血小板衍生生长因子-B链及受体-α链在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)及受体α链(PDGFR-α)与非小细胞肺癌发生发展的关系。方法采用免疫组化LSAB法检测PDGF-B、PDGFR-α在85例非小细胞肺癌原发灶以及20例正常支气管黏膜中的表达。结果 PDGF-B在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞浆和/或细胞核中表达,PDGFR-α主要在NSCLC细胞浆中表达,个别在细胞核表达;与正常支气管粘膜组织相比,PDGF-B、PDGFR-α在NSCLC均过度表达(P<0.05);高分化腺癌组PDGFR-α阳性表达率明显高于低分化腺癌组(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ期肺癌组PDGF-B阳性表达率明显高于Ⅰ期肺癌组(P<0.05)。结论 PDGF-B/PDGFR-α自分泌刺激环在NSCLC的发生中可能起重要作用;PDGFR-α阳性表达与肺腺癌分化呈正相关;PDGF-B的阳性表达与肺腺癌、鳞癌临床分期呈正相关。

解聚复肾宁对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞表达血小板衍生生长因子-B的影响

目的观察解聚复肾宁(JJFSN)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)表达血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)的影响。方法制备厄贝沙坦(Irb)和不同剂量JJFSN含药血清,加入到高糖诱导的体外培养的GMCs中。采用ELISA检测不同时间(24、48、72 h)细胞培养上清液中PDGF-B含量,分别采用RT-PCR法、W estern印迹检测48 h细胞PDGF-B mRNA及其蛋白表达。结果与正常对照组比较,高糖组PDGF-B分泌增加、PDGF-B mRNA及其蛋白表达上调(P<0.001)。与高糖组比较,Irb和JJFSN两种含药血清均能逆转上述变化,后者的抑制作用强于前者(P<0.05),且抑制作用呈一定的时间、剂量依赖关系。结论高糖可致GMCs分泌PDGF-B增加、PDGF-B mRNA及其蛋白表达上调,JJFSN可减少PDGF-B分泌,下调PDGF-B mRNA及其蛋白表达,从而有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化(GS)的进展。

血清血小板衍生生长因子-B、胎盘生长因子和可溶性Fms样酪氨酸激酶1水平检测在预测子痫前期发生中的意义

目的探讨血清血小板衍生生长因子-B(PDGF-BB)、胎盘生长因子(PIGF)和可溶性Fms样酪氨酸激酶1(s Flt-1)水平检测在预测子痫前期发生中的意义。方法选取138例子痫前期患者,根据病情分为轻度组(n=75)和重度组(n=63),同期选取健康孕妇58例作为对照组,收集临床资料,检测血清PDGF-BB、PIGF和s Flt-1水平,利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)和二元Logistic回归模型对血清PDGF-BB、PIGF和s Flt-1水平在预测子痫前期发生中的价值进行分析。结果重度组患者血清PDGF-BB、s Flt-1和s Flt-1/PIGF比值均高于轻度组和对照组,且轻度组均高于对照组,重度组患者血清PIGF水平低于轻度组和对照组,且轻度组低于对照组,均差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清PDGF-BB水平在预测子痫前期发生中曲线下面积0.845(95%CI:0.791~0.899),取截点值71.50 ng·L^(-1)时,灵敏度72.5%,特异度91.4%;血清PIGF水平在预测子痫前期发生中曲线下面积0.844(95%CI:0.777~0.911),取截点值1.56μg·L^(-1)时,灵敏度67.2%,特异度94.2%;血清s Flt-1水平在预测子痫前期发生中曲线下面积0.844(95%CI:0.789~0.900),取截点值25.53μg·L^(-1)时,灵敏度67.4%,特异度86.2%;s Flt-1/PIGF比值在预测子痫前期发生中曲线下面积0.918(95%CI:0.880~0.956),取截点值16.32,灵敏度80.4%,特异度100.0%;血清PDGF-BB和s Flt-1/PIGF比值联合时,曲线下面积0.948(95%CI:0.919~0.977),灵敏度98.3%,特异度84.5%。结论子痫前期患者血清PDGF-BB、s Flt-1水平和s Flt-1/PIGF比值升高,而PIGF水平降低,血清PDGF-BB水平联合s Flt-1/PIGF比值在预测子痫前期发病中具有较好的价值。

