血浆低分子量蛋白与多肽的研究进展

血浆是临床上使用频率最高的体液样本,具有采样无创、使用便捷以及内含物丰富等特点,是挖掘疾病相关潜在生物标志物的重要来源。血浆中低分子量蛋白与多肽(low molecular weight proteins and peptides,LMWPs)包括细胞因子、生长因子、多肽类激素和蛋白质降解产物等,其以分子质量较小、序列可表征、来源广泛等优势,得到了研究人员的青睐。近年来,随着高分辨率、高灵敏度质谱仪与计算科学的不断发展,新技术新方法的融入,LMWPs相关研究也有了新的发展。本文结合当前本领域的研究热点,介绍了血浆LMWPs的分类,包括完整小蛋白、蛋白质降解物、神经肽、免疫多肽、载体蛋白结合的LMWPs和小开放阅读框编码的多肽,同时总结了血浆LMWPs在富集方法、研究策略、功能研究以及疾病相关生物标志物方面的研究进展,并对血浆LMWPs面临的挑战和未来的研究方向进行了讨论。

纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质

将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA

血纤蛋白粘附肽与低分子量单链尿激酶融合产物活性分析

人工合成了血纤蛋白粘附肽基因，构建了粘附肽与低分子量单链尿激酶ｃＤＮＡ的融合基因，在大肠杆菌中表达了融合基因。融合基因表达产物的抗原性和天然尿激酶相同，并具有尿激酶的溶纤活性和粘附肽的抗纤维蛋白单体聚合的功能。

低分子量单链尿激酶与血纤蛋白粘附肽融合基因的构建、表达及产物活性分析

低分子量单链尿激酶(scu-PA-32)可通过激活纤溶酶原转变成纤溶酶溶解血栓,其溶栓具有一定的选择性,出血副作用比双链尿激酶小,但缺少对纤维蛋白的特异亲和力;2种血纤蛋白粘附肽(四肽A4;十二肽A12)都可和纤维蛋白特异性地结合,具有抗纤维蛋白单体聚合的功能,并因此有一定的抗血栓形成作用。

血纤蛋白粘附肽与低分子量单链尿激酶融合基因在大肠杆菌中的表达

人工合成了血纤蛋白粘附肽基因,构建了粘附肽与低分子量单链尿激酶cDNA的融合基因,在大肠杆菌中表达了融合基因。融合基因表达产物的抗原性和天然尿激酶相同,并具有尿激酶的溶纤活性和粘附肽的抗纤维蛋白单体聚合的功能。

内外表面修饰介孔材料的制备及其在低分子量蛋白质富集中的应用

介孔材料由于其具有高度规则的孔径结构和一系列优良的物理化学性质,使其对复杂基质中选择性萃取低分子量蛋白质和多肽方面具有较大的优势和发展潜力。本研究采用共沉淀法结合后修饰法制备了一种介孔内表面修饰反相苯基基团、外表面修饰烷基二醇基的硅基介孔材料,并对其结构及选择性富集性能进行了考察。傅立叶变换红外光谱图表明,苯基和烷基二醇基成功修饰到介孔材料上;萃取实验结果表明,内外表面的双重修饰使其对标准蛋白、人血浆等复杂样品中低分子量蛋白质(分子量小于10 kDa)具有良好的富集选择性。

低分子量蛋白尿——Dent病

近年来随着医学飞速的发展，低分子量蛋白尿逐渐受到人们的重视，所谓低分子量蛋白是指由尿中排出的分子质量小于40000d的蛋白质，可通过正常肾小球基底膜或由肾单位分泌漏人尿中，包括尿β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、溶菌酶、视黄醇结合蛋白及多肽类激素如甲状旁腺素、胰岛素等。正常情况下，

