补肾活血方治疗肾虚血瘀型卵巢储备功能下降患者的临床疗效观察

目的观察补肾活血方对肾虚血瘀型卵巢储备功能下降(DOR)患者的治疗效果。方法选取北京妇产医院中医科2021年1月至2022年12月就诊的180例诊断为DOR的肾虚血瘀型患者作为研究对象,采用计算机随机分组法分为雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片组(西药组)、补肾活血方组(中药组)和补肾活血方联合雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片组(联合组),各60例。观察三组治疗前后卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗米勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)、卵巢体积、卵巢动脉和子宫动脉阻力指数(RI)、子宫内膜厚度的变化,比较三组中医证候评分及疗效。结果11例患者(4例来自西药组,3例来自中药组,4例来自联合组)退出研究。6个月后,三组FSH和LH均显著降低,E_(2)和AMH升高(P<0.05);西药组和联合组较中药组FSH降低更显著,E_(2)升高更显著(P<0.01)。治疗后,中药组和联合组卵巢体积增加(P<0.05),AFC显著增加(P<0.01),卵巢动脉RI显著降低(P<0.01);西药组卵巢体积增加不显著(P>0.05),AFC显著增加(P<0.05),卵巢动脉RI显著降低(P<0.05);三组子宫动脉RI均无显著改善(P>0.05)。三组子宫内膜厚度均显著增加(P<0.05),西药组和联合组较中药组增加更显著(P<0.01)。与治疗前相比,三组治疗后中医证候评分均显著降低(P<0.05),且中药组和联合组中医证候评分降低的程度大于西药组(P<0.05)。西药组总有效率为71.43%,中药组为82.46%,联合组为85.96%;联合组的疗效优于西药组(P<0.05)。结论补肾活血方能够通过平衡激素水平、促进排卵和修复子宫内膜对DOR患者产生良好的治疗效果,联合应用雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片可能是治疗DOR的一种行之有效的治疗策略。

补肾活血方调控NF-κB信号通路对膝骨关节炎小鼠软骨组织炎症及细胞凋亡的影响

目的观察补肾活血方(BSHXF)对膝骨关节炎(KOA)小鼠软骨组织炎症及细胞凋亡的影响,探讨BSHXF治疗KOA的作用机制。方法将24只雄性BALB/c小鼠按体重随机分为假手术组、KOA模型组、KOA模型+BSHXF组,每组8只。造模、灌胃干预后,小鼠取血,ELISA检测血清IL-6、iNOS、COX2水平;提取小鼠膝关节软骨组织,HE染色及番红O-固绿染色观察软骨组织病理学情况,TUNEL染色检测软骨组织细胞凋亡情况,Western blot检测Cleaved-Caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达,qRT-PCR检测CollagenⅡ、Aggrecan、ADAMTS-5 mRNA表达,Western blot检测核转录因子-κB(NF-κB)信号通路关键蛋白p-IκBα、IκBα、p-p65、p65的表达。结果与假手术组相比,KOA模型组小鼠膝关节软骨细胞病理改变明显;血清炎症细胞因子IL-6、iNOS和COX2的水平升高,软骨组织细胞凋亡率增加,Cleaved-Caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达降低,CollagenⅡ、Aggrecan的mRNA表达水平降低,ADAMTS-5 mRNA表达升高,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值升高。与KOA模型组相比,KOA模型+BSHXF组膝关节软骨损伤改善、病理变化减轻,炎症细胞因子IL-6、iNOS和COX2的水平降低,软骨组织细胞凋亡率降低,Cleaved-Caspase-9、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,CollagenⅡ、Aggrecan的mRNA表达升高,ADAMTS-5 mRNA表达降低,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值降低。结论BSHXF可抑制NF-κB信号通路,减少炎性因子释放、抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,从而缓解KOA疾病进展。

