血浆可溶性环氧化物水解酶与脑梗死的相关性研究

目的探讨血浆可溶性环氧化物水解酶与脑梗死的相关性研究。方法选取2020年1—10月在医院接受治疗的脑梗死患者120例,作为研究组,患者年龄28~76岁,平均年龄(51.19±2.12)岁,男性患者65例,女性患者55例,血浆可溶性环氧化物水解酶采用ELISA检测试剂盒;并与120名健康体检者作为对照组,男性64名,女性56名,年龄28~77岁,平均年龄(51.32±4.43岁),血浆可溶性环氧化物水解酶采用ELISA检测试剂盒。结果研究组患者的高密度脂蛋白异常者(64例,53.33%)与对照组高密度脂蛋白异常者(15例,12.50%)相比较差异有统计学意义(P<0.05);研究组低密度脂蛋白异常者(72例,60.00%)显著高于对照组低密度脂蛋白异常者(20例,16.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。研究组sEH水平(141.53±2.45)ng/mL显著高于对照组sEH水平(0.19±0.01)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。sEH与高密度脂蛋白呈负相关(r=-0.525),sEH与低密度脂蛋白异常呈现正相关。结论血浆可溶性环氧化物水解酶与脑梗死患者低密度脂蛋白异常呈现正相关,该指标水平能够提示该类患者疾病的进展,可能在血管重塑发挥重要作用。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对暴露于HEMA的人牙髓干细胞细胞迁移及成牙分化的影响

目的:探讨在树脂单体甲基丙烯酸羟乙酯(2-hydroxyethyl methacrylate, HEMA)暴露环境下,可溶性环氧化物水解酶抑制剂(TPPU)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)迁移及成牙分化的影响。方法:分离提取hDPSCs,并利用茜素红染色和流式细胞仪鉴定其干性。以无添加药物的诱导培养基为对照组,以HEMA、HEMA+TPPU为实验组,利用CCK-8检测细胞活性;利用细胞划痕实验检测细胞迁移;利用碱性磷酸酶染色法进行染色,并检测碱性磷酸酶(ALP)活性;利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成牙分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质基质蛋白-1(DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(DSPP)的相对表达;利用茜素红染色检测矿化结节形成情况。结果:HEMA组细胞活性较对照组显著降低(P<0.05),HEMA+TPPU组较HEMA组增加(P<0.05)。HEMA组细胞迁移率较对照组显著降低(P<0.05),HEMA+TPPU组较HEMA组增加(P<0.05)。在成牙诱导分化过程中,用2 mmol/L的HEMA处理细胞后,ALP活性较对照组降低(P<0.05),相关成牙分化基因表达也显著降低(P<0.05)。而HEMA+TPPU组ALP活性较HEMA组显著升高(P<0.05),且基因Runx2、DMP-1、DSPP表达也显著增加(P<0.05)。此外茜素红染色结果也显示HEMA+TPPU组和对照组的相对钙含量均较HEMA组显著升高(P<0.05)。结论:HEMA可在一定程度上抑制hDPSCs的细胞迁移和成牙分化能力,而TPPU可部分逆转HEMA对细胞迁移和成牙分化能力的抑制作用。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂TPPU改善阿尔茨海默病的作用和机制

目的 利用小鼠模型探讨新型可溶性环氧化物水解酶(sEH)抑制剂(TPPU)改善阿尔茨海默病(AD)的分子机制。方法 将5xFAD转基因小鼠随机分为WT溶剂组、5xFAD溶剂组和5xFAD-TPPU干预,5xFAD-TPPU干预组每日腹腔注射1.5 mg/kg体质量TPPU,连续注射8 w。免疫荧光染色观察β淀粉样蛋白水平和小胶质细胞活化。Y迷宫检测小鼠认知功能。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测白细胞介素(IL)-6、IL-β和肿瘤坏死因子(TNF)-α三种炎症因子mRNA水平。高效液相和质谱联用技术检测环氧四烯酸(EETs)水平。Western印迹检测给药前后Toll样受体(TLR)2及其下游信号分子表达。结果 外源性给予TPPU可显著抑制小胶质细胞的活化和炎症因子的释放,并且能够改善AD小鼠病理症状。与WT溶剂组相比,5xFAD溶剂组TLR2相关信号通路异常,给予TPPU后,可有效抑制TLR2信号通路的激活。结论 sEH抑制剂TPPU可能通过TLR2信号通路抑制小胶质细胞的过度激活,从而改善AD的病理症状。

