UPLC-Q-TOF-MS/MS法分析紫辛鼻鼽颗粒化学成分及入血成分

目的 建立UPLC-Q-TOF-MS/MS法分析紫辛鼻鼽颗粒化学成分及入血成分。方法 分析采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(1.8μm, 2.1 mm×100 mm);流动相0.2%甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。根据准分子离子、保留时间、二级碎片离子结合对照品信息及文献报道进行成分鉴定。结果 共鉴定出88种成分,其中28种经对照品比对确认。从大鼠血清中发现了30种成分,其中20种为原型成分,10种为代谢产物。结论 该方法稳定可靠,可为紫辛鼻鼽颗粒药效物质基础、质量控制研究奠定基础。

基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术的百蕊颗粒入血成分研究

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)技术辨析百蕊颗粒灌胃大鼠后的原型成分和代谢产物,并研究其主要体内代谢过程。大鼠口服给药百蕊颗粒后,采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术采集血清样本数据,正、负离子模式下同时扫描,结合前期体外化学成分质谱数据以及提取各化学成分的精确质荷比等信息对百蕊颗粒在大鼠体内的原型成分和代谢产物进行辨识研究。结果在大鼠体内中共检测到20个原型成分和10个代谢产物,其中原型成分包括生物碱类化合物6个,黄酮类化合物4个,有机酸类3个等其他化合物,主要代谢途径包括还原反应和水解反应、硫酸化反应和葡萄糖醛酸结合反应。该研究为揭示百蕊颗粒药效物质基础奠定了基础,也为其中成药的开发与利用提供应用价值。

基于UPLC-Q-TOF/MS的连桂宁心汤体外与入血成分分析及鉴定

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatography-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)对连桂宁心汤化学成分和入血成分进行分析,初步阐明其可能的药效物质基础。方法采用ACQUITYTM UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为A(0.1%甲酸的水溶液)-B(0.1%甲酸的乙腈溶液),梯度洗脱,柱温为45℃,进样量为5μL。采用电喷雾离子源,正/负离子双模式检测,离子源温度120℃,脱溶剂和雾化气为高纯N_(2),锥孔N_(2)反吹流量50 L/h,锥孔电压30 V;毛细管电压3.0 kV(正)/2.0 kV(负);脱溶剂温度450℃,流量800 L/h;分子量范围50~1200 Da。结果结合文献报道和一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据,在连桂宁心汤水煎液中鉴定出68个成分,以黄酮类、生物碱类、三萜类为主,在给药大鼠血浆样本中鉴定出33个成分,以黄酮类、生物碱类、三萜类、挥发油类为主,其中黄酮类及生物碱类鉴定出的成分数量及丰度较体外明显降低。结论UPLC/Q-TOF MS/MS技术是鉴定中药复方成分的有效手段,结合连桂宁心汤化学成分及其入血成分,初步阐明连桂宁心汤的药效物质基础,为探讨其作用机制及其质量控制提供了有效的科学依据。

基于UHPLC-Q-TOF-MS技术分析假北紫堇入血成分及代谢产物

目的:采用UHPLC-Q-TOF-MS技术快速分析鉴定假北紫堇在大鼠体内的入血成分及代谢产物,为假北紫堇的药效物质研究提供基础。方法:以SD大鼠为实验对象,灌胃给予假北紫堇提取物,收集血浆样品,采用Welech-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量3μL,采用电喷雾离子源,正离子模式下检测。结果:分析鉴定了31个入血成分,其中包括20个原型成分和11个代谢产物。结论:利用UHPLC-QTOF-MS分析方法鉴定假北紫堇的入血成分,为进一步阐明假北紫堇的药效物质基础及其作用机制提供了依据,为假北紫堇的进一步开发利用提供了基础。