补肾化痰活血方治疗多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗不孕症的临床研究

[目的]观察补肾化痰活血方治疗多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗(PCOS-IR)不孕症的临床疗效。[方法]将62例肾虚痰瘀型PCOS-IR不孕症患者随机分为治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组,每组各31例。两组均给予基础干预,治疗Ⅰ组给予二甲双胍,治疗Ⅱ组给予补肾化痰活血方,治疗及随访周期均为3个月。统计两组的妊娠及排卵情况,比较两组治疗前后身体质量指数(BMI)、中医证候积分、糖代谢指标[空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]、性激素水平[睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)、LH/FSH、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)]、着床期(排卵后6~9 d)子宫内膜三维超声参数[厚度、分型、容积、血管化指数(VI)、血流指数(FI)、血管化-血流指数(VFI)]和不良反应。[结果]与治疗前比较,治疗后两组的BMI、中医证候积分、FINS、HOMA-IR、LH、LH/FSH水平均降低(P<0.01或P<0.05),且治疗Ⅱ组的中医证候积分降低显著(P<0.01)。与治疗Ⅰ组比较,治疗Ⅱ组的周期排卵率较高,但比较后差异无统计学意义(P>0.05),着床期子宫内膜血流参数VI、VFI水平较高(P<0.05)。治疗结束及随访后,治疗Ⅱ组的临床妊娠率分别为61.54%(16/26)和73.08%(19/26),明显高于治疗Ⅰ组对应时间节点的妊娠率[33.33%(8/24)和41.67%(10/24)],差异有统计学意义(P<0.05),且胚胎停育率更低(P<0.05)。治疗Ⅱ组的不良反应率显著低于治疗Ⅰ组(15.38%vs 41.67%,P<0.05)。[结论]补肾化痰活血方治疗肾虚痰瘀型PCOS-IR不孕症临床效果良好,能够改善胰岛素抵抗及肥胖体征,调节内分泌紊乱,显著增加着床期子宫内膜血流灌注,提高临床妊娠率并改善妊娠结局,且不良反应小,值得推广应用。

“补肾活血方”治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效及其免疫机制研究——附36例临床资料

目的:观察在常规西医治疗的基础上加用补肾活血方治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的临床疗效,并探索免疫机制。方法:将72例CAA患者随机分为治疗组与对照组,每组36例。对照组采用常规西医治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用中药汤剂补肾活血方口服,2组疗程均为2个月。比较2组患者治疗前后血常规指标、免疫指标(血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞亚群比例以及CD4^(+)/CD8^(+)值)以及血清转录因子T-bet(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)等炎症指标变化情况;比较2组患者治疗前后Th1、Th2细胞比例以及Th1/Th2值变化情况;疗程结束后比较2组患者临床疗效。结果:治疗后2组患者外周血血小板(PLT)计数、白细胞(WBC)计数、血红蛋白(Hb)含量、网织红细胞计数百分比(RET%)、中性粒细胞(ANC)计数均明显高于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显高于对照组(P<0.05)。治疗后2组患者CD4^(+)T淋巴细胞亚群比例、CD4^(+)/CD8^(+)值明显高于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显高于对照组(P<0.05);治疗后2组患者CD3^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞亚群比例明显低于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显低于对照组(P<0.05)。治疗后2组患者GATA3水平均明显高于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显高于对照组(P<0.05);治疗后2组患者T-bet、IFN-γ、IL-2水平均明显低于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显低于对照组(P<0.05)。治疗后2组患者Th2细胞比例明显高于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显高于对照组(P<0.05);治疗后2组患者Th1细胞比例、Th1/Th2值均明显低于本组治疗前(P<0.05),治疗组明显低于对照组(P<0.05)。疗程结束后治疗组临床疗效总有效率为91.67%,明显高于对照组的72.22%(P<0.05)。治疗组不良反应发生率为8.33%,明显低于对照组的27.78%(P<0.05)。结论:在常规西医治疗的基础上加用补肾活血方能明显改善CAA患者的血常规指标和炎症状况,并能调节免疫因子,具有减毒增效的作用,其机制与促进Th1/Th2平衡有关。