基于药效团模型筛选鳕鱼源可溶性环氧化物水解酶抑制肽及其作用机制

以可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)为靶点的生理性抑制剂在治疗高血压、炎症、心血管疾病及糖尿病等方面具有显著的疗效。以大西洋真鳕鱼多肽粉为原料,构建Hypogen药效团,结合分子对接法筛选含有色氨酸且抑制sEH活性的生物活性肽,通过固相合成技术制备生物活性肽序列,并采用高效液相色谱法测定其sEH体外抑制活性。结果表明,利用最佳药效团模型(1号药效团)筛选出的四肽(PLLW)具备最优的Fit值(9.053)和LibDock评分(147.807),其半抑制浓度(IC_(50))为506.66μmol/L。分子对接结果表明,PLLW通过氢键和疏水相互作用与生理性底物竞争结合sEH活性位点,起到抑制活性。本研究为食源性混合体系中sEH抑制剂的筛选及机制研究提供了一种新思路,为sEH抑制剂产品的开发提供了一个合适的模型。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂在心血管领域中的研究进展

在哺乳动物系统中的可溶性环氧化物水解酶属于α/β水解酶类折叠家族的一个成员,它对环氧脂肪酸具有高度的选择性。环氧花生四烯酸或环氧二十碳三烯酸是其特异性底物。环氧二十碳三烯酸是内皮衍生超极化因子的主要组成成分。因此,环氧二十碳三烯酸具有舒张血管及降低血压作用,同时还具有抗炎、促进纤溶、调节血管生长等多种强大生物学效应,其水解酶的抑制剂—可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以通过减少环氧二十碳三烯酸降解、增加环氧二十碳三烯酸水平从而模拟这些作用。因此,可溶性环氧化物水解酶抑制剂作为具有治疗高血压、动脉粥样硬化和炎症性疾病可能性的药物被广泛研究。

RNA干扰下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达

目的构建含有可溶性环氧化物水解酶基因特异性的RNA干扰序列pSUPER retro neo质粒载体,选择性下调小鼠心肌细胞可溶性环氧化物水解酶的表达,筛选出抑制效果最明显的表达质粒。方法构建2条靶向可溶性环氧化物水解酶基因的特异性小干扰RNA质粒载体(EH-1和EH-2),以含非特异性小干扰RNA编码序列的质粒载体为阴性对照(pCN组),用FuGENE HD将质粒转染入原代培养的小鼠心肌细胞,并设空白对照组,转染后通过半定量RT-PCR和Western Blotting法,检测可溶性环氧化物水解酶的mRNA和蛋白表达情况。结果与空白对照组、阴性对照组和EH-1组相比,质粒EH-2使心肌细胞可溶性环氧化物水解酶mRNA和蛋白的相对表达量明显下调(分别为0.202±0.017和0.212±0.029,P<0.01)。结论构建了特异性小干扰RNA质粒表达载体,利用RNA干扰技术成功下调了原代培养的心肌细胞中可溶性环氧化物水解酶的表达,为进一步进行心肌细胞的RNA干扰研究奠定了基础。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对巨噬细胞脂质代谢的影响