益气生津散治疗2型糖尿病合并高血压的入血成分及作用机制分析

目的 基于超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)分析益气生津散入血药物活性成分,并采用网络药理学、GEO数据库多芯片联合分析及分子对接技术探讨益气生津散治疗2型糖尿病合并高血压的可能作用机制。方法 采用UPLC-MS/MS技术分析2型糖尿病合并高血压患者服用益气生津散后含药血清活性成分;采用Cytoscape构建成分-关键靶点-疾病网络,用STRING数据库和Cytoscape软件筛选蛋白互作分析网络(PPI)及核心靶点,用R软件对基因本体(GO)功能、京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行富集分析;采用Pub Chem数据库、RCSB PDB蛋白质结构数据库、AutoDock tools软件及AutoDock Vina1.1. 2进行分子对接,并用Pymol软件进行可视化分析。结果 2型糖尿病合并高血压患者服用益气生津散后,主要入血活性成分为甜菜碱、石斛碱、人参皂苷Rg1、毛兰素、人参皂苷Rb1、丙二酰基人参皂甙Rd、鲁斯可皂苷元、尿苷、京尼平苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8-O-(羟基桂皮酰)哈帕苷、哈巴俄苷、人参皂苷Re,分别与核心信号通路磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)涉及的3个潜在核心靶点PIK3CA、AKT1、IRS1进行分子对接,均能自发相互结合。结论 益气生津散入血活性成分与IRS-1/PI3K/AKT途径主要蛋白分子具有高结合性,说明益气生津散很可能通过该途径发挥降糖、降压的作用。

双贝糖浆和君药板蓝根的入血成分及抗炎活性成分

为了研究双贝糖浆的抗炎物质基础,利用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS识别鉴定双贝糖浆与组方君药板蓝根的主要化学成分及入血成分。UHPLC-Q-Orbitrap HRMS结果显示,板蓝根提取物中含71个主要的化学成分、其中有46个成分可入血,以上化学成分在双贝糖浆中被检测到66个、其中42个成分可入血。进一步通过网络药理学探讨其君药板蓝根的抗炎活性成分及作用机制,通过Griess法结合MTT法验证双贝糖浆和板蓝根二者共同入血成分的抗炎活性。网络药理学分析结果表明板蓝根抗炎的关键化学成分有金合欢素、异牡荆素、半齿泽兰素等。以LPS诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,5-羟甲基糠醛、胞苷、异牡荆素、丁香酸在100μmol/L时,能够显著抑制炎症介质NO的释放。在大鼠灌胃双贝糖浆与板蓝根提取物的血清样品中均能够检测到异牡荆素,抗炎活性实验结果表明,其对炎症介质NO的抑制作用最强,为双贝糖浆及其君药板蓝根的关键抗炎活性成分。

UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析参苓白术散化学成分及入血成分

目的研究参苓白术散的化学成分及大鼠灌胃给药参苓白术散后大鼠血浆中的化学成分。方法采用超高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术,通过Peak View 1.2和Chem Draw软件,根据保留时间、相对分子质量及二级离子碎片,结合对照品及文献数据,对参苓白术散的化学成分及入血成分进行鉴别。结果从参苓白术散中鉴定出104个化学成分,主要为黄酮类和有机酸类成分;在灌胃后大鼠血浆中鉴定出27个入血成分,包括11个原型成分和16个代谢产物,主要的代谢途径为Ⅱ相代谢途径。结论该研究通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术快速分析了参苓白术散的化学成分及入血成分,可为阐明参苓白术散的药效物质基础及其作用机制提供参考。

健脾化浊调脂颗粒的化学成分及入血成分分析

目的分析健脾化浊调脂颗粒(JHTG)的化学成分及其入血成分。方法将SD大鼠分为对照组和给药组,每组6只。给药组大鼠灌胃JHTG药液3 mL。灌胃60 min后,收集两组大鼠血清样品,采用超高效液相色谱-串联质谱技术对JHTG的化学成分及入血成分进行色谱分离和质谱数据采集,结合UNIFI天然产物整体解决方案,基于6400天然产物理论质谱数据库并通过文献查阅、对照品比对等进行结构分析、确认。结果与结论从JHTG中共鉴定出130个成分,其中党参3个、荷叶13个、茯苓15个、白术5个、陈皮9个、薏苡仁1个、泽泻19个、丹参24个、麦芽7个、山楂24个、砂仁2个、木香3个,另外槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山柰黄素、柠檬酸可能来源于荷叶或山楂,土当归酸可能来源于茯苓或山楂;通过与对照品比对,最终确定了8个成分(茯苓酸、白术内酯Ⅱ、泽泻醇A、泽泻醇B、土木香内酯、乙酸龙脑酯、丹酚酸A、丹酚酸C)。共鉴定出槲皮素、山柰黄素等72个入血原型成分,以黄酮类、萜类、木脂素类、酚酸类成分为主。共鉴定出去氢番荔枝碱、16-氧乙酰茯苓酸等11个代谢产物,以萜类成分为主;代谢途径包括脱氢、脱羟基等Ⅰ相代谢反应及甲基化、乙酰化等Ⅱ相代谢反应。