补肾健脾活血方调控Apaf-1/CHOP-Caspase-9/Bcl-2通路抑制成骨细胞氧化应激

目的探讨补肾健脾活血方对减轻大鼠成骨细胞氧化应激损伤和调控线粒体介导的细胞凋亡的机制。方法提取大鼠原代成骨细胞,通过CCK8实验检测补肾健脾活血方干预下对成骨细胞增殖活性的影响、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨细胞ALP活性、茜素红染色检测成骨细胞的矿化情况、实时定量PCR检测Apaf-1和CHOP基因的mRNA表达、蛋白质印迹检测Caspase-9和Bcl-2蛋白表达量。结果CKK8实验和碱性磷酸酶染色表明氧化应激损伤的大鼠成骨细胞增殖活性显著降低,成骨分化受抑制,同时Apaf-1和CHOP的mRNA表达以及Caspase-9的蛋白表达明显增加(P≤0.01),Bcl-2蛋白表达则显著减少(P≤0.01);经补肾健脾活血方干预后,成骨细胞增殖活性得到明显的增强、成骨分化增加,Apaf-1和CHOP的mRNA及Caspase-9的蛋白表达均显著减少(P<0.05),而Bcl-2的蛋白表达则显著升高(P≤0.0001)。结论补肾健脾活血方可以促进成骨细胞增殖和成骨分化,显著降低Apaf-1和CHOP的mRNA及Caspase-9的蛋白表达,升高Bcl-2的蛋白表达量。补肾健脾活血方在减轻成骨细胞的氧化应激损伤和调控线粒体介导的细胞凋亡中起着重要作用。

基于JNK通路探讨补肾活血方对大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨补肾活血方(Bushen Huoxue Formula,BSHXF)通过c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路对大鼠骨关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡的影响。方法 采用白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)诱导体外分离培养的大鼠软骨细胞构建体外OA模型,并使用不同浓度的BSHXF干预处理。使用MTT法测定细胞活力;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术评估细胞凋亡情况;Western bolt检测凋亡相关蛋白裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)水平和JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)蛋白水平。试剂盒检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平;ELISA法检测细胞上清液中促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量。结果 (1)与对照组相比,模型组软骨细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);模型组Cleaved Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,BSHXF治疗组软骨细胞活力升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.01);BSHXF治疗组Cleaved Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01)。(2)与对照组相比,模型组细胞中ROS和MDA的相对含量显著升高(P<0.01),GSH的相对含量显著降低(P<0.01);模型组细胞中TNF-α和IL-6的含量均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,BSHXF治疗组细胞中ROS和MDA的相对含量显著降低(P<0.01),GSH的相对含量显著升高(P<0.01);BSHXF治疗组细胞中TNF-α和IL-6的含量均显著降低(P<0.01)。(3)与溶剂对照组相比,激活剂对照组的p-JNK、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.01);BSHXF治疗组和溶剂对照组两组间细胞增殖、凋亡率和凋亡相关蛋白表达(Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2)情况差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)与溶剂对照组相比,激活剂对照组的ROS和MDA水平显著升高(P<0.01),而GSH水平显著降低(P<0.01),TNF-α、IL-6含量升高(P<0.05);BSHXF治疗组和溶剂对照组两组间ROS相对含量、MDA、GSH水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 BSHXF通过抑制JNK信号通路激活抑制IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡,改善氧化应激和炎症反应。