海洋胶原低聚肽对食管癌术后患者血浆蛋白及并发症的影响

目的探讨在肠内营养中添加海洋胶原低聚肽对食管癌术后患者血浆蛋白及相关并发症的影响。方法按照研究纳入和排除标准,将120例食管癌患者,随机分为试验组和对照组,每组60例。两组患者均于术后24小时内进行早期肠内营养治疗,其中试验组患者肠内营养液中添加了海洋胶原低聚肽6g,3次/d,以替代部分蛋白质供给;对照组患者肠内营养液中未添加海洋胶原低聚肽,两组患者肠内营养液均按照相同能量和蛋白质供给标准进行配制。观察两组患者术后第7天血浆白蛋白、前白蛋白水平,肺部感染、吻合口瘘发生率,以及体重丢失程度和术后住院时间。结果两组患者术后第7天血浆白蛋白及前白蛋白水平较术前均明显下降(P <0.05),试验组患者术后第7天血浆白蛋白及前白蛋白水平显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05);试验组患者的术后肺部感染发生率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),吻合口瘘发生率差异无统计学意义(P> 0.05);两组患者出院时体重较术前均有所下降,但两组患者体重丢失程度相比差异无统计学意义(P> 0.05);对照组患者术后住院时间显著长于试验组,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论肠内营养中使用海洋胶原低聚肽可以有效维持食管癌术后患者血浆蛋白水平,降低食管癌术后肺部感染的发生率,缩短术后住院时间。

G蛋白抑制性多肽-27药动学测定方法的建立

目的建立测定小鼠血浆中G蛋白抑制性多肽-27(GCIP-27)浓度的放射性核素(125I)示踪测定法。方法125I-GCIP采用Iodogen法标记,血浆中GCIP的浓度采用同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法或低相对分子质量SDS-PAGE电泳法测定,并比较其测定结果。结果TCA沉淀法和电泳法同时对照测定60份GCIP血浆样品,结果呈良好的相关性,r=0.9554。2种方法最低检测浓度均为2.0μg.L-1,日内、日间RSD均小于10%,血浆在3.75～480μg.L-1内均呈良好的相关性,相关系数分别为r=0.9977和0.9964,血浆中GCIP的平均回收率分别为(92.72±4.55)%和(91.77±5.21)%。结论同位素示踪法与沉淀法或电泳法结合,方法稳定、可靠、灵敏度较高,两法相辅相成,适于GCIP-27血药浓度测定。

尿纤维蛋白肽A预测冠心病抗凝治疗的疗效

以高效液相色谱法,检测用低分子量肝素(LMWH)治疗过程中61例不稳定型心绞痛(UAP)患者24h尿中纤维蛋白肽A(FPA)含量,探讨FPA对UAP诊断和疗效预测的作用。结果,用药前FPA高值组与低值组FPA含量分别为(54981±7225)μg/24h和(25148±8434)μg/24h,心绞痛发作次数分别为(740±138)次/3d和(642±134)次/3d;治疗后上述指标分别降至(10039±2261)μg/24h和(12150±6933)μg/24h,(160±160)次/3d和(245±15)次/3d。结果说明,LMWH对FPA高值的UAP疗效较好,24h尿液中FPA含量可以作为评价LMWH治疗UAP临床疗效的一项判断指标。

血浆蛋白粉在乳猪日粮中的应用研究概述

血浆蛋白粉是利用现代生物技术和加工手段对动物新鲜血液（一般指猪血或牛血）进行抗凝处理和分离，将血浆从血液中分离出来，再进行压缩和低温保存，然后采取特殊的加工工艺制成乳白色或浅褐色粉状产品。主要成分为：低分子量蛋白、中分子量蛋白（清蛋白）、高分子量蛋白（免疫球蛋白）。按动物种类和加工工艺可分为以下4个品种：喷雾干燥猪血浆蛋白粉（SDPP）、喷雾干燥牛血浆蛋白粉（SDBP）、喷雾干燥母猪血浆蛋白粉（SDSPP）、喷雾干燥低灰分猪血浆蛋白粉（LAPP）。一般情况下血浆蛋白粉是指喷雾干燥猪血浆蛋白粉（SDPP）。

喷物干燥动物血浆粉和免疫球蛋白对早期断奶仔猪生长性能的影响

进行了5个试验来评估喷物干燥猪血浆粉（SDPIP）、喷物干燥牛血浆粉（SDBP）和它们不同的分子组分对大约14～21d断奶仔猪的影响。另外，对SDPP和SDBP中含有不同水平免疫球蛋白（IgG）的组分效果进行评估。在试验1中，评估了添加喷物干燥猪血浆粉和它的3个组分（富含IgG、白蛋白、低分子量物质）的日粮。在第1周里，饲喂SDPP日粮的猪的生长速度比对照组快肽0．05）、采食量大。富含IgG组分组的日粮对猪提高了平均日增重和日采食量，与饲喂SDPP的相似。富含白蛋白组分的日粮对猪的生长速度没有影响，但含低分子量组分日粮降低试验猪的采食量和生长速度。在试验2和试验3中，