苯磺酸左旋氨氯地平对高血压患者血清血小板衍生生长因子-B的影响

目的探讨左旋氨氯地平对高血压患者的血清血小板衍生生长因子-B(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)的影响。方法将原发性1、2级高血压患者随机分为对照组(n=25)、左旋氨氯地平组(n=25)、利尿剂组(n=25)。对照组给予治疗性生活方式干预,左旋氨氯地平组给予治疗性生活方式干预+口服左旋氨氯地平治疗,利尿剂组给予治疗性生活方式干预+口服利尿剂治疗。比较三组治疗前及治疗6、12个月血清PDGF-BB的变化。结果对照组、利尿剂组、左旋氨氯地平组三组治疗前血清PDGF-BB差异无统计学意义(P>0.05)。治疗6个月后对照组、利尿剂组血清PDGF-BB与治疗前相比差异无统计学意义(P>0.05);左旋氨氯地平组与治疗前相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗12个月后对照组血清PDGF-BB与治疗前、治疗6个月后相比差异无统计学意义(P>0.05);利尿剂组、左旋氨氯地平组血清PDGF-BB与治疗前、治疗6个月后相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后12个月左旋氨氯地平组血清PDGF-BB较治疗前降低水平比利尿剂组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论左旋氨氯地平能有效降低高血压患者的血清PDGF-BB水平。

血小板衍生生长因子B链在pN0期非小细胞肺癌中的表达及与淋巴结微转移的关系

目的探讨血小板衍生生长因子B链(PDGF-B)在pN0期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与淋巴结微转移关系。方法采用免疫组化链霉菌蛋白生物素(LSAB)法检测PDGF-B在50例pN0期的NSCLC患者原发灶(152枚淋巴结)及22例癌旁组织中的表达,通过细胞角质蛋白(CK)抗体为标志物来检测pN0期NSCLC的淋巴结微转移情况。结果pN0期NSCLC组织中PDGF-B的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);50例pN0期NSCLC患者中16例患者检测存在微转移;152枚淋巴结中,CK表达阳性率为18.42%(28/152);pN0期NSCLC患者淋巴结微转移与临床分型有关,ⅠB期和ⅡB期NSCLC患者的淋巴结微转移发生率较高(P均<0.05)。结论以CK细胞角质蛋白抗体为标志物检测pN0期NSCLC淋巴结微转移情况及pN0期NSCLC中PDGF-B与淋巴结微转移的关系可准确NSCLC的分期,为早期NSCLC患者的个体化治疗提供理论依据,并显著提高患者的长期生存率。

人血小板衍生生长因子B链基因酵母表达载体的构建

目的构建带信号肽和不带信号肽的人血小板衍生生长因子B(PDGF-B)链基因酵母表达载体,探讨该基因在酵母中的表达效率和活性。方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人血管内皮细胞总RNA中扩增出PDGF-B的cDNA,克隆入pGEM-T载体,进行序列测定。进而克隆至酵母表达质粒pMETB和pMETαA并进行重组子双酶切鉴定。结果扩增获得了含信号肽(578 bp)和不含信号肽(340 bp)的编码PDGF-B链基因;构建了PDGF-B的酵母表达载体pMETB-PDGFB1,pMETαA-PDGFB2。测序结果显示,重组载体中目的基因序列与GENE BANK公布的序列一致。结论人血小板衍生生长因子B链基因酵母表达载体构建成功,为进一步在酵母中的高效表达奠定基础。

高血压患者血清血小板衍生生长因子-B与颈动脉IMT的相关性

目的探讨高血压患者的血清血小板衍生生长因子-B与颈动脉内膜中层厚度的相关关系.方法将未受药物影响、且未合并其他疾病的原发性高血压患者90例进行颈动脉内膜中层厚度检测及血清血小板衍生生长因子-B检测(ELISA法),并进行相关性分析.结果本组90例患者收缩压为(150.16±9.18)mm Hg,舒张压为(99.92±6.32)mm Hg;颈动脉IMT为(0.78±0.43)mm,血清PDGF-BB为(25.78±12.76)ng/m L.颈动脉内膜中层厚度与血清血小板衍生生长因子-B呈中度正相关关系(r=0.483,P=0.000,P<0.001).结论高血压患者血清血小板衍生生长因子-B与颈动脉内膜中层厚度呈中度正相关关系相关性.