滋阴凉血方联合泼尼松对免疫性血小板减少性紫癜小鼠免疫功能及ST2/IL-33通路的影响

目的:探讨滋阴凉血方联合泼尼松对免疫性血小板减少性紫癜小鼠免疫功能及ST2/IL-33通路的影响。方法:40只BALB/c小鼠,其中32只采用注射抗血小板血清构建免疫性血小板减少性紫癜小鼠模型,造模成功后,随机分为模型、滋阴凉血方(0.2 ml/10 g)、泼尼松(0.2 ml/10 g)和滋阴凉血方+泼尼松(0.2 ml/10 g)共4组,每组8只,剩余8只小鼠设为空白组。分别按剂量灌胃给药,模型组与空白组灌胃等量生理盐水,1次/d×2周。采集血样和脾脏组织,使用全自动血液分析仪测定外周血小板数;HE染色观察脾脏组织病理学变化;酶联免疫吸附法检测血清转化生长因子β、白细胞介素(IL)-17及外周血血小板生成素水平;Western blot检测脾脏组织IL-33、s ST2、ST2表达;流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞数。结果:与空白组相比,模型组小鼠血小板数、血小板生成素、转化生长因子β水平及Treg细胞均明显降低(P<0.05),IL-17水平、Th17细胞及IL-33、s ST2、ST2蛋白表达明显增加(P<0.01);与模型组相比,滋阴凉血方+泼尼松组血小板数、血小板生成素、转化生长因子β水平及Treg细胞均明显上升(P<0.05),IL-17水平、Th17细胞及IL-33、s ST2、ST2蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:滋阴凉血方+泼尼松可有效地调节Th17/Treg平衡,进而有效改善免疫性血小板减少性紫癜,其机制可能与调节ST2/IL-33信号通路有关。

疏肝理气养血方联合氢溴酸西酞普兰治疗卒中后失眠伴抑郁老年患者的疗效观察及对睡眠质量和神经递质的影响

目的:观察疏肝理气养血方联合氢溴酸西酞普兰治疗卒中后失眠伴抑郁老年患者的疗效及对睡眠质量和神经递质的影响。方法:选取2021年5月~2023年2月某院收治的114例卒中后失眠伴抑郁的老年患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与观察组,每组57例。对照组给予氢溴酸西酞普兰片,观察组在对照组治疗基础上加用疏肝理气养血方。比较两组神经递质的水平[5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)、甘氨酸、γ-氨基丁酸],评估两组美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分、中医症状评分、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分、日常生活能力(ADL)评分的差异。比较两组临床治疗总有效率并记录治疗期间两组不良反应的发生情况。结果:治疗后,两组患者5-HT、甘氨酸、γ-氨基丁酸均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05);SP较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);NIHSS评分、PSQI评分、HAMD评分、中医症状评分均较治疗前降低,且观察组PSQI评分、HAMD评分、中医症状评分低于对照组(P<0.05);ADL评分较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组临床治疗总有效率(91.23%)高于对照组(77.19%,P<0.05)。治疗期间两组患者不良反应总发生率比较无统计学差异。结论:疏肝理气养血方联合氢溴酸西酞普兰可有效改善卒中后失眠伴抑郁老年患者的抑郁和失眠症状,提高睡眠质量,调节神经递质的表达,提高临床疗效,且不增加不良反应的发生风险。

滋肾活血方对血管性痴呆大鼠认知功能障碍的治疗作用

目的 探究滋肾活血方改善血管性痴呆(vascular dementia, VD)大鼠认知功能障碍的分子机制。方法 采用双侧颈总动脉闭塞法(bilateral common carotid artery occlusion, BCCAO)构建VD大鼠模型,随机分为假手术组(sham组)、模型组(VD组)、滋肾活血方高剂量组(15.2 g/kg)、滋肾活血方中剂量组(7.6 g/kg)、滋肾活血方低剂量组(3.8 g/kg)、奥拉西坦组(阳性对照)。通过Morris水迷宫实验记录大鼠的逃避潜伏时间以及穿越平台的次数评估大鼠认知功能;HE染色观察海马组织病理学改变和炎性浸润;尼氏染色评估海马神经元损伤;免疫荧光检测海马组织小胶质细胞M1/M2极化情况;ELISA试剂盒检测海马组织促炎因子(TNF-α、IL-1β)和抗炎因子(TGF-β、IL-4)的水平;Western blot法检测TLR4、p65核蛋白水平。结果 与sham组相比,VD组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.001),穿越平台次数减少(P<0.001),海马神经元排列不规则,炎性细胞浸润增多,Iba-1、CD16/32以及CD206的水平,促炎因子(TNF-α、IL-1β),抗炎因子(TGF-β、IL-4)水平以及TLR4和p65核蛋白水平均显著升高(P<0.001)。与VD组相比,滋肾活血方高、中、低剂量组和奥拉西坦组大鼠的逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.01),大鼠神经元病理变化得到改善,Iba-1、CD16/32以及CD206的水平,促炎因子(TNF-α、IL-1β)以及TLR4和p65核蛋白水平的表达均明显降低(P<0.01),抗炎因子(TGF-β、IL-4)水平上调(P<0.01)。结论 滋肾活血方通过抑制TLR4/NF-κB信号通路促进小胶质细胞M2型极化缓解VD大鼠认知功能障碍。

