急性缺氧对肺动脉内皮细胞血栓素合酶基因表达及PGI_2、TXA_2代谢产物的影响

为进一步研究 PGI2 和 TXA2 在慢性缺氧性肺动脉高压和机体对慢性缺氧习服过程中的作用 ,动态观察了慢性缺氧进程中肺动脉内皮细胞 (PAEC)血栓素合酶 (TXS)基因表达及 PGI2 、TXA2 代谢产物的变化。结果显示 :常氧培养的 PAEC,急性缺氧后 TXS、 6 -酮 - PGF1α、TXB2 均增加 ,以 6 -酮 - PGF1α增加更明显 ,TXA2 / PGI2 比值降低 ;慢性缺氧 [PO2 (5 .3± 0 .7) k Pa]培养的 PAEC TXS、 6 -酮 - PGF1α、TXB2 均高于同代常氧组 ,复氧再急性缺氧 ,6 -酮 - PGF1α在第 2、 4代减少 ,第 6代不变 ,TXS、TXB2 在第 4代增加 ,第 6代减少 ;TXA2 / PGI2 在第 2、 4代增加 ,第 6代减少。提示在慢性缺氧的不同阶段 ,由急性缺氧所致 TXS、 6 -酮 - PGF1α、 TXB2 及 TXA2 / PGI2

反义核酸抑制血栓素合酶的基因表达

目的与方法：针对大鼠血栓素合酶基因设计并合成的三条反义寡脱氧核苷酸片段（ＯＤＮⅠ，ＯＤＮⅡ，ＯＤＮⅢ）与体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞温育２４ｈ，筛选能有效抑制血栓素合酶及ＴＸＡ２生成的片段。结果：ＯＤＮⅠ组培养基中血栓素Ａ２含量在三个浓度点（４，８，１２μｍｏｌ／Ｌ）（１０４６，９１５，８１５ｐｇ／μｇｃｅｌｐｒｏｔｅｉｎ）均较对照组（１２７０，１２８４，１２１２ｐｇ／μｇｃｅｌｐｒｏｔｅｉｎ低（Ｐ＜０．０１）。ＯＤＮⅡ，ＯＤＮⅢ组培养基中ＴＸＡ２含量与对照组相比无显著差异。细胞ＲＮＡ斑点杂交结果显示：ＯＤＮⅠ组斑点积分光密度较对照组明显降低，而ＯＤＮⅡ，ＯＤＮⅢ组斑点积分光密度与对照组相比无明显差异。

缺氧时猪肺动脉平滑肌细胞中环氧合酶和血栓素合酶基因表达变化研究

应用培养的猪肺动脉平滑肌细胞经分子杂交和放射免疫检测发现:缺氧可使环氧合酶（COX）基因表达增加，缺氧6、24、48h，环氧合酶-2（COX-2）和环氧合酶-1（COX-1）mRNA水平分别是常氧组的3、1、1倍和1、2、2.7倍。并在不同时间缺氧（6、24、48h），平滑肌细胞条件培养基中6-酮-前列腺素Flα含量也显著高于相应对照组（P＜0.05），但缺氧对血栓素合酶（TXS）基因表达及血栓素入生成无明显影响。结果表明:缺氧可使平滑肌细胞COX基因表达及前列环素（PGI2）自分泌增加，它可能在平滑肌细胞缺氧收缩及增生反应中起调节作用。并且从缺氧时COX和PGI2生成的动态变化说明，缺氧时PGI2生成的迅速增多主要与COX-2mRNA表达增加有关。

核酶抑制N_2a细胞血栓素合酶mRNA的表达

根据“锤头状结构”核酶的设计原理 ,以小鼠全长血栓素合酶 (TXS) m RNA为靶系列 ,计算机预测其二级结构 ,设计核酶 ,并人工合成核酶对应的 DNA片段 ,克隆入真核表达载体 p EGFP- C1,经脂质体转染 N2 a细胞 ,用原位杂交的方法检测 TXS m RNA的表达水平。结果表明 :针对小鼠 TXS m RNA的核酶 R15、R5 44 ,对内毒素刺激的 N2 a细胞 TXS m RNA的表达具有显著的抑制作用 ,核酶 R15、R5 44可望用于基因治疗 ,抑制病理条件下 TXS m

