血府逐瘀血清对大鼠背根神经元缺氧损伤的保护作用的研究

目的探索分析血府逐瘀血清对大鼠背根神经元缺氧损伤的保护作用。方法 10只新生24 h SD大鼠,取背根神经节(DRG),培养大鼠背根神经节神经元,并分成空白对照组(正常培养7 d不进行缺氧损伤)、损伤对照组(建立细胞缺氧损伤模型,在缺氧损伤前24 h给予磷酸缓冲试剂)、空白血清组(建立细胞缺氧损伤模型,细胞种植3 d后加入空白血清)、含药血清组[建立细胞缺氧损伤模型,在缺氧损伤前24 h加入含药(血府逐瘀血清)血清]、神经营养因子保护组[建立细胞缺氧损伤模型,在缺氧损伤前24 h加入神经生长因子(NGF)],检测比较各组不同时间丙二醛(MDA)含量及过氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,并通过MTT法检测细胞的存活率。结果空白对照组MDA在各个时间点的变化不大,损伤对照组是各组中同时间点MDA含量最高的。12 h后MDA含量含药血清组明显低于空白血清组及损伤对照组,比较差异具有统计学意义(P<0.05);但含药血清组与神经营养因子保护组比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组各个时间点SOD含量变化不大。同时间点含药血清组SOD含量明显高于损伤对照组及空白血清组,比较差异具有统计学意义(P<0.05);同时间点含药血清组与神经营养因子保护组SOD含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。损伤后24 h,含药血清组LDH含量明显低于损伤对照组及空白血清组,比较差异有统计学意义(P<0.05),但与神经营养因子保护组比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组细胞存活率为(0.624±0.054),含药血清组细胞存活率为(0.529±0.010),空白血清组细胞存活率为(0.229±0.038),损伤对照组细胞存活率为(0.221±0.034)、神经营养因子保护组细胞存活率为(0.548±0.056),含药血清组细胞存活率明显高于空白血清组及损伤对照组,与神经营养因子保护组及空白对照组较为接近。结论血府逐瘀血清对大鼠背根神经元缺氧损伤具有保护作用,可以促进神经元的生长。

血府逐瘀汤含药血清体外诱导骨髓基质干细胞表达Desmin和α-actin的实验研究

目的观察血府逐瘀汤含药血清能否诱导骨髓基质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞,以寻找安全有效诱导MSCs向心肌细胞分化的诱导剂。方法采用血清药理学方法进行诱导,制备血府逐瘀汤大鼠含药血清,分离培养大鼠MSCs,MTT法检测血清细胞毒性,选用生长良好的P3细胞进行实验,将实验细胞分为3组,即空白对照组、血府逐瘀汤大鼠含药血清诱导组、5-氮胞苷诱导组。免疫细胞化学染色法检测心肌结蛋白(Desmin),α型心肌肌动蛋白(α-actin)的表达情况。结果诱导前各组MSCs细胞Desmin和α-actin表达阴性,个别弱阳性;其弱阳性表达率各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。诱导后空白对照组MSCs细胞Desmin和α-actin表达阴性,个别弱阳性;血府逐瘀汤含药血清组和5-氮胞苷体外培养诱导组,MSCs细胞Desmin和α-actin表达阳性,其阳性表达率与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血府逐瘀汤含药血清具有体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为心肌样细胞的趋势,其作用可能参与了Desmin和α-actin的表达。

血府逐瘀汤含药血清体外诱导MSC分化为心肌样细胞的实验研究

目的:观察血府逐瘀汤含药血清体外能否诱导MSC分化为心肌样细胞,为安全有效治疗冠心病提供基础研究。方法:分离培养Wistar大鼠骨髓基质干细胞(MSC),用血府逐瘀汤含药血清培养诱导后,倒置荧光相差显微镜观察MSC细胞形态学的改变,免疫细胞化学染色法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达。结果:MSC经过血府逐瘀汤含药血清体外诱导后,细胞形态发生了改变,出现了心肌样细胞的特征;免疫细胞化学染色发现心肌肌钙蛋白(cTnI)呈阳性表达。结论:血府逐瘀汤含药血清具有体外诱导大鼠MSC分化为心肌样细胞的趋势。

血府逐瘀汤含药血清对MSC分化过程中α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响

目的:探讨中药复方血府逐瘀汤含药血清体外诱导骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化的情况,为MSC移植治疗缺血性心脏病提供安全有效的种子细胞。方法:分离培养Wistar大鼠MSC,用血府逐瘀汤含药血清诱导后,RT-PCR技术检测诱导后的MSC心肌细胞标志物α-MHC、β-MHC的表达。结果:MSC经过血府逐瘀汤含药血清体外诱导后,细胞中有心肌细胞标志物α-MHC、β-MHC的表达。结论:中药复方血府逐瘀汤含药血清可以体外诱导大鼠MSC分化为心肌样细胞。

血府逐瘀汤含药血清体外诱导MSC形态学改变及表达cTnT的实验研究

目的:探讨复方血府逐瘀汤含药血清体外诱导MSC分化为心肌细胞的能力,作为细胞移植治疗冠心病、心肌梗死等缺血性心脏病的种子细胞,旨在提高细胞移植治疗冠心病的安全性。方法:分离培养Wistar大鼠骨髓基质干细胞(MSC),用血府逐瘀汤含药血清诱导后,倒置荧光相差显微镜观察细胞形态学的改变,免疫细胞荧光染色法检测cTnT的表达。结果:MSC经过血府逐瘀汤含药血清体外诱导后,MSC的细胞形态发生了变化,具有和5-氮胞苷类似的诱导作用,朝着心肌细胞形态学的方向发展,心肌肌钙蛋白T出现了阳性表达。结论:复方血府逐瘀汤含药血清体外可以诱导大鼠MSC分化为心肌样细胞。

血府逐瘀汤含药血清对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的研究血府逐瘀汤含药血清对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。方法低氧诱导大鼠PASMCs增殖,设置正常对照组、低氧模型组、血府逐瘀低剂量组、血府逐瘀高剂量组和NVP-BEZ235组,血府逐瘀低、高剂量组含药血清浓度分别为5%和20%。运用CCK-8法检测不同低氧时间和药物干预对于PASMCs增殖的影响,Western Blot检测细胞p-Akt、p-mTOR和PCNA表达。结果低氧培养36 h时PASMCs OD值最高,且高于常氧培养(P<0.01);与正常对照组比较,低氧模型组OD值明显升高(P<0.01),p-AKT、p-mTOR、PCNA表达增加(P<0.05);与低氧模型组比较,血府逐瘀高剂量组和NVP-BEZ235组OD值不同程度降低(P<0.01),各药物组p-AKT、p-mTOR、PCNA表达减少(P<0.05);与血府逐瘀低剂量组比较,NVP-BEZ235组p-AKT、p-mTOR、PCNA表达减少(P<0.05)。结论血府逐瘀汤含药血清可以抑制低氧诱导的大鼠PASMCs增殖,可能通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路活化并下调PCNA表达而发挥作用。