血小板衍生生长因子-D在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的研究血小板衍生生长因子(PDGF)D在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理指标的关系。方法用RT-PCR方法检测PDGF-A、B、C、D及其受体PDGFRα和PDGFRβ基因在40例肝癌组织及对应的30例癌旁组织和10例正常肝组织标本中mRNA的表达。结果HCC组织中PDGF-A、B、C、D及其受体PDGFRα和PDGFRβ阳性表达分别为37.5%(15/40)、70%(28/40)、52.5%(21/40)、92.5%(37/40)、22.5%(9/40)、42.5%(17/40);与其相对应的癌旁组织的阳性表达率分别为23.3%(7/30)、16.7%(5/30)、16.7%(5/30)、26.7%(8/30)、13.3%(4/30)、16.7%(5/30);而正常肝组织中未见表达。在HCC组织中PDGF家族的表达均显著高于癌旁组织和正常组织,三组比较差异有统计学意义(P<0.01),且PDGF-D的阳性表达显著高于PDGFs其他亚型(P<0.05)。在HCC、癌旁、正常肝脏组织中PDGF-D平均光密度值为0.5900±0.0364、0.3954±0.0654、0,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。HCC组织中PDGF-D的阳性表达与肿瘤的分化程度、淋巴及转移有关(P<0.05);与年龄、性别、肿瘤大小、血清AFP的值及门静脉癌栓无关(P>0.05)。结论PDGF家族中以PDGF-D表达率最高且与肿瘤的分化程度和转移相关,提示PDGF家族,尤其是PDGF-D在HCC的发生、发展和转移中可能发挥着重要的作用,可作为肝癌辅助诊断指标和治疗靶点。

人血小板衍化生长因子-B真核表达质粒的构建

目的 :构建含人血小板衍化生长因子 B(hPDGF B)基因的真核表达质粒 ,为深入研究hPDGF B在组织修复中的作用及其在皮肤组织工程中的应用提供物质基础。方法 :从原代培养的人脐静脉内皮细胞中提取总RNA ,通过逆转录 聚合酶链反应扩增出hPDGF B目的DNA片段。通过连接酶连入真核质粒pcDNA3 1中 ,经大肠杆菌DH5α扩增和筛选 ,构建出重组真核质粒pcDNA3 1 hPDGF B。结果 :重组质粒通过BamHⅠ和HindⅢ酶切后 ,电泳图显示 0 6kb的hPDGF B的目的片段和 5 5kb的载体片段 ,证明重组质粒连接正确。经测序显示核苷酸及相应氨基酸序列正确无误。结论 :含hPDGF B基因的真核表达质粒被成功构建。

血小板源生长因子B链基因上游序列HMGI结合区的初步鉴定

目的:观察转录结构因子高迁移率蛋白I(HMGI)与血小板源生长因子B链(PDGF-B)基因上游序列的结合并初步鉴定HMGI的结合序列。方法:应用凝胶迁移率改变法(EMSA)观察重组人HMGI蛋白与PDGF-B基因上游-1758/+43bp片段的结合,并逐步确定与其结合的AT富含序列。结果:重组人HMGI蛋白能较特异地与PDGF-B链基因上游-1758/+43bp片段结合,分离到的两个HMGI结合片段,-1393/-1181bp和-190/+43bp,均含有AT富含序列TTTATAAA(-1333/-1326bp,-1314/-1307bp和-30/23bp)。HMGI能与含TT-TATAAA的合成寡核苷酸结合,并能促进转录因子NF-κB与拼接于旁侧的PDGF-B基因的切应力反应元件结合。结论:HMGI在体外能与PDGF-B链基因上游的TTTATAAA序列结合,可能参与PDGF-B基因的转录调控。

骨髓增生异常综合征患者血小板衍生生长因子-B、生长分化因子11的表达及临床意义

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)、生长分化因子11(GDF 11)的表达水平及意义。方法 选取115例MDS患者,根据国际预后积分系统(IPSS)分为低危组(39例)、中危组(45例)及高危组(31例)。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测研究对象GDF 11、PDGF-B水平;采用全自动血细胞分析仪检测患者外周血红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞比容(Hct)及血小板计数(PLT),计算骨髓原始幼稚细胞比例。分析MDS患者GDF 11和PDGF-B与RBC、Hb、Hct、PLT及骨髓原始幼稚细胞比例之间的相关性。结果 低危组GDF 11、PDGF-B水平均低于中危组和高危组(均P <0.05),中危组GDF 11、PDGF-B水平均低于高危组(均P <0.05);低危组、中危组RBC、Hb、Hct及PLT水平均低于高危组,骨髓原始幼稚细胞比例高于对照组高危组(均P <0.05),且相较于中危组,低危组RBC、Hb、Hct及PLT水平更高,骨髓原始幼稚细胞比例更低(均P<0.05);MDS患者GDF 11和PDGF-B与RBC、Hb、Hct、PLT间均呈负相关,与骨髓原始幼稚细胞比例间呈正相关(P <0.05)。结论 MDS患者的PDGF-B及GDF11水平存在异常升高,临床可根据其水平变化评估MDS患者病情严重程度。