血栓素合酶基因结构及其调控

血栓素合酶（TXS）基因是目前所分离的最大的细胞色素P450的基因家族：13个外显子，12个内含子，跨越193kb。TXS基因有多个转录起始点，有数种转录因子结合位点，其标准的TATA盒不具功能性。TXSmRNA前体经不同剪接产生两种mRNAs，仅一种编码产生功能性的IXS-I。它含有半胱氨酸残基区域，即血红素结合域。4种哺乳动物组织TXTcDNA已克隆成功。

红细胞生成素3'-增强子调节缺氧时内皮细胞血栓素合酶基因表达

目的：研究缺氧对人脐静脉内皮细胞珠ＥＣ－３０４ＴＸＳ基因的影响及ＥＰＯ３′增强子在其中的作用。方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３′－增强子野生片断及点突变片断，借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ＥＣ－３０４，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定常氧与缺氧条件下培养６小时的细胞血栓素合酶（ＴＸＳ）ｍＲＮＡ。结果：ＥＣ－３０４常氧培养有ＴＸＳ基因表达缺氧６小时ＴＸＳ基因表达明显增强；而细胞导入野生ＥＰＯ３′－增强子片断可阻断缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强，而点突变片断无此作用。结论：在ＴＸＳ基因序列中，可能存在类似ＥＰＯ３′－增强子片断，缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强可能主要通过缺氧诱导因子－１与ＴＸＳ基因序列中类似ＥＰＯ３′－增强子片断结合。

血栓素合酶基因Pro1770Leu多态性与新疆维吾尔族心肌梗死的相关性研究

目的 探讨血栓素合酶基因CYP5A1 Pro1770Leu多态性与新疆维吾尔族心肌梗死的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对315例心肌梗死患者和218名健康受试者血栓素合酶基因第13外显子Pro1770Leu位点进行分析,同时进行血清血栓素B2（thromboxane B2,TXB2）水平测定.结果 血栓素合酶基因第13外显子Pro1770Leu在病例组和健康对照组中基因型频率分别为：CC型0.933和0.977,TC型0.067和0.023,病例组TC型高于对照组（P＜0.05）,且T等位基因频率显著高于对照组（P＜0.05）,血清TXB2水平病例组较对照组明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;TC基因型携带者血清TXB2水平较CC基因型者增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 血栓素合酶基因第13外显子Pro1770Leu基因多态性和新疆维吾尔族心肌梗死的发生具有相关性,可能与基因变异导致的血清TXB2水平增高有关.

反义寡核苷酸对内毒素刺激的巨噬细胞血栓素A_2合成的影响

目的 筛选有效抑制内毒素刺激的巨噬细胞血栓素合酶基因表达和血栓素 A2 生成的反义寡脱氧核苷酸片段。方法 人工合成的 3条反义寡核苷酸片段 (ODN 、ODN 、ODN )和内毒素刺激的大鼠腹腔巨噬细胞共温育 2 4h,以放射免疫方法检测血栓素 A2 的稳定代谢产物血栓素 B2 的含量 ;以分子杂交技术检测血栓素合酶m RNA的表达水平。结果 ODN 组血栓素 B2 的含量为 (6 9.7± 10 .9) pg/ μg细胞蛋白 ,明显低于对照组的 (10 0 .6± 2 8.6 ) pg/ μg细胞蛋白 (P<0 .0 5 ) ;且血栓素合酶 m RNA水平也明显低于对照组。ODN 组、ODN 组血栓素 B2水平和血栓素合酶 m RNA水平均与对照组无明显差异。结论 ODN 能有效抑制内毒素刺激的巨噬细胞血栓素A2 的合成。

血栓素受体参与子痫前期的发病

目的探讨血栓素受体(TPr)与子痫前期发病机制的关系。方法用免疫组化和实时荧光定量PCR(real-time PCR)的方法检测36例子痫前期孕妇(病例组)和34例正常妊娠孕妇(对照组)胎盘中血栓素合酶(TXS)、血栓素受体(TPr)和非吞噬细胞氧化酶1(NOX1)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胎盘TXA2的表达。结果TXS和TPr蛋白主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛血管内皮细胞的胞质中,NOX1蛋白主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞、绒毛血管内皮细胞及间质细胞的胞质中。子痫前期组胎盘TXS和NOX1蛋白、mRNA表达和TXA2表达均强于对照组(P<0.05)。子痫前期TXA2表达与新生儿体质量呈负相关(P<0.01)。TXA2表达与NOX1 mRNA表达呈正相关(P<0.05)。结论 TXA2可能通过TPr通路导致胎盘产生过量ROS并向母体血液循环释放,参与子痫前期的发病过程。