、PI3K蛋白相对表达水平高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);LY294002组大鼠的血清超氧化物歧化酶含量高于模型组,丙二醛含量和肝脏VEGF、PI3K蛋白相对表达水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制PI3K/Akt信号通路的激活可改善糖尿病大鼠氧化应激反应水平,并抑制VEGF的表达,从而可改善大鼠的糖尿病症状与降低血糖水平。

血管内皮生长因子与磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B信号传导通路在早产儿视网膜病变中的作用

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可在体内诱导血管新生。磷脂酰肌醇3．激酶／蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase／protein kinase B，PDK—AKt）信号通路广泛存在细胞中，在细胞生长、增殖、分化调节、血管新生等过程中发挥着重要作用。PDK—AKt信号通路可通过缺氧诱导因子-1、胰岛素样生长因子-Ⅰ、一氧化氮合酶、环氧化酶等多种途径激活VEGF的表达。研究显示VEGF、PDK．AKt信号通路在早产儿视网膜病变的发病机制中起重要作用。

蝎毒注射液对AD模型大鼠空间认知障碍改善作用及对海马IGF-1/PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨蝎毒注射液(SVI)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的空间认知能力和海马组织中胰岛素样生长因子(IGF)-1/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路表达的影响,为探索SVI治疗AD作用机制提供依据。方法以双侧海马注射β-淀粉样蛋白(Aβ)25~35制备AD模型大鼠,分为假手术对照组、AD模型组、SVI低、中、高剂量组,每组12只。SVI低、中、高剂量组于AD造模后给予1次/d腹腔注射SVI(5、10、20μg/kg),1次/d,连续10 d。治疗结束后用Morris水迷宫测试各组空间认知功能,选取SVI中剂量组作为SVI干预组,取各组海马组织,免疫组织化学法检测IGF-1含量,逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)法检测IGF-1、PI3K和Akt的mRNA表达,Western印迹检测PI3K、Akt、p-Akt(Ser473)蛋白表达情况。结果与假手术对照组相比,AD模型组空间认知功能受损,逃避潜伏期延长,平台穿越次数和目标象限停留时间显著减少(P<0.01)。与AD模型组相比,SVI低、中、高剂量组逃避潜伏期显著缩短,平台穿越次数和目标象限停留时间显著增加,认知功能得到明显改善(P<0.01)。与假手术组相比,AD模型组海马中IGF-1、PI3K、Akt mRNA和PI3K、Akt、p-Akt(ser473)蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与AD模型组相比,SVI干预组mRNA水平及PI3K、p-Akt(ser473)、p-Akt/Akt蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论SVI能够改善AD模型大鼠的空间学习记忆障碍,可能与促进海马组织中IGF1表达、激活PI3K/Akt信号通路有关。