基于UPLC-QE-HF-MS/MS技术分析红凉伞化学成分及入血成分

目的 分析红凉伞提取物化学成分及入血成分,初步阐明其可能的药效物质基础。方法 采用配对比较法将12只大鼠随机分为空白组和红凉伞给药组,每组6只。每天上、下午各给药1次,连续3 d;第4天再次给药后,取血后制备血清样品。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对红凉伞提取物和血清样品中化学成分进行分析鉴定。使用Compound Discoverer 3.0软件进行保留时间矫正、峰识别、峰提取等工作,根据二级质谱信息,利用Thermo mzCloud在线数据库、Thermo mzVault本地数据库,并参照有关文献和对照品质谱信息,初步鉴定红凉伞化学成分及入血成分。结果 从红凉伞提取物中共鉴定出34个化合物,主要为香豆素类、黄酮类、有机酸类、氨基酸类等成分,包括岩白菜素、槲皮素、没食子酸、L-焦谷氨酸等化合物;从血清样本中共鉴定出5个入血成分,分别为L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸。结论 本研究初步推测L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸是红凉伞的药效物质基础。

基于UPLC–QE–Orbitrap–MS技术鉴定中药三棱入血成分

目的:基于超高效液相色谱–四极杆–静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC–QE–Orbitrap–MS)技术鉴定中药三棱入血成分,旨在为三棱的临床应用、研究提供药效物质基础和质量控制参考。方法:制备三棱提取物,将其对无特定病原体(SPF)级健康SD大鼠进行灌胃,若干时间后在不同时间点对大鼠眼内眦静脉丛取血,对三棱提取物以及大鼠血浆使用Agilient Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,1.8μm)进行检测,质谱分析使用电喷雾离子源,再通过mzCloud、mzVault、OTCML等数据库的资料鉴定特征峰。结果:三棱提取物共检出原型成分70个,入血成分40个,其中原型成分有20个入血成分,剩余20个入血成分可能是代谢产物。主要代谢途径为包括黄酮类化合物、有机酸类化合物、苯丙素类化合物、萜类化合物、醛类化合物、氨基酸类化合物、糖类化合物、生物碱类化合物和蒽醌类化合物。结论:基于UPLC–QE–Orbitrap–MS技术鉴定中药三棱入血成分的价值确切,可明确三棱的主要入血成分及部分代谢产物,为三棱的临床应用、研究提供药效物质基础和质量控制参考。

基于HPLC-Q-TOF-MS技术分析益气生津袋泡茶的化学成分及入血成分

目的采用HPLC-Q-TOF-MS技术对益气生津袋泡茶的主要化学成分及入血成分进行鉴定。方法6只8周龄SPF级雄性SD大鼠,体重280~300 g,采用随机数字表法分为给药组与空白组,每组3只。给药组灌胃4 ml益气生津袋泡茶水提物(生药浓度为1 g/ml),空白组灌胃4 ml生理盐水,2次/d,连续给药,第4天上午给药2 h后腹主动脉取血制备血清样品。采用Waters Xselect HSS T3 C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,2.5μm),正、负离子模式下采集袋泡茶水提物与血清样品中的化学成分;以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱。结果从益气生津袋泡茶水提物中鉴定出了17个化学成分,主要为人参皂苷类成分。同时,在血清样品中检测到了8个化学成分,分别为甜菜碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、哈巴俄苷、拟人参皂苷F11、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、毛兰素。结论采用HPLC-Q-TOF-MS技术对益气生津袋泡茶中主要化学成分及入血成分进行定性分析有助于揭示益气生津袋泡茶的药效物质基础,为进一步的质量控制、药理学和活性机制研究提供参考。