COPD患者血小板衍生生长因子表达及相关因素分析

目的观察慢性阻塞性肺病(COPD)患者血小板衍生生长因子(PDGF)-B水平的变化,并探讨其与COPD的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测40例稳定期COPD患者和20例正常对照外周血血清中PDGF-BB水平,并用RT-PCR技术检测受试者外周血单个核细胞PDGF-B mRNA水平。结果COPD患者血清PDGF-BB水平及外周血单个核细胞PDGF-B mRNA较对照组明显升高,差异具有显著性(P<0.05),且升高程度与病情有关。进一步分析与FEV1/FCV及FEV 1%预计值成负相关。结论 COPD患者血小板衍生生长因子(PDGF)-BB水平明显增加,PDGF-BB可能参与了COPD的病理生理过程。

人血小板衍生生长因子B链成熟肽基因克隆及表达

目的 获得足量的PDGF BB蛋白 ,作为PDGF BB促进骨折愈合及创伤修复等进一步功能研究和临床应用的基础。方法 用基因重组技术构建pQE PDGF B原核表达载体 ,在M15大肠杆菌中进行PDGF B单体蛋白的表达。结果 经酶切鉴定、PCR鉴定及基因测序证明 ,pQE30载体上成功地插入了PDGF B成熟肽基因 ;重组表达载体pQE PDGF B在M15大肠杆菌中得到了高效表达 ,表达量约占全菌蛋白的 15 % ,表达的PDGF B单体蛋白经SDSPAGE电泳 ,显示了一条特异蛋白带 ,分子量为 15kD左右。结论 PDGF B原核表达载体的成功构建和PDGF B单体蛋白制备纯化为生产活性PDGF BB蛋白及其进一步功能研究奠定了基础。

急性缺血性脑卒中血清SE-CAD、PDGF-BB与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的:探讨急性缺血性脑卒中病人血清可溶性上皮钙黏蛋白(SE-CAD)、血小板衍生生长因子-B(PDGF-BB)与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:选取2020年3月-2022年3月淮安市第五人民医院收治的102例急性缺血性脑卒中病人作为观察组,并根据颈动脉超声检查结果分为不稳定斑块组(43例)、稳定斑块组(59例),选择同期我院体检的120名健康人作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清SE-CAD、PDGF-BB水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线和曲线下面积(AUC)评价血清SE-CAD、PDGF-BB对急性缺血性脑卒中病人颈动脉粥样硬化斑块不稳定性的预测价值,采用多因素Logistic回归分析血清SE-CAD、PDGF-BB与急性缺血性脑卒中病人颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。结果:观察组血清SE-CAD、PDGF-BB水平均明显高于对照组(P<0.05);不稳定斑块组病人血清SE-CAD、PDGF-BB水平均高于稳定斑块组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,SE-CAD预测颈动脉粥样硬化斑块稳定性的AUC、截断值、敏感度以及特异度分别为0.848、8.22 ng/mL、93.02%、61.02%;PDGF-BB预测颈动脉粥样硬化斑块稳定性的AUC、截断值、敏感度以及特异度分别为0.858、60.68 pg/mL、93.02%、66.10%;SE-CAD联合PDGF-BB预测颈动脉斑块稳定性的AUC、敏感度以及特异度分别为0.905、86.05%、88.14%。多因素Logistic回归分析显示,血清SE-CAD、PDGF-BB及颈动脉内中膜厚度均为急性缺血性脑卒中病人颈动脉粥样硬化斑块稳定性的影响因素(P<0.05)。结论:急性缺血性脑卒中病人血清SE-CAD、PDGF-BB水平均升高,且与颈动脉粥样硬化斑块稳定性紧密相关,可作为颈动脉粥样硬化斑块不稳定的诊断指标。