弥漫大B细胞淋巴瘤中铁死亡相关基因的表达及其与免疫细胞和信号通路的关系

目的通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中铁死亡相关基因的表达及其与程序性死亡受体配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)和免疫细胞的关系,为DLBCL的治疗提供新的靶标。方法通过TCGA数据库查找获得22个铁死亡相关基因。从TCGA数据库获取48例DLBCL(DLBCL组)及54例反应性淋巴结增生患者(对照组)淋巴结标本的铁死亡相关基因以及PD-L1的表达数据。使用Wilcoxon秩和检验进行组间差异性表达分析。基因表达相关性分析采用Spearman相关性分析。采用R软件包pheatmap分析DLBCL中铁死亡相关基因表达与免疫细胞的相关性。采用R软件GSVA包分析铁死亡相关基因表达与磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol 3 kinase-protein kinase B-mammalian target of rapamycin,PI3K-Akt-mTOR)信号通路的相关性。结果DLBCL中周期素依赖性激酶抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)、70 kDa热休克蛋白5(heat shock 70 kDa protein 5,HSPA5)、内质膜蛋白复合体亚基2(endoplasmic membrane protein complex subunit 2,EMC2)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7,member 11,SLC7A11)、金属硫蛋白1G(metallothionein 1G,MT1G)、热休克蛋白B1(heat shock protein B1,HSPB1)、谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase4,GPX4)、范可尼贫血互补群D2(Fanconi anemia complementary group D2,FANCD2)、柠檬酸合成酶(citrate synthase,CS)、CDGSH铁硫结构域1(CDGSH iron sulfur domain 1,CISD1)、法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1)、SLC1A5、转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)、核糖体蛋白L8(ribosomal protein L8,RPL8)、核受体共激活因子4(nuclear receptor coativator 4,NCOA4)、二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP4)和花生四烯酸15脂氧合酶(arachidonate-15-lipoxygenase,ALOX15)基因表达均上调(均P<0.05)。免疫细胞相关分析显示,铁死亡相关基因可激活体内巨噬细胞M1(P<0.05)。DLBCL中长链脂酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、CDKN1A、DPP4、EMC2、谷氨酰胺酶2(glutaminase 2,GLS2)、HSPA5、溶血卵磷脂酰基转移酶3(lysophosphatidylcholine acyltransferase 3,LPCAT3)、MT1G、NCOA4、红细胞衍生核因子2样蛋白2(nuclear factor erythroid 2-like-2,NFE2L2)、精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1,SAT1)、SLC7A11和TFRC这些铁死亡相关基因的表达均与PD-L1表达呈正相关(均r>0.4,均P<0.05)。铁死亡相关基因LPCAT3、NCOA4和TFRC的表达均与PI3K-AktmTOR通路呈正相关(均r>0.4,均P<0.05)。结论多数铁死亡相关基因在DLBCL组织中高表达,且与PD-L1、免疫浸润及PI3K-Akt-mTOR通路有关。

裸花紫珠调控IGF-1/PI3K/Akt信号通路对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合的影响

目的 探讨裸花紫珠调控胰岛素样生长因子(IGF)-1/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠创面愈合的影响。方法 采用高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病(DM)模型大鼠,再用DM大鼠和正常大鼠构建溃疡模型,可分为正常组、模型组、凡士林纱布组、裸花紫珠组,每组12只。正常组和模型组均用生理盐水纱布外敷,凡士林纱布组(10 mg/kg),裸花紫珠组(20 mg/kg)。采用Photoshop软件测算大鼠创面愈合率,光学显微镜观察创缘组织结构变化。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测创面组织IGF-1、IGF-1受体(IGF-1R)、PI3K、Akt、一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、VEGF受体(VEGFR)2的基因表达水平;并用Western印迹检测各组组织中IGF-1、IGF-1R、PI3K、Akt、eNOS、VEGF、VEGFR2蛋白表达水平。结果 治疗后第3、7天,与模型组比较,凡士林纱布组、裸花紫珠组创面愈合率显著升高,且治疗第7天裸花紫珠组和正常组显著高于凡士林纱布组(P<0.05);病理结果显示,除模型组外,各组毛细血管、炎症细胞、纤维细胞生长均明显增加;RT-PCR检测提示,正常组、凡士林纱布组及裸花紫珠组创面组织中IGF-1、IGF-1R、PI3K、Akt、eNOS、VEGF、VEGFR2 mRNA及蛋白表达均较模型组明显升高,且正常组及裸花紫珠组明显高于凡士林纱布组(P<0.05)。结论 裸花紫珠能有效促进DFU大鼠创面愈合,并可能通过IGF-1/PI3K/Akt信号通路发挥治疗作用。

血府逐瘀合剂对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探究血府逐瘀合剂对血小板衍生生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/糖元合成酶激酶3β/β-连环蛋白(PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin)信号通路的影响。方法:利用重组鼠PDGF-BB体外刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7R5诱导增殖、迁移模型,分为6组:对照组、PDGF-BB组、低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组,CCK-8法检测A7R5细胞增殖活力;流式细胞术检测A7R5细胞周期;细胞划痕实验检测A7R5细胞迁移情况;免疫印迹检测A7R5细胞增殖、迁移相关蛋白及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白。结果:与对照组比较,PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少(P<0.05);与PDGF-BB组比较,低、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著减少,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著增加,且高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组优于低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组(P<0.05);与高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组比较,PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少(P<0.05)。结论:血府逐瘀合剂可抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移,可能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路而实现。