目的观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对小鼠巨噬细胞脂质摄取及降解的影响,并探明其可能机制。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别用不同浓度t-AUCB(1、10、50及100μmol/L)干预24 h,或在100μmol/L t-AUCB干预前1 h加入PPARγ拮抗剂GW9662 5μmol/L,采用t-AUCB 0μmol/L干预组作为空白对照。采用125Ⅰ-ox-LDL放射配基法测定小鼠巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的摄取及降解,实时荧光定量PCR和Western blot分别测定小鼠巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达。结果 t-AUCB呈剂量依赖性地增加巨噬细胞125Ⅰ-ox-LDL摄取量和降解量,0、1、10、50和100μmol/L t-AUCB干预时,摄取量分别为414.96±46.71μg/g、519.54±47.7μg/g、629.04±37.97μg/g、720.66±48.58μg/g和881.57±68.44μg/g,降解量分别为16180.23±967.28μg/g、17369.62±478.34μg/g、21794.85±689.36μg/g、27883.03±712.25μg/g和30194.61±635.71μg/g,与空白对照组比较差异显著(P<0.05),加入GW9662后100μmol/L组摄取量降至467.80±51.98μg/g,降解量降至16326.19±735.95μg/g,与单独加入t-AUCB组比较差异具有显著性(P<0.05);t-AUCB可呈剂量依赖性的增加小鼠巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达,而加入GW9662后明显抑制上述作用。结论 t-AUCB可通过上调PPARγ-CD36信号通路分子表达增加小鼠巨噬细胞摄取和降解ox-LDL。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂在TGF-β1诱导的人脐静脉内皮细胞内皮-间质转化中的作用

目的:观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对TGF-β1诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮-间质转化(End MT)的影响。方法:采用t-AUCB(50μmol/L)预处理HUVEC 40 min后,用TGF-β1(10μg/L)诱导HUVEC 24 h,采用Western blot法检测Smad2/3的磷酸化水平;诱导72 h后,光镜观察细胞形态的变化,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,采用实时荧光定量PCR检测内皮细胞标记物(CD31)、间质细胞标记物(collagenⅠ、collagenⅢ、vimentin)及End MT中重要的下游转录因子(snail1、twist1、twist2、ZEB1)mRNA的表达。同时设TGF-β1和tAUCB单独作用组。结果:光镜下,TGF-β1组细胞转变为狭长形,细胞间隙疏松,TGF-β1+t-AUCB组、t-AUCB组细胞形态正常。TGF-β1组细胞CD31 mRNA表达下调,collagenⅠ、collagenⅢ、vimentin mRNA表达上调,snail1、twist1、twist2、ZEB1 mRNA表达上调,Smad2及Smad3蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,TGF-β1+t-AUCB组、t-AUCB组上述指标的表达均有一定程度的逆转(P<0.05)。结论:t-AUCB可通过抑制内皮细胞的End MT而发挥抗纤维化作用。

可溶性环氧化物水解酶基因多态性与冠心病的相关性

目的:研究中国浙江籍汉族人群中可溶性环氧化物水解酶(EPHX2)基因rs2271001位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与冠心病的相关性。方法:176例冠心病患者(至少1支冠状动脉血管内径狭窄≥50%)为冠心病组,选取同期179例冠脉造影正常者作为对照组。采用PCR和基因测序方法,检测rs2271001位点的SNP。结果:在rs2271001位点上检测到3种基因型,其基因型分布符合HardyWeinberg平衡定律。冠心病组EPHX2基因rs2271001位点的AG、GG、AA基因型及G、A等位基因分布频率均高于对照组(均P<0.05)。结论:EPHX2基因rs2271001位点A/G多态性与冠心病发病存在相关性,G等位基因可能是中国浙江籍汉族人群冠心病患者患病的危险等位基因。