氧应激在TNF-α诱导人内皮细胞PDGF-B链基因表达中的作用

探讨氧应激在肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导血管内皮细胞血小板衍生生长因子 B(PDGF B)链基因表达中的作用。培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)以TNF α处理或预先以小分子抗氧化剂N 已酰半胱氨酸 (NAC)处理 ,用ELISA和RT PCR法分别检测PDGF B的蛋白和mRNA表达 ,用氧化 还原敏感的荧光探针 2 ,7 Dichlorofluorescein(DCF)检测细胞内的氧化 还原水平。结果显示 ,TNF α(2 0 0U/mL)作用 2 4h后 ,HUVECs中PDGF B的蛋白含量和mRNA表达均明显增加 ,分别较对照组增加 5 0 %和 12 9% (P <0 0 5 ) ,但小分子抗氧化剂N 已酰半胱氨酸 (NAC ,2 0mmol/L)能明显阻断TNF α对PDGF B蛋白和mRNA表达的诱导作用。TNF α处理后 4hHUVEC的氧应激水平明显升高 ,至 2 4h时仍维持在较高水平 ,但可被NAC完全抑制。这些结果提示TNF α诱导血管内皮细胞PDGF

噬菌体肽库筛选血小板衍生生长因子受体β链(PDGF-Rβ)亲和短肽及其抗肝纤维化实验研究

目的:从噬菌体随机肽库中筛选血小板衍生生长因子受体β链(PDGF-Rβ)的亲和短肽并探讨其对CCl4诱导的肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用。方法:以重组可溶性人PDGF-Rβ作为靶标,应用噬菌体随机十二肽库进行筛选,经过3轮淘选,提取阳性噬菌体克隆ssDNA,测序并进行序列分析,选择其中出现频率高的展示肽,并根据其氨基酸序列人工合成亲和短肽,应用亲和短肽实施抗肝纤维化试验,设亲和短肽C1组亲和短肽C2组,秋水仙碱组,模型组,空白组,造模五周后处死采血,通过分析肝脏中的HPY水平并对肝脏进行病理组织学检查,检测其抗肝纤维化的作用。结果:人工合成的亲和肽PDGF-RβC1用于抗肝纤维化治疗能减轻炎症,减少胶原纤维形成,ALT羟脯氨酸与肝纤维化小鼠模型组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过噬菌体肽库技术能筛选出与PDGF-Rβ结合的噬菌体展示肽可以改善实验性肝纤维化小鼠的肝脏组织结构和肝功能。

靶向性血小板衍生生长因子siRNA表达质粒的构建及鉴定

目的 构建靶向性血小板衍生生长因子(PDGF)B链的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,为进一步研究PDGF基因功能奠定基础.方法 根据PDGF-B链序列设计合成含靶向PDGF基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有Bam HI、HindIII酶切位点的pSilencer3.1-Hlhygro质粒连接,转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列.结果 PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实PDGF siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.结论 成功构建了靶向性PDGF基因的siRNAs表达质粒.

实验性兔胸主动脉内膜损伤后血管内皮细胞PDGF-B链mRNA的表达及中药对其的影响

目的:探讨实验性兔胸主动脉内膜损伤后血管中血小板源生长因子B链(PDGF-B )的动态表达及芪通煎对其的影响.方法:采用球囊导管剥脱术,造成实验兔胸主动脉内膜损伤,分别观察内膜损伤后0w,1dw,2dw,4w的mRNA的表达,以异硫氰酸胍一步法提取兔胸主动脉总mRNA,用合成的二条引物 PDGF-B链进行逆转录(RT-PCR).实验着重探讨内膜损伤后血管内皮细胞 PDGF-B链在不同时期的变化和利用中药芪通煎对其的干扰后产生的影响,为研究动脉硬化、冠心病奠定新的理论基础.结果:内膜损伤后一周 PDGF-B链mRNA表达明显增强P＜0.01,用中药(QTJ)能明显拮抗 mRNA的表达.结论:当血管内膜损伤后,PDGF-BmRNA 表达早期呈增高趋势,第四周逐渐下降,QMQ在损伤早期可抑制mRNA的转录.

糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF-B的表达

目的:探讨血小板源生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平在糖尿病(DM)大鼠视网膜中的变化规律及其作用.方法:雄性W istar大鼠60只,随机分为正常对照组(25只)与造模组(35只).造模组以链脲佐菌素(STZ)尾iv,3 d后测定血糖≥16.7 mmol/L,尿糖以上者定为DM大鼠.分别于造模成功后1,2,3 mo末各组随机取6只大鼠,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PDGF-B mRNA在大鼠视网膜中的表达水平;电镜观察DM大鼠视网膜超微结构的改变.结果:随着病程的延长,视网膜中PDGF-B mRNA表达水平在DM组明显升高,与正常对照组相比于造模后1 mo末时即差异具有统计学意义(P<0.05),3 mo末时差异显著(P<0.01);DM大鼠视网膜超微结构的损害随病程进展逐渐加重.结论:PDGF-B mRNA在视网膜中的表达水平随DM病程进展逐步升高.