阿伐那非联合助阳活血方治疗勃起功能障碍的临床研究

目的:探讨阿伐那非联合助阳活血方治疗勃起功能障碍的疗效及安全性。方法:选取2022年6月至2023年5月甘肃省妇幼保健院收治的勃起功能障碍患者108例,以随机数表法分为对照组(54例)和观察组(54例)。对照组患者给予阿伐那非片治疗,观察组患者在对照组的基础上联合助阳活血方治疗。比较两组患者的临床疗效和不良反应,在治疗前后评估并比较两组患者的勃起硬度评分(EHS)、国际勃起功能障碍指数(IIEF-5)以及夜间勃起功能。结果:观察组患者的总有效率为92.59%(50/54),高于对照组的77.78%(42/54),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的EHS评分和IIEF-5评分均高于治疗前,且观察组患者高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的夜间勃起总持续时间、根部硬度≥60%持续时间和头部硬度≥60%持续时间长于治疗前,勃起次数、根部周径变化比和头部周径变化比高于治疗前;且观察组患者的夜间勃起总持续时间、根部硬度≥60%持续时间和头部硬度≥60%持续时间长于对照组,勃起次数、根部周径变化比、头部周径变化比高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的不良反应发生率为11.11%(6/54),与对照组的12.96%(7/54)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿伐那非联合助阳活血方治疗勃起功能障碍的临床疗效较好,可有效改善患者的勃起功能,具有较好的安全性。

基于JAK/STAT3通路探讨补肾活血方改善单侧输尿管梗阻大鼠炎症和肾纤维化

目的:观察补肾活血方(BSHXF)对单侧输尿管梗阻大鼠(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾纤维化和炎症的治疗效果,揭示其抗炎及延缓肾纤维化的机制。方法:32只8周龄雌性SD大鼠根据随机数字表分为假手术组(Sham组)、单侧输尿管梗阻组(UUO组)、补肾活血方低剂量组(BSHXF-L组)和补肾活血方高剂量组(BSHXF-H组)。造模后第2天开始,连续灌胃干预21 d,BSHXF-L组和BSHXF-H组给予相应剂量补肾活血方汤剂,Sham组和UUO组给予与BSHXF组等体积的生理盐水。干预结束后,记录24 h尿量,全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮、尿蛋白、尿肌酐和肾功能指数;采用HE和Masson染色检测肾脏病理损伤和纤维化程度;通过免疫组化染色分析各组TGF-β和TNF-α;Western blotting检测各组TGF-β_(1)、α-SMA、JAK、STAT3、p-STAT3、TNF-α、Caspase-3和Bax的蛋白表达情况。结果:与UUO模型组相比,BSHXF-L组和BSHXF-H组能明显明显改善UUO大鼠的肾功能,降低大鼠肾组织中TGF-β_(1)和α-SMA蛋白表达水平,抑制JAK、STAT3和p-STAT3表达,减少炎症细胞浸润和纤维组织以及胶原的增生,显著降低大鼠的肾脏指数和TNF-α等炎症指标。结论:补肾活血方可通过抑制JAK/STAT3通路激活,改善UUO大鼠肾功能,减轻其肾脏炎症水平、肾脏指数,延缓肾纤维化进程。

基于FXR-Srebp1c-FAS通路及CD36探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病的机制