活性氧调控可溶性环氧化物水解酶表达增高在门静脉高压症大鼠体内的实验研究

目的明确活性氧(reactive oxygen species,ROS)是否可在肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境中调控可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,s EH)表达,验证s EH对这一疾病模型肠系膜血管中肌源性反应的影响。方法利用多道生物分析仪分别测定正常对照组大鼠、实验对照组大鼠(四氯化碳处理)及NAPDH抑制剂夹竹桃麻素(apocynin,Apo)干预的处理组大鼠门静脉压力;免疫印迹分析3组大鼠肠系膜动脉组织s EH、ROCK及p-moesin蛋白表达水平的变化;血管灌流系统测定各组大鼠肠系膜动脉血管的肌源性反应。多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 (1)正常对照组、实验对照组和Apo处理组大鼠平均门静脉压力分别为(6.5±0.9)mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa)、(15.9±1.6)mm Hg和(10.6±1.2)mm Hg,肝硬化门静脉高压症大鼠经Apo处理后,门静脉压力显著降低(P<0.05)。(2)与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜组织s EH蛋白表达水平明显增高(P<0.05),p-moesin表达显著降低(P<0.01),但Apo处理组s EH蛋白表达水平显著降低(P<0.05),p-moesin表达回复,但仍与正常对照组存在显著差异(P<0.05)。(3)肌源性收缩在实验对照组大鼠显著降低(P<0.05),经过Apo干预后,肌源性收缩改善,血管恢复收缩活性。结论四氯化碳致肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境s EH表达增高,与活性氧含量相关。使用NAPDH特异性抑制剂去除活性氧后,s EH表达减低,血管肌源性反应恢复,提示在肝硬化门静脉高压症中限制s EH作用可作为缓解氧化应激外的另一治疗方向。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂通过过氧化体增殖物激活型受体γ调节内皮祖细胞功能

目的研究可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对小鼠来源内皮祖细胞(EPC)功能的调节及相关机制。方法密度梯度离心法分离培养小鼠骨髓来源EPC,不同浓度t-AUCB及过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)阻断剂GW9662预干预EPC,检测上述EPC体外增殖、黏附、迁移、血管生成情况。结果在1~100μmol/L范围内,t-AUCB呈浓度依赖性增强EPC体外增殖、黏附、迁移、血管生成能力,而5μmol/L PPARγ阻断剂GW9662可抑制EPC上述功能。结论可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB参与EPC增殖、黏附、迁移、血管生成等功能的调控,其机制可能与激活PPARγ通路有关。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对压力负荷增加所致小鼠心肌肥厚的影响

目的观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心肌肥厚小鼠心脏及心肌肥厚标志基因的影响,并探讨该类药物影响心肌肥厚的可能机制。方法观察压力负荷增加及用可溶性环氧化物水解酶抑制剂干预后心脏的病理学改变,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测心肌肥厚基因(心房钠尿肽基因、α肌凝蛋白重链基因、β肌凝蛋白重链基因和骨骼肌α肌纤蛋白基因)表达的差异,用Western检测核因子κB的活化情况。结果可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以明显使心脏重与体重的比值、左心室短轴缩短率和左心室收缩期末腔径明显改善,并减少压力负荷增加引起的小鼠心肌肥厚基因的表达,抑制核因子κB的表达。结论可溶性环氧化物水解酶抑制剂能抑制压力负荷增加所致的心肌肥厚,这一作用有可能通过抑制核因子κB途径来实现。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂与心血管疾病

环氧二十碳三烯酸已被证明通过减少缺血再灌注损伤、抗炎、扩张血管等机制发挥心血管保护作用。可溶性环氧化物水解酶是使环氧二十碳三烯酸代谢和失活的主要酶类。因此可溶性环氧化物水解酶抑制剂抑制可溶性环氧化物水解酶,将提高环氧二十碳三烯酸的有益特性,成为治疗心血管疾病的有效措施。

可溶性环氧化物水解酶与心血管疾病

可溶性环氧化合物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是哺乳动物体内广泛存在的一种酶。sEH通过水解环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)发挥作用。近来研究发现sEH与高血压、终末器官损伤、心肌肥厚及缺血/再灌注损伤关系密切,极有可能成为一种预防和治疗心血管疾病的新靶点。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对小鼠内皮祖细胞分泌血管内皮生长因子及缺氧诱导因子-1α的促进作用

目的探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂(t-AUCB)能否促进小鼠来源内皮祖细胞(EPCs)分泌内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),及可能的相关机制。方法提取小鼠长骨骨髓,离心分离培养,取得高纯度EPCs,不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(t-AUCB)和过氧化体增殖物激活型受体γ(PPAR-γ)阻断剂GW9662单独或联合干预EPCs,Western blot检测上述EPCs体外分泌VEGF及HIF-1α情况。结果从0~100μmol/L,t-AUCB呈浓度依赖性增强EPCs体外分泌VEGF、HIF-1α能力,而5μmol/L t-AUCB阻断剂GW9662可抑制EPC上述功能。1、10、50、100μmol/L t-AUCB促进EPCs分泌VEGF、HIF-1α能力与0μmol/L t-AUCB相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);GW9662+100μmol/L t-AUCB与100μmol/L t-AUCB比较,差异具有统计学意义(P<0.05),与0μmol/L tAUCB比较,差异也具有统计学意义(P<0.05)。结论t-AUCB可促进EPCs分泌VEGF及HIF-1α,其机制可能与激活PPAR-γ通路有关。