基于PDGFR-β/PI3K/AKT信号通路探讨富血小板纤维蛋白修复大鼠牙槽骨缺损的作用机制

目的:基于血小板衍生生长因子受体-β/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PDGFR-β/PI3K/AKT)信号通路探讨改良型/注射型富血小板纤维蛋白(A-PRF、i-PRF)联合骨替代材料(Bio-Oss)修复大鼠牙槽骨缺损的作用机制。方法:大鼠自体取血获得A-PRF、i-PRF,制备A-PRF/Bio-Oss、A-PRF/i-PRF/Bio-Oss复合物。大鼠分为Control组、A-PRF组、A-PRF/Bio-Oss组、A-PRF/i-PRF/Bio-Oss组,构建大鼠牙槽骨缺损模型,A-PRF组、A-PRF/Bio-Oss组、A-PRF/i-PRF/Bio-Oss组缺损处分别植入A-PRF、A-PRF/Bio-Oss、A-PRF/i-PRF/Bio-Oss复合物。于1个月后处死大鼠,并进行指标检测。Micro-CT、苏木精-伊红(HE)染色检测新骨形成情况;免疫组化染色、RT-qPCR检测牙槽骨组织成骨相关指标:Runt相关转录因子2(Runx2)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨钙素(OCN)、I型胶原(Col I)和成血管相关指标:血小板-内皮细胞粘附分子(CD31)、血管内皮生长因子A(VEGFA)mRNA和蛋白表达;Western blot检测牙槽骨组织PDGFR-β/PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果:A-PRF/i-PRF/Bio-Oss组牙槽骨新生骨量、新生血管、Runx2、BMP-2、OCN、Col I、CD31、VEGFA、PDGFR-β、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT表达量明显高于A-PRF/Bio-Oss组、A-PRF组、Control组(均P<0.05)。结论:A-PRF/i-PRF/Bio-Oss复合物通过促进骨形成和血管形成,促进大鼠牙槽骨缺损的再生修复,可能与激活PDGFR-β/PI3K/AKT信号通路有关。

GRB2基因沉默介导PI3K/AKT/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化大鼠脂质沉积和炎性浸润的影响

目的:探讨生长因子受体结合蛋白2(GRB2)基因沉默介导磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)信号通路对动脉粥样硬化(AS)大鼠脂质沉积和炎性浸润的调控机制。方法:生理盐水组作为对照,构建AS大鼠模型并且将模型大鼠分为如下4组:阴性对照组(转染GRB2 shRNA阴性对照序列)、GRB2 shRNA组(转染GRB2 shRNA序列)、通路抑制剂组(PI3K/AKT通路抑制剂处理)、联合组(GRB2 shRNA序列联合PI3K/AKT通路抑制剂共同处理)。定量即时聚合酶链反应(qRT-PCR)以及蛋白质印迹法检测各组大鼠主动脉PI3KR1、AKT2、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达。HE染色观察各组大鼠主动脉组织形态。油红O染色对各组大鼠动脉脂质沉积进行定量。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平。结果:qRT-PCR、蛋白质印迹法实验结果显示:与生理盐水组相比,PI3K/AKT信号通路在AS大鼠中显著活化(P<0.05);与阴性对照组相比,大鼠经GRB2沉默或PI3K/AKT通路抑制剂处理后,PI3KR1、NF-κB p65蛋白及mRNA,AKT mRNA和p-AKT表达显著下调(均P<0.05)。HE染色结果显示:阴性对照组动脉组织中呈现AS病理表现,沉默GRB2或抑制PI3K/AKT信号通路活性后病理状况改善,联合组改善更明显。油红O染色显示:与阴性对照组相比,GRB2 shRNA组、通路抑制剂组及联合组脂质沉积面积显著减少(均P<0.05)。ELISA结果显示:与阴性对照组相比,单独沉默GRB2、抑制PI3K/AKT通路或两者联合处理后,大鼠外周血TNF-α、CRP、Lp-PLA2表达显著下调(均P<0.05)。结论:下调GRB2能够抑制PI3K/AKT/NF-κB通路,减少AS大鼠主动脉的脂质沉积和炎性浸润,在AS中起保护作用。