肽组学样品前处理方法与技术进展

肽组学作为蛋白质组学研究领域的一个重要分支,在生物标志物发现、疾病早期诊断、生物制药等领域有着广阔的应用前景。在肽组学研究过程中,样品前处理是首要环节。本文对肽组学样品前处理方法与技术进行了综述,内容涉及超滤技术、有机溶剂沉淀方法、固相萃取技术等。样品中大量高丰度蛋白质的存在是肽组学发展面临的最大挑战,因此迫切需要发展快速、有效、高通量、自动化的样品前处理方法和技术。

肝素及低分子肝素对脑血管病患者血中妊娠相关血浆蛋白A浓度的影响

目的探讨临床脑血管疾病治疗中应用的肝素和低分子肝素对血清学标志物PAPP—A浓度的影响，为进一步准确评价PAPP—A的临床意义提供依据。方法选取山东大学齐鲁医院2009年11月至2010年5月收入院的40例脑血管病患者，分别采集药物注射前后的血标本。按照治疗方法及肝素和低分子肝素的用药情况分成4组：A组，10例皮下注射低分子肝素抗凝患者，注射前、治疗第1天、第2天和第7天注射后3h以及末次注射后24h分别抽取静脉血。B组，10例未用低分子肝素抗凝患者，入院时、入院第1天、第2天和第7天抽取静脉血。C组，10名肝素抗凝支架治疗患者，造影前、注射肝素前、注射肝素后第3、5、15、40和100分钟从动脉鞘管抽取动脉血。D组，10例未用肝素抗凝造影患者，造影前和造影完成后分别从动脉鞘管抽取动脉血。用ELISA方法检测各组标本中PAPP—A浓度，分析不同处理组组间差异及组内各时间点间的差异。结果A组患者PAPP—A浓度呈时间依赖性，随着给药天数的增加逐渐从注射前的12．36（9．90—14．32）mIU／L升高至第7天21．80（23．50～19．73）mlU／L，差异有统计学意义（M=38．72，P〈0．01）。C组患者静脉注射肝素后PAPP—A浓度5min内由12．86（9．67—14．05）mlU／L升高至51．56（44．20—66．00）mlU／L，差异有统计学意义（M=46．06，P〈0．01）。皮下注射低分子肝素1周后A组PAPP—A的浓度为21．80（23．50-19．73）mlU／L，高于B组的11．81（9．21～12．89）mlU／L，差异有统计学意义（U〈0．001，P〈0．01）。C组静脉注射肝素15min时PAPP—A的浓度为43．70（37．70—54．30）mlU／L，高于D组造影后的14．18（11．25～15．86）mlU／L，差异有统计学意义（U〈0．001，P〈0．01）。皮下注射低分子肝素后血中PAPP—A的峰值比静脉注射肝素的峰值低，A组与C组分别为21．80（23．50～19．73）、51．56（44．20～66．00）mlU／L，差异有统计学意义（U=0．999，P〈0．01）。结论脑血管疾病临床治疗中应用肝素和低分子肝素会导致血中PAPP—A浓度的升高，选用PAPP—A作为评价指标时应考虑药物的影响。

vIL-10对鼻咽癌细胞株MHC-1类分子抗原加工提呈“操纵子”表达的影响

目的研究病毒白介素-10(vIL-10)对鼻咽癌细胞株MHC-1类分子抗原加工提呈"操纵子"表达的影响。方法收集不同时间段vIL-10处理的鼻咽癌细胞(CNE-1和CNE-2),采用RT-PCR、Western blot方法检测vIL-10处理的鼻咽癌细胞中MHC-1类分子抗原加工提呈"操纵子"(TAP-1、2,LMP-2、7及HLA-I)表达的变化。结果1mRNA水平:CNE-1和CNE-2的TAP-1水平在不同时间点均未表现出显著差异;vIL-10作用1、4、6、12h时,CNE-1和CNE-2的TAP-2、LMP-2均未出现变化,24h时,两者均出现显著下降甚至消失;CNE-1在vIL-10作用后4h即出现LMP-7下降,而CNE-2在vIL-10作用后6h出现下降;在vIL-10作用24h时CNE-1和CNE-2的HLA-I出现显著下降。2蛋白水平:vIL-10作用后24h时,两种细胞的TAP-1均出现显著下降,TAP-2则在vIL-10作用后1、6、12、24h出现逐渐下降;CNE-2的LMP-2、LMP-7在vIL-10作用后随时间逐渐下降,而CNE-1的两种蛋白仅在作用后12h出现显著下降;HLA-I在vIL-10作用后出现下降趋势,但在CNE-1中各时间段变化无统计学差异,CNE-2在24h显著下降。结论 vIL-10可明显抑制鼻咽癌MHC-I类分子抗原加工和提呈的"操纵子"的表达,并且呈一定的时间依赖性。