目的 以内源性脂肪酸合成相关法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)-固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotein-1c,Srebp1c)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)通路及外源性脂肪酸摄入相关的白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)为切入点,探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、祛痰活血方组和易善复组,每组各10只。模型组、祛痰活血方组和易善复组给予高脂饲料喂养,4周后祛痰活血方组和易善复组开始给药干预,给药8周后取各组小鼠血清用于生化检测;肝组织用于病理、肝脏总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量及FXR、Srebp1c、FAS、CD36基因及蛋白表达的检测。结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝质量明显增加(P<0.05);肝组织病理结果及肝脏TC、TG含量的升高(P<0.01)均提示明显脂肪变性;肝组织FXR、Srebp1c的m RNA表达水平,以及CD36的m RNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01),FAS蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,祛痰活血组小鼠体质量、肝质量均明显降低(P<0.01);肝组织脂肪变性明显减轻;肝组织中FXR m RNA表达明显升高(P<0.01),Srebp1c、FAS、CD36的m RNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 外源性脂肪酸摄入增加可能是高脂引起的NAFLD的主要成因,祛痰活血方既抑制外源性脂肪酸摄入,亦减少内源性脂肪酸合成,双向调节改善NAFLD。

基于Akt/mTOR信号通路探讨补肾活血方对去卵巢大鼠软骨细胞自噬的影响

目的:研究补肾活血方是否可以通过调控Akt/mTOR信号通路促进去卵巢大鼠软骨细胞自噬反应来保护关节软骨。方法:选取30只SPF级12周龄雌性SD大鼠,体重(247.0±7.0)g,先随机选择6只为空白对照组,剩余大鼠采用卵巢切除术结合右膝关节腔注射碘乙酸钠(monosodium iodoacetate,MIA)建立绝经后膝骨关节炎模型,随机分为模型组、BSHXR-L组、BSHXR-M组、BSHXR-H组,每组6只。运用肉眼观察评分、番红O-固绿染色、免疫组化等方法明确补肾活血方对大鼠关节软骨损伤的保护作用,Western-blot检测自噬相关蛋白的表达,qPCR检测Akt、mTOR及下游自噬基因的相对表达。结果:造模后BSHXR(L、M、H)各组均可减轻软骨组织形态学损伤,免疫组化示Collagen-Ⅱ、Aggrecan表达逐渐升高,基质金属蛋白酶-13(matrix metallopriteinase-13,MMP-13)表达逐渐降低,其中BSHXR-M组和BSHXR-H组与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Western-blot结果示BSHXR(L、M、H)各组自噬通路蛋白p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR受到抑制,下游蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ表达逐渐升高,而p62逐渐降低,呈剂量效应。qPCR结果示BSHXR(L、M、H)各组均可促进Beclin-1、LC3ⅡmRNA的相对表达,抑制p62、Akt、mTOR mRNA的相对表达,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血方可以通过抑制Akt/mTOR信号通路增强软骨细胞自噬反应,进而发挥保护软骨的作用。

补肾活血方对脂多糖诱导的软骨细胞炎症损伤的影响

目的观察补肾活血方(BSHXF)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的软骨细胞炎症及凋亡的影响,探讨BSHXF治疗骨关节炎的作用机制。方法制备空白血清及BSHXF含药血清。采用LPS诱导C28/I2人正常软骨细胞,构建软骨细胞炎症模型。将细胞分为空白组、LPS模型组、LPS+BSHXF组,空白组以含10%空白血清的培养基培养,LPS模型组以含10μmol·L^(-1 )LPS和10%空白血清培养基培养,LPS+BSHXF组以含10μmol·L^(-1 )LPS和10%含药血清培养基培养。各组均干预48 h后,CCK-8法检测细胞活力,LDH法检测细胞毒性,ELISA法检测细胞培养基上清液中IL-6、iNOS和COX2的水平,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路关键蛋白p-IκBα、IκBα、p-p65、p65的表达。结果与空白组相比,LPS模型组软骨细胞活力降低,细胞上清液中LDH水平升高,IL-6、iNOS和COX2的水平升高,细胞凋亡率增加,Cleaved-Caspase-9及Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值升高。与LPS模型组相比,LPS+BSHXF组软骨细胞活力增加,细胞上清液中LDH水平降低,IL-6、iNOS和COX2的水平降低,细胞凋亡率降低,Cleaved-Caspase-9、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值降低。结论BSHXF可提升LPS诱导的损伤软骨细胞的活性,减轻LPS对软骨细胞的毒性,减少炎症因子释放、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路,进而发挥软骨保护作用。