中药调控哮喘相关信号通路的研究进展

支气管哮喘以下简称哮喘,是一种由先天免疫和适应性免疫之间相互作用引发的呼吸系统疾病,是世界上最常见的、常发于儿童的慢性非传染性疾病之一,其特点是气流受阻程度不一,可引起呼吸困难和喘息。目前全球哮喘患者逾3亿,中国成人哮喘患者约4570万人,且近年来全球哮喘患病率呈逐年上升趋势[1]。

中药治疗下肢深静脉血栓相关信号通路研究进展

下肢深静脉血栓形成(DVT)是常见的血管外科疾病,可诱发肺动脉栓塞和深静脉血栓形成后综合征,进而严重影响患者的生活质量。既往研究发现,下肢深静脉血栓的形成和发病与炎症反应密切相关,其中核转录因子Kappa B、Toll样受体、肿瘤坏死因子等信号通路参与其中。研究证实,中医药治疗DVT效果显著,临床应用广泛。中药单体、有效成分和复方可通过调控上述信号通路抑制炎症反应,通过保护内皮细胞和抑制血小板活化等途径,从而干预DVF。本文对中药治疗DVT的相关信号通路进行归纳,旨在为中医药治疗DVT的基础研究提供理论参考,为中医药治疗深静脉血栓形成的临床应用提供依据。

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。

丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制

目的基于血小板膜糖蛋白4(CD36)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制。方法通过喂养高脂饮食复制高脂血症模型大鼠,将其随机分为模型组、辛伐他汀组(0.004 g/kg)和丹参饮高、低剂量组(3.6、0.9 g/kg),另设空白组(喂养基础饲料),每组10只。各给药组大鼠每天灌胃相应药物,其余组灌胃等体积生理盐水,连续4周。末次给药后,检测大鼠血脂生化指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]含量,全血黏度、血浆黏度和血浆中纤维蛋白原(FIB)含量,血小板相关参数[血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)和血小板平均体积(MPV)],血小板生理特性和功能相关因子[血管性血友病因子(vWF)、纤维连接蛋白(Fn)、磷脂酶A2(PLA2)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素A2(TXA2)、前列腺素(PGI2)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、β-血小板球蛋白(β-TG)]水平,血小板聚集率(最大聚集率、60 s聚集率、180 s聚集率)和纤溶系统相关因子[组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)]水平,血小板中CD36/PI3K/Akt信号通路相关蛋白[CD36、黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIP5K)、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)、p-Akt1/2/3]表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血浆中TC、TG、LDL-C含量,全血黏度、血浆黏度、血浆中FIB含量,血浆中PLT、MPV、vWF、Fn、PLA2、TXB2、TXA2、cGMP、β-TG水平,血小板最大聚集率、60 s聚集率,血浆中PAI-1水平,CD36、FAK、PIP5K、PI3K、p-Akt、p-Akt1/2/3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);HDL-C含量和6-keto-PGF1α、PGI2、t-PA水平均显著降低(P<0.05)。经丹参饮干预后,上述大部分指标均显著逆转(P<0.05)。结论丹参饮可改善高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能,其作用机制可能与下调CD36/PI3K/Akt信号通路活性、降低血小板活化程度有关。