基于网络药理学探究当归芍药散入血成分治疗原发性痛经的有效性及机制

目的以当归芍药散入血成分为研究对象,基于网络药理学和动物实验探究当归芍药散治疗原发性痛经的有效性及作用机制。方法运用Gene Cards、OMIM数据库筛选与当归芍药散入血成分对接的原发性痛经靶点,利用R语言获得关键靶标,进行蛋白互作网络构建,针对筛选出的靶点进行GO和KEGG通路富集;利用AutoDock Vina 1.2.3版软件进行分子对接;通过当归芍药散给药干预原发性痛经模型大鼠,从行为学和组织病理学角度验证当归芍药散的有效性。结果共筛选出当归芍药散入血成分12个,作用于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、VEGFA、PTGS2等核心靶点,主要参与IL-17、TNF、花生四烯酸代谢等信号通路。分子对接显示Z-丁烯基酞内酯、洋川芎内酯I、芍药内酯苷3个活性成分与靶标蛋白结合能力较强。动物实验表明,原发性痛经模型大鼠扭体反应明显增加(P<0.05),子宫内膜剥脱及水肿严重;当归芍药散能有效减少大鼠扭体次数(P<0.05),减轻子宫内膜剥脱及水肿。结论当归芍药散主要通过中枢镇痛、调控激素效应、抑制子宫炎症反应等药理作用发挥治疗原发性痛经的效果,为后续研究提供参考。

基于UHPLC-Q-TOF-MS技术分析小花清风藤提取物入血成分

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)法分析小花清风藤提取物入血成分。方法:大鼠灌胃小花清风藤提取物后眼静脉丛采集血液,采用Waters ACQUITY-Xselect CSH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.5μm);流动相为0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;流速0.3 mL/min;MSE扫描正、负离子模式检测。结果:检测到67种入血成分,包括33种原型成分,34种代谢产物。结论:该实验通过UHPLC-Q-TOF-MS快速分析小花清风藤的入血成分,为进一步阐明小花清风藤的药效物质基础及其作用机制提供了参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析白术及其炮制品入血成分

目的:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS法对白术及其4个炮制品的入血成分进行识别,对比炮制前后差异,探讨其在大鼠体内的药效物质基础。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术进行分析,结合MarkView 1.2.1和Peak View软件,根据保留时间、精确相对分子质量、二级质谱裂解碎片及文献报道比对,对生白术、麸炒白术、土炒白术、焦白术及漂白术的入血成分进行初步分析鉴定。结果:共鉴定出15个共有入血成分,均为原型成分,依次为5-羟甲基糠醛、苯甲酸、2-氨基苯乙烯、邻甲氨基苯甲酸甲酯、莨菪亭、7-羟基香豆素、苯乙酸对羟基苯乙酯、薯蓣皂素、(+)-eudesma-4(14),7(11)-dien-8-one、8β-ethoxyasterolid、黄樟素、β-金合欢烯、邻苯二甲酸二正丁酯、棕榈酸、muscone。结论:该研究对白术及炮制品入血成分进行了较全面的分析,初步阐明了白术的药效物质基础,可为其后续实验研究提供参考。

增液汤治疗2型糖尿病的“入血成分⁃靶点⁃效应”复杂网络研究

目的结合网络药理学方法探讨增液汤入血成分对2型糖尿病的潜在作用效应。方法根据配体的化学结构相似性预测增液汤入血成分作用靶点,并通过靶点与糖尿病治疗效应的关联性,构建并分析“入血成分-靶点-效应”网络(ITEN),从而筛选出重要的潜在活性成分。对增液汤治疗2型糖尿病的潜在活性成分和作用效应进行体外实验验证。结果哈帕苷、哈帕酯苷、阿魏酸、梓醇、毛蕊花糖苷等6个入血成分可能是增液汤的主要活性物质,葡萄糖摄取、胰岛素分泌、糖原合成可能是增液汤治疗2型糖尿病的主要作用效应。结论通过计算模拟和实验验证发现了增液汤入血成分的降糖活性效应,为揭示增液汤治疗2型糖尿病的物质基础提供了理论依据。

基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱技术的清利湿热颗粒入血成分分析

目的:阐明灌胃给予清利湿热颗粒后大鼠体内吸收入血的化学成分。方法:借助超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术,采用Agilent ZORBAX RRHD Eclipse XDB-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相体系,梯度洗脱,进样量为2μL,在正、负离子模式下对处理后的空白血清和给药后0.5、1、2、4 h不同时间点的血清进行质谱检测。结果:通过与Natural Products HR-MS/MS Spectral Library 1.0数据库对比、文献分析以及质谱裂解规律从血清样品中鉴定出15个原型成分。结论:本研究为清利湿热颗粒标志性成分的选择提供了依据,初步确定了该产品发挥药效的物质基础,也为进一步揭示清利湿热颗粒的作用机制奠定基础。

