血小板裂解物体外抑菌活性及其与抗生素的协同效应研究

目的通过体外实验探讨血小板裂解物(PL)的体外抑菌活性及其与抗生素的协同效应。方法选取大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌,采用微孔板法与牛津杯打孔法进行PL体外抑菌实验,微孔板法中设置庆大霉素(GM)、富血小板血浆(PRP)阳性对照,贫血小板血浆(PPP)阴性对照,测定OD值,计算抑菌率,牛津杯打孔法测定抑菌圈直径。结果对大肠杆菌的抑菌率GM>PL>PRP>PPP(P<0.05),且随着PL浓度的降低,抑菌率逐渐降低;PL对大肠杆菌的抑菌率在4小时达到高峰,随着时间的延长,抑菌率逐渐降低。PL与庆大霉素的联用增强了庆大霉素的抗菌作用,PL+GM抑菌圈直径>GM抑菌圈直径。PL对肺炎克雷伯杆菌的抑菌作用GM+PL>GM>PL。结论PL具有一定的抑菌作用,但弱于抗生素,其抑菌作用随着时间的延长及浓度的降低而逐渐减弱,并具有协同抗菌作用。

血小板裂解物在再生医学和细胞治疗领域的研究进展

血小板裂解物(human platelet lysate,HPL)是1种具有促进组织修复、细胞增殖、炎症控制等多种功能的新型生物材料。我们介绍了血小板裂解物在再生医学和细胞治疗领域的发展,对其应用形式进行了分类概述,并以血小板裂解物促进细胞增殖的潜力为切入点,分析了其作为细胞培养基补充剂的优势所在。鉴于目前尚无血小板裂解物制备的标准程序,我们通过对原材料来源、供体变异性、制备工艺等标准化要素的梳理,以期为未来我国学界建立相关行业标准提供参考。

人脐血浆源血小板裂解物培养脐带间充质干细胞效果

目的探索人脐血浆源血小板裂解物(UCB-PL)制备工艺,并形成无肝素以及无动物源性成分的脐带间充质干细胞(UCMSC)培养体系。方法脐带血浆采用离心法分离富血小板血浆(PRP),采用高速离心PRP浓缩血小板,–80℃/37℃反复冻融3次制得UCB-PL。BCA法检测UCB-PL总蛋白含量、ELISA法检测UCB-PL主要生长因子含量、UCB-PL培养基纤维蛋白原含量。自然沉降法耗竭UCB-PL培养基中纤维蛋白原,制成无肝素抗凝的UCMSC培养体系。观察培养体系下UCMSC生长形态,测定UCMSC增殖数量、细胞活率,检测UCMSC表面标志物表达情况,细胞集落形成能力,成骨、成软骨、成脂分化能力情况。结果从脐血浆中获得血小板浓缩物,回收率为(50.68±7.28)%;按培养基体积比5%、10%及20%配制UCB-PL培养基,未经纤维蛋白原耗竭处理用于UCMSC培养,3组培养基均不同程度凝结,经纤维蛋白原耗竭处理后,培养基不再凝结,纤维蛋白原含量分别减少85.26%(P<0.01)、85.90%(P<0.01)和93.71%(P<0.01)。经纤维蛋白原耗竭处理后,以20%UCB-PL培养UCMSC细胞数量最高(P<0.01),细胞活率各组间无显著差异(P>0.05);UCMSC细胞形态呈长梭状,平行或旋涡纹贴壁生长,细胞表面标志物抗原CD45^(+)/CD34^(+)/CD14^(+)/CD19^(+)阳性细胞比例为0.09%,CD73^(+)、CD90^(+)以及CD105^(+)阳性细胞比例分别为98.33%、99.56%以及96.37%。细胞经成脂、成骨、成软骨诱导后,油红O、茜素红S及阿利新蓝染色结果表明,细胞具有三向分化能力。0.1%结晶紫水溶液染色表明细胞集落形成能力良好。ELISA检测UCB-PL中,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量为(39.69±5.31)pg/ml,胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量为(21.25±3.84)ng/ml,血小板源性生长因子AB(PDGF-AB)含量为(3.81±0.35)ng/ml,转化生长因子β1(TGF-β1)含量为(19.65±1.55)ng/ml。BCA试剂盒检测UCB-PL总蛋白含量为(1130.51±164.96)μg/ml。不同保存温度下UCB-PL细胞因子含量检测结果表明UCB-PL制备完成需冷冻保存,–80℃保存90 d时UCB-PL的IGF-1、PDGF-AB及TGF-β1含量无显著变化,bFGF含量降低极显著(P<0.01),-20℃保存90 d时bFGF、IGF-1、TGF-β1含量较保存30 d时无显著变化,PDGF-AB含量显著降低(P<0.05),4℃及室温保存30 d后细胞因子含量极显著降低(P<0.01)。结论从脐血浆中制取UCB-PL可作为胎牛血清(FBS)替代物用于UCMSC的扩增培养。制备获得的UCB-PL需冷冻保存。采用纤维蛋白耗竭方法处理UCB-PL培养基后,可形成无动物源性的抗凝培养体系。