基于EGFR/PI3K/Akt信号通路探讨黄连-麦冬药对延缓糖尿病肾病的作用机制

目的:观察黄连-麦冬药对对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织损伤及表皮生长因子受体(EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,探讨其延缓DN可能的作用机制。方法:将36只雄性Wistar大鼠随机分为正常组6只和造模组30只,造模组采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)共同诱导的方法建立2型糖尿病大鼠模型,模型制备成功后随机分为模型组、黄连-麦冬低、中、高剂量组(100、200、400 mg·kg^(-1))和二甲双胍组(200 mg·kg^(-1))。给药后检测大鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白(24 h-UTP)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)水平;苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察大鼠肾组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肾组织EGFR、PI3K、Akt相关蛋白表达及其mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG、SCr、BUN、UA、24 h-UTP和肾脏指数显著升高(P<0.01),肾小管上皮细胞大量坏死,肾小球内胶原蛋白含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠上述指标均有不同程度的改善。黄连-麦冬各剂量组和二甲双胍组大鼠FBG、SCr、BUN、UA、24 h-UTP、肾脏指数明显下降(P<0.05,P<0.01),肾小管上皮细胞坏死程度减轻,纤维化面积减少(P<0.01),EGFR、PI3K、Akt相关蛋白表达和mRNA表达明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:黄连-麦冬药对能够缓解DN大鼠肾组织损伤,其机制可能与调控EGFR/PI3K/Akt信号通路有关。

基于IGF-1/PI3K/Akt信号通路探讨红芪多糖对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦平滑肌细胞凋亡的影响及作用机制

目的:观察红芪多糖对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃窦平滑肌细胞凋亡及胰岛素样生长因子-1/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(IGF-1/PI3K/Akt)通路蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法:将62只Wistar雄性大鼠随机分为空白组12只、造模组50只。造模组采用小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素联合不规律高脂高糖饮食法4周构建大鼠DGP模型。将成模大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和红芪多糖高、中、低剂量组。红芪多糖高、中、低剂量组分别予红芪多糖200、100、50 mg·kg^(-1)灌胃,莫沙必利组予枸橼酸莫沙必利1.35 mg·kg^(-1)灌胃,空白组和模型组予等体积纯净水灌胃,每日1次,连续8周。每2周测定大鼠随机血糖及体质量,检测胃排空率;苏木素-伊红(HE)染色观察胃窦组织平滑肌病理形态;原位末端标记法(TUNEL)染色检测胃窦组织平滑肌细胞凋亡指数;免疫组化法检测胃窦组织平滑肌IGF-1、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt蛋白的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃窦组织平滑肌中IGF-1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠各时间点随机血糖显著升高(P<0.01),体质量、胃排空率显著降低(P<0.01),胃窦组织平滑肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.01),IGF-1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠给药8周后随机血糖降低,体质量、胃排空率均明显升高(P<0.05,P<0.01)、胃窦组织平滑肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05,P<0.01),IGF-1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与莫沙比利组比较,红芪多糖低剂量组给药6、8周后随机血糖升高、体质量减轻(P<0.05,P<0.01),红芪多糖低剂量组大鼠胃排空率降低、胃窦组织平滑肌细胞凋亡指数升高(P<0.05),红芪多糖各剂量组p-PI3K/PI3K蛋白表达,以及红芪多糖低剂量组IGF-1、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);与红芪多糖高剂量组比较,红芪多糖低剂量组给药6、8周后随机血糖升高、体质量减轻(P<0.05,P<0.01),红芪多糖低、中剂量组大鼠胃排空率降低、胃窦组织平滑肌细胞凋亡指数升高(P<0.05,P<0.01),IGF-1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);与红芪多糖中剂量比较,HPS低剂量组给药6、8周后体质量、大鼠胃排空率降低及胃窦组织平滑肌细胞凋亡指数升高(P<0.05,P<0.01),IGF-1、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:红芪多糖能够在一定程度上保护胃窦平滑肌细胞凋亡损伤并促进胃动力,其机制可能与激活IGF-1/PI3K/Akt信号通路,上调IGF-1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达有关。

丹参酮ⅡA通过TGF-β1/PI3K/Akt信号通路对子宫内膜间质细胞纤维化的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过转化生长因子-β1/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(TGF-β1/PI3K/Akt)通路对人子宫内膜间质细胞(HESCs)纤维化的影响。方法:取10 ng/mL TGF-β1诱导HESCs纤维化,将HESCs分为5组:正常对照组,模型组和TanⅡA低、中、高剂量组。CCK-8检测HESCs细胞毒性和增殖情况;免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白α1(Col1α1)荧光强度;Western Blot检测α-SMA、Col1α1、PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达。结果:TanⅡA浓度在10~40μg/mL对HESCs无毒性。与正常对照组比较,模型组细胞增殖能力,α-SMA、Col1α1荧光强度,α-SMA、Col1α1、PI3K、p-Akt蛋白表达显著增多(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,TanⅡA高剂量组细胞增殖能力显著下降(P<0.05);各TanⅡA干预组α-SMA、Col1α1荧光强度,α-SMA、PI3K、p-Akt、Col1α1蛋白表达显著减少(P<0.01,P<0.05),各组Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:TanⅡA可通过抑制TGF-β1/PI3K/Akt信号通路有效抗子宫内膜纤维化。