面部激素依赖性皮炎患者外周血单一核细胞SOCS1、CKLF1的表达及祛风清热凉血方的疗效

目的:探讨SOCS1、CKLF1在面部激素依赖性皮炎(FCDD)患者与正常人外周血单一核细胞(PBMC)中的表达差异及其与部分相关实验室指标和病情评分的相关性;探讨祛风清热凉血方在FCDD中的治疗作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,对50例FCDD组与40例正常对照组空腹PBMC中SOCS1、CKLF1 mRNA的表达量进行测定分析;并对FCDD组予祛风清热凉血方进行治疗,观察治疗前后SOCS1、CKLF1 mRNA水平。结果:PCDD组PBMC中SOCS1、CKLF1 mRNA的表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PBMC中SOCS1、CKLF1 mRNA表达量与FCDD病情评分呈正相关(P<0.05);FCDD热毒炽盛证患者外周血中SOCS1、CKLF1 mRNA表达量经祛风凉血方治疗2 w时较治疗前、治疗4 w时较治疗2 w时均明显降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:SOCS1,CKLF1可能参与了FCDD的发病过程;祛风清热凉血方对FCDD的治疗具有良好的疗效。

小针刀疗法联合自拟接骨活血方治疗高龄膝关节骨性关节炎

目的探讨小针刀疗法联合自拟接骨活血方治疗高龄膝关节骨性关节炎的效果。方法选取2021年11月-2023年3月本院收治的84例高龄膝关节骨性关节炎患者为研究对象,利用随机数字表法将其分为2组,观察组和对照组,各42例,对照组采用小针刀疗法治疗,观察组采用小针刀疗法联合自拟接骨活血方治疗,比较2组患者的中医证候积分、膝关节功能评分、炎症因子、骨代谢指标及临床疗效。结果治疗前,2组中医症状积分、莱氏(Lysholm)评分、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、白介素-6(IL-6)水平、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)水平、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平、骨钙素(BGP)水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,观察组中医症状积分、TNF-α水平、IL-6水平低于对照组(P<0.05),观察组Lysholm评分、BALP水平、IGF-1水平、BGP水平高于对照组(P<0.05);观察组总有效率高于对照组(P<0.05);2组患者不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论小针刀疗法联合自拟接骨活血方能够有效降低患者中医证候积分,改善膝关节功能,降低疼痛程度,提高临床疗效,值得推广。

益髓破血方对脑出血小鼠肠道菌群和PI3K/Akt信号通路调节的作用机制研究

目的:探讨益髓破血方对脑出血小鼠PI3K/Akt信号通路的调节及肠道菌群的影响。方法:SPF级C57BL/6J小鼠150只,随机分为假手术组、模型组和中药组,每组48只,模型组与中药组自体血注入法复制脑出血小鼠模型,假手术组只插入微量注射针数分钟不注血。灌胃干预后于1、3、7 d取材,观察小鼠神经功能评分,干湿重法观察脑含水量,HE染色观察脑组织病理学变化,ELISA法检测TNF-α、IL-4、IL-18含量,Western blot法检测PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平,16s rDNA基因测序观察各组小鼠肠道菌群多样性、种属变化。结果:与模型组比较,中药组3 d、7 d神经功能评分与脑含水量降低(P<0.05),变性神经元减少(P<0.05),TNF-α、IL-18浓度降低(P<0.05),IL-4浓度升高(P<0.05),p-PI3K、p-Akt表达量下降,7 d较3 d更为显著(P<0.05)。模型组小鼠菌群多样性降低,瘤胃球菌科等相对丰度增加,益髓破血方可丰富菌群多样性,使乳酸杆菌属等相对丰度增加。结论:益髓破血方通过增加肠道有益菌,降低致病菌,丰富菌群多样性,以及调控PI3K/Akt通路改善脑出血继发性损伤。