扁杏仁肽对血管紧张素转化酶的抑制作用研究

采用碱溶酸沉法从陕北扁杏仁制得杏仁总蛋白,并采用Osborne法分级制备清蛋白、醇溶蛋白、球蛋白和谷蛋白;用碱性蛋白酶Alcalase水解,超滤分离,制备不同分子量总蛋白杏仁肽和分级蛋白杏仁肽;利用高效液相色谱法测定水解物,系统研究杏仁肽对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。结果表明,不同分子量的总蛋白杏仁肽均具有ACE抑制活性,且肽段分子量越小,抑制活性越强;分级蛋白杏仁肽中,谷蛋白肽的抑制活性最强,分子量低于1 ku的谷蛋白肽的IC50值为(96.21±0.06)μg/m L。

多肽组

多肽组（peptidome）是指蛋白质组中的低分子量组分（MW〈10kDa），这部分低分子量的多肽以前被认为是毫无价值的生物垃圾。近年来，随着多肽组学研究的逐步深入，发现多肽组中蕴含着丰富的生物信息，多肽组的表达模式与临床病症密切相关，为疾病标记物的发现提供了新的视角。

乙醇致氧化应激损伤和HBV复制对肝癌系细胞蛋白酶体活性的影响

目的研究乙醇致氧化应激损伤和HBV复制,对肝癌系细胞蛋白酶体活性的影响。方法分别用1.5%、3%、5%、8%体积分数的乙醇作用于HepG2和HepG2.2.15细胞16h后收集上清检测天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、四甲基偶氮唑盐比色法(methye thiazolye telrazlium,MTT)检测细胞活性,计算抑制率。两种细胞经1.5%、5%乙醇处理16h后用WesternBlot检测免疫蛋白酶体亚基低分子量多肽蛋白2(low molecular weight polypeptide protein 2,LMP2)的表达。结果HepG2.2.15细胞对3%、5%的乙醇诱导损伤更敏感。HepG2.2.15细胞的LMP2表达比HepG2细胞低,1.5%乙醇处理16h以后,HepG2.2.15细胞的蛋白酶体亚基LMP2表达比HepG2细胞下调更明显。结论乙醇和HBV复制,下调肝癌细胞蛋白酶体亚基LMP2的表达。

广东汉族人群LMP和TAP基因多态性及与变应性鼻炎的相关性

目的对广东地区汉族变应性鼻炎患者作抗原处理相关肽(TAP)和低分子量多肽(LMP)分型,探讨这些基因与广东人群中变应性鼻炎遗传易感性的可能关系。方法采用PCR扩增阻碍突变系统(PCR-ARMS)法和PCR-RFLP法对62名无亲缘关系的变应性鼻炎病人和95名无血缘关系的广东籍健康汉族人作TAP、LMP分型。结果TAPl-333、637位等位基因基因型在广东汉族变应性鼻炎组及正常对照组中均以I和D为主,TAP2-379、565、665等位基因基因型分别为V-A-T。TAP1和TAP2各等位基因基因型频率在变应性鼻炎组和正常人组间差异无显著性(P>0.05)。变应性鼻炎患者LMP7A/A频率占8.70%,低于正常对照组的21.35%,有显著差异(P<0.05),其余各型与正常对照组无明显差异(P>0.05)。变应性鼻炎病人中LMP7等位基因A的频率占36.23%,B的频率占63.77%,与正常对照组的A为47.09%、B为52.91%有显著差异(P<0.05)。结论提示LMP7等位基因A与AR的发病呈负关联,B与AR的发病呈正关联。变应性鼻炎与TAP基因可能无相关性.