中药复方益糖康颗粒通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路促进足细胞自噬的机制

目的:通过观察中药复方益糖康(YTK)颗粒对晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴介导沉默信息调节因子1(SIRT1)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路改善糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠足细胞自噬的影响,探讨YTK治疗DKD的可能作用机制。方法:选取8周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠96只,使用随机数字表法分为空白组、模型组、YTK高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^(-1))、西药组(氯沙坦片,20 mg·kg^(-1)),采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药8周后取材。严格按照试剂盒所示方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、肌间质蛋白(Desmin)、裂孔膜蛋白(Nephrin)的平均积分吸光度值;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析DKD大鼠肾组织中滑膜PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、RAGE、SIRT1、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、FoxO1的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组SOD、GSH-Px、CAT表达水平明显降低,MDA显著升高(P<0.01);大鼠呈现严重肾损现象;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin阳性表达显著增多,Nephrin、足突蛋白质(Podocin)显著下降(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,SIRT1、FoxO1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,YTK各剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT水平显著升高,MDA显著下降(P<0.01);肾损程度均发生了不同程度减轻;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin平均积分吸光度值均明显降低,Nephrin、Podocin显著升高(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3表达水平显著降低,SIRT1、FoxO1表达水平显著提升(P<0.01)。中药组表现出明显的量效趋势。结论:YTK可能通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,改善足细胞自噬,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓DKD进展的目的。且中药组具有量效趋势。

苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型中IRS-1、PI3K、Akt蛋白表达的影响

目的观察苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型中内胰岛素受体底物(IRS)-1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)信号分子的影响并探讨相关机制。方法通过0.25 mmol/L棕榈酸联合30 mmol/L高糖孵育24 h诱导HepG2 IR细胞模型,予以不同浓度的苦酸通调方(50,100,200μg/ml)。葡萄糖试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖含量,肝糖原试剂盒测定HepG2细胞内肝糖原含量,蛋白免疫印迹法(Western印迹)检测细胞内IRS-1、PI3K、Akt的蛋白表达。结果与模型组相比,苦酸通调方干预后,呈剂量依赖性增加IR HepG2细胞的葡萄糖消耗量及细胞内肝糖原含量(P<0.05),上调IRS-1、PI3K、Akt蛋白磷酸活化水平(P<0.05)。结论苦酸通调方改善2型糖尿病IR作用可能与影响IRS-1、PI3K、Akt蛋白表达相关。

基于PI3K、Akt信号通路探讨山腊梅叶乙醇提取物的降糖降脂作用

目的观察分析山腊梅叶乙醇提取物对高脂高糖糖尿病大鼠的降糖降脂调控作用。方法将大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、山腊梅叶提取物低剂量组、山腊梅叶提取物高剂量组(下文简称低、高剂量组)及二甲双胍组,每组15只,除正常组大鼠外,其余大鼠采用高脂高糖饲料喂养+腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。给药结束后测定各组大鼠血糖和血脂相关指标,并检测胰岛素受体底物(IRS)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、葡萄糖转运体4(GLUT-4)表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血清胰岛素水平下降,而空腹血糖、糖化血红蛋白,以及血清胆固醇(TC),三酰甘油(TG)及低密脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低剂量、高剂量组及二甲双胍组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、血清TC、TG及LDL-C水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),血清胰岛素、肝脏IRS、PI3K、AKT、GLUT-4蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论山腊梅叶具有降低血糖、血脂之效,其机制可能与调节IRS-1、PI3K、Akt信号通路有关。