RNA干扰技术抑制可溶性环氧化物水解酶对急性心肌缺血坏死的影响

目的应用RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术下调可溶性环氧化物水解酶（solubleEpoxideHydrolase，sEH）的表达，观察其对异丙肾上腺素（isoproterenol，ISO）诱导的急性缺血小鼠心肌的凋亡相关基因和心功能的影响。方法采用ISO注射液20mg／（kg·d）连续腹腔注射3d，建立小鼠急性心肌缺血模型，分为正常对照组（C组）、心肌缺血组（MI组）、缺血加阴性质粒组（PCN组）和缺血加EH-2质粒组（EH-2组）。利用构建好的靶向sEH基因的特异性小干扰RNA质粒EH-2，下调小鼠sEH基因的表达，用心脏超声观察各组左室舒张末期内径（LVEDd）、左室射血分数（EF）、左室短轴缩短率（FS）等变化。Westernblotting法检测各组Bcl-2、Bax和sEH的表达变化。结果与对照组相比，心肌缺血组EF和Fs值降低，LVEDd增加；心肌Bax表达升高，而Bcl-2表达降低（P〈0．01）。而缺血加EH-2质粒组sEH的表达降低，并且与MI组和PCN组相比，EF和Fs值增加，LVEDd减小；心肌Bax表达降低，Bcl-2表达升高（P〈0．01）。结论用RNA干扰技术可下调小鼠体内sEH的表达，从而增加抑凋亡基因Bcl-2的表达，改善ISO诱导的急性心肌缺血和心功能不全。

哺乳动物中的可溶性环氧化物水解酶

哺乳动物中的可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是一种集N-末端磷酸酶活性和C-末端水解酶活性于一体的同型二聚体酶.它对异生物质具有解毒功能,并参与多种生理调控过程,在血压控制和激素调节方面发挥着重要作用.本文从哺乳动物sEH的分子结构、催化机理以及功能等方面做一概述.

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心脑血管系统疾病的影响

花生四烯酸(arachidonic acid,AA)可被细胞色素P450代谢为环氧花生四烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs),EETs具有促进血管生成、抑制炎症过程及血小板聚集等多种生理活性。EETs被可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)迅速降解,生物活性降低,因此,抑制sEH可作为治疗心脑血管疾病的靶点。该文就sEH抑制剂对高血压、动脉粥样硬化及缺血性脑卒中、心肌梗死、慢性心力衰竭等疾病的作用及机制做一综述。

可溶性环氧化物水解酶与肝脏疾病

可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是一种双功能同型二聚体酶,于1973年被Gill等[1]在研究类似昆虫保幼激素萜类环氧化物的代谢时发现,因其主要定位于细胞可溶性组分而得名。近年来大量研究表明,sEH在心血管疾病、神经系统疾病和代谢性疾病等多种疾病中发挥着重要作用[2-4],已被作为疾病治疗的新靶点而进行研究,且已有sEH抑制剂进入了人体临床试验。本文综述了sEH与肝脏疾病之间的关系,以期为sEH作为肝脏疾病治疗新靶点的研究提供参考。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对内皮祖细胞迁移功能的影响

目的 研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对内皮祖细胞（EPCs）迁移功能的影响。方法 密度梯度离心法分离培养小鼠骨髓来源EPCs,不同浓度t-AUCB预干预EPCs,检测干预后EPCs体外迁移情况。结果 从0~100μmol/L,随着浓度增加,t-AUCB可呈浓度依赖性增强EPCs体外迁移能力。结论 可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB参与正向调控EPCs迁移功能。