基于入血成分和网络药理学探讨降香治疗急性心肌梗死的潜在机制

目的基于降香入血成分,借助网络药理学探讨降香治疗急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的潜在活成分和机制。方法利用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术鉴定降香入血成分,并检索在线数据库查找成分和AMI靶点。借助STRING 11.5数据库与Cytoscape 3.7.0软件对蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络进行构建与分析,进一步通过DAVID数据库进行GO功能富集和KEGG通路注释分析,并对关键靶点进行分子对接验证。结果鉴定降香入血成分24个,并筛选出染料木素、柚皮素等潜在活性成分,以及肉瘤基因(sarcoma gene,SRC)、表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)等关键靶点。富集结果显示,降香治疗AMI参与PI3K/AKT、FOXO等信号通路,以及受体结合、激酶活性等功能的调节。对接结果显示,关键靶点与成分有较好的结合性。结论降香可能通过抗炎、抗氧化和促进血管新生治疗AMI。

基于UHPLC⁃Q⁃Exactive Orbitrap HRMS技术分析黄芪汤颗粒的化学成分与小鼠口服后的入血成分

目的运用超高效液相串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)技术,分析鉴定黄芪汤颗粒的化学成分及小鼠灌胃黄芪汤颗粒后的主要入血成分。方法色谱分离采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱。质谱采用电喷雾电离正离子模式(ESI+)和电喷雾电离负离子模式(ESI-)交替扫描,并自动触发二级质谱扫描功能(Full MS/dd-MS2)采集质谱数据。经Xcalibur 3.0软件获取色谱保留时间以及母离子和碎片离子信息,定性鉴别黄芪汤颗粒的化学成分及小鼠灌胃黄芪汤颗粒后的入血成分及可能的代谢途径。结果综合保留时间、准确分子量、二级碎片信息、对照品比对、文献参考等色谱质谱检测信息,从黄芪汤颗粒中共鉴定出167种化学成分,从小鼠灌胃黄芪汤颗粒后的血清中共检测到甘草素、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷等60种原型成分和43种代谢产物。结论完成了黄芪汤颗粒化学成分及主要入血成分快速鉴定,可为黄芪汤颗粒效应物质解析、质量标准研究及作用机制探讨等提供参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的紫丁香化学成分及入血成分研究

目的:研究紫丁香的化学成分及大鼠灌胃给药紫丁香后大鼠血清中的入血成分。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS技术,色谱条件为Welch XB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm);流动相:0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;流速:0.3 mL/min;柱温:40℃;进样量:2μL。通过对照品比对、结合文献数据及MassBank数据库信息,对紫丁香的化学成分及入血成分进行表征。结果:从紫丁香提取物中推测出38个化学成分,主要为木脂素和倍半萜类成分;从灌胃后大鼠血清中推测出40个入血成分,包括14个原型成分和26个代谢产物。结论:该实验运用UPLC-Q-TOF-MS技术及中药血清药物化学方法,快速分析了紫丁香的化学成分及入血成分,初步探究了其可能的药效物质基础,为紫丁香的进一步开发利用提供参考依据。

基于UPLC-Q/TOF-MS研究广西甜茶在大鼠体内的入血成分

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)法分析大鼠口服广西甜茶后的入血成分,为阐明其活性成分在机体转化和代谢情况提供基础。方法:超声法提取药物;大鼠灌胃给予广西甜茶提取物后,采用眼球后静脉丛取血;收集不同时间段的血浆,通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)法,比较广西甜茶提取物、大鼠空白血浆、灌胃给予广西甜茶的大鼠血浆,初步鉴定和推测灌胃给予广西甜茶后大鼠血浆中的入血成分。结果:本实验共鉴定出50个原型入血成分,主要包括10个多酚类成分,13个黄酮类成分,20个二萜类成分,7个三萜类成分。结论:本实验初步阐明了广西甜茶中的入血成分,为其活性成分在机体转化和代谢情况提供基础,且为广西甜茶的后续开发利用提供了理论依据。