祛风清热凉血方介导CTGF、TGFβ1参与银屑病的治疗

目的观察祛风清热凉血方治疗寻常型银屑病的临床疗效,探讨其对外周血结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子(TGF)β1表达的调控。方法40例中医辨证为寻常型银屑病的患者为治疗组,20例健康人为健康对照组,采用免疫组织化学方法分别检测两组皮肤组织中CTGF、TGFβ1表达;收集两组外周血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒与荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组外周血中CTGF、TGFβ1表达;治疗组予以祛风清热凉血方内服配合外用卤米松、卡泊三醇治疗,检测患者治疗前后外周血中CTGF、TGFβ1表达并对病情严重程度进行银屑病面积严重程度指数(PASI)评分。结果CTGF、TGFβ1在寻常型银屑病皮肤组织中呈高表达。治疗组外周血CTGF、TGFβ1 mRNA明显高于健康对照组(P<0.05)。治疗组治疗后皮损PASI评分及外周血中CTGF、TGFβ1水平较治疗前显著下调(P<0.05);CTGF、TGFβ1表达与PASI评分呈显著正相关(P<0.01)。结论祛风清热凉血方对外周血CTGF、TGFβ1的下调作用可能是其治疗银屑病的作用机制之一。

基于网络药理学探讨益气化痰活血方治疗甲状腺功能减退症的作用机制

目的:基于网络药理学探讨益气化痰活血方治疗甲状腺功能减退症的作用机制。方法:采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、化学专业数据库、本草组鉴平台筛选出益气化痰活血方的活性成分,利用Swiss Target Prediction数据库预测活性成分的潜在靶点。利用Gene Cards数据库、Dis Ge NET数据库和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索甲状腺功能减退症的相关靶点。利用STRING数据库对药物与疾病交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用网络构建,获得益气化痰活血方治疗甲状腺功能减退症的关键靶点。利用Metascape对关键靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路与基因本体论(GO)功能富集分析。结果:得到药效成分46个、药物靶点266个、甲状腺功能减退症靶点1 294个,最终获得关键靶点69个、KEGG通路2条。益气化痰活血方治疗甲状腺功能减退症主要成分为槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚等,关键靶点为白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt Serine/Threonine Kinase,Akt)、血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA),关键的信号通路可能包括磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3-kinase-Akt,PI3K-Akt)信号通路、晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路等。结论:本研究初步揭示了益气化痰活血方多成分、多靶点、多途径治疗甲状腺功能减退症的机制,为益气化痰活血方的临床开发利用提供了依据。

健脾清热活血方对胃癌细胞的干预作用及机制研究

目的探索健脾清热活血方(JQH)对胃癌细胞的干预作用。方法通过CCK-8、凋亡流式检测、划痕实验、裸鼠皮下成瘤试验,研究JQH对胃癌细胞的干预作用,并利用网络药理学获取其可能作用机制。结果经CCK-8检测,JQH干预组在24、48、72 h的增殖率均低于空白组;经流式细胞仪检测,JQH干预组凋亡细胞百分比高于空白组;经划痕实验,JQH干预组胃癌细胞24、48 h的愈合百分比(迁移能力)均低于空白组;JQH干预组裸鼠皮下瘤体的体积及重量均低于空白组,中、高剂量组抑瘤效果与5-Fu阳性药物对照组相当。网络药理学研究显示JQH可通过多靶点干预胃癌细胞,其作用机制可能涉及磷酸化、蛋白磷酸化、细胞增殖及凋亡的调控等功能,可通过调控PI3K/AKT通路抑癌。结论JQH可通过多途径、多通路影响胃癌细胞的增殖、迁移和凋亡。