乳腺癌血浆循环核酸p53基因突变的意义

目的 探讨血浆循环核酸 p5 3基因突变检测的可行性 ,研究乳腺癌患者循环核酸 p5 3基因突变对于乳腺癌发生、发展和预后估计的临床意义 .方法 应用聚合酶链反应(PCR)扩增 p5 3基因外显子 5～ 8,并用变性高效液相色谱技术 (DHPL C)分析产物突变情况 ,再与各生物学参数进行了相关研究 .结果 33例患者中 14例 (42 .4 % ) p5 3基因突变 ,且突变率与组织分化级别、ER阴性显著相关 (P<0 .0 5 ) ,与临床分期和淋巴结及远处转移情况无关 .结论 DHPL C可作为一种快速简便的基因突变检测手段 ,p5 3基因突变在乳腺癌循环核酸中有较高的检出率并预示肿瘤的恶性程度 ,血浆基因突变有望成为简便的预后参考指标 .

急性髓系白血病患者血浆循环DNA动态监测及其临床意义

本研究旨在动态监测急性髓系白血病(AML)患者血浆循环DNA的含量,探讨其临床意义。采集66例AML患者不同临床状态的静脉血,以60例体检健康者、20例良性血液病患者、20例实体肿瘤患者为对照,用磁珠法提取血浆标本中循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测。结果表明:AML患者诊断时血浆DNA含量为168.5(73.4-245.1)ng/ml,显著高于各对照组,男性患者血浆DNA含量显著高于女性患者(P=0.019),不同年龄、不同FAB型别的患者间血浆DNA含量无统计学差异。化疗后血浆DNA水平显著低于化疗前,完全缓解、部分缓解组患者血浆DNA水平与健康对照组已无显著差异,但与未缓解组有显著性差异(P<0.05)。缓解后复发的6例患者中有5例(83.3%)复发时血浆DNA水平明显升高,未复发的25例患者中有22例(88.0%)血浆DNA水平保持稳定。结论:血浆DNA定量检测对AML的化疗疗效判断及复发监测具有重要意义。

肝细胞癌病人血浆循环DNA定量分析及其临床意义

目的 定量检测肝细胞癌 (HCC)病人血浆循环DNA并探讨其临床价值。方法 收集 79例肝功能正常的HCC病人术前血浆样本以及 2 0例健康志愿者、2 0例代偿期肝硬化病人和 2 0例活动性乙型肝炎病人的血浆样本 ,抽提血浆循环DNA。将血浆循环DNA与荧光染料SYBRgreenⅠ按比例稀释并充分混匀后通过紫外与可见光成像分析系统定量。结果 HCC、肝硬化和肝炎病人血浆循环DNA浓度分别为 (47.1± 4 3.7)ng/mL、(30 .0± 1 3.3)ng/mL和 (6 5 .3± 71 .6 )ng/mL ,均明显高于健康人群血浆循环DNA浓度 (1 7.6± 9.5 )ng/mL ,差异在统计学上有显著性 (P =0 .0 0 0 ;P =0 .0 0 2 ;P =0 .0 0 1 ) ,而HCC和肝硬化病人以及病毒性肝炎病人两组之间的血浆循环DNA浓度无明显差异 (P =0 .1 91 ;P =0 .6 85 )。伴肝内播散灶或脉管癌栓的 4 1例HCC病人的血浆循环DNA浓度 (5 4 .3± 4 1 .6 )ng/mL明显高于不伴肝内播散灶或脉管癌栓的 38例病人 (39.3± 4 5 .0 )ng/mL(P=0 .0 0 2 )。血浆循环DNA浓度与HCC病人肿瘤大小、TNM分期、2年无瘤生存率、1年和 2年总体生存率密切相关 (P =0 .0 0 8;P =0 .0 4 0 ;P =0 .0 1 0 ;P =0 .0 1 6 ;P =0 .0 0 1 ) ,而与肿瘤数目、肿瘤包膜、肿瘤分化、血清AFP浓度及 1年无瘤生存率无明显关系。多因素分?

血浆循环microRNA检测及其与冠心病关联性探讨

目的探究血浆循环微小RNA(micro RNA)在冠心病患者外周血中的表达水平以及临床意义。方法 60例冠心病患者为观察组,另选取同期行体检的60例健康人群作为对照组,比较两组患者血浆中micro RNA的表达水平,并对其差异进行分析。结果冠心病患者外周血中mi RNA-130a、mi RNA-126与mi RNA-222的表达水平与正常健康人群相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论通过测定冠心病患者外周血中mi RNA-126与mi RNA-222的表达水平能初步确诊患者的病情,同时还能进一步测定冠状动脉的狭窄情况。

血浆循环肿瘤DNA基因突变检测国家参考品的应用评价

目的评价血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)KRAS/NRAS/EGFR/BRAF/MET基因突变检测国家参考品。方法对87支国家参考品进行血浆游离DNA提取,文库构建,对文库进行高通量测序,测序后的序列比对到参考基因序列上,通过生物信息软件分析,识别携带基因突变的肿瘤DNA序列,获得相关基因突变信息。结果试剂盒检测范围内的国家阳性参考品均检测出相应突变位点,国家阴性参考品和试剂盒检测范围外的阳性参考品均为野生型,可检测50 ng DNA中突变频率为0.3%~1%的检测限参考品。结论该技术方法的试剂盒检测结果符合国家参考品的要求。本国家参考品为ctDNA检测的标准化提供保障。

血浆循环DNA浓度在原发性干燥综合征和系统性红斑狼疮诊治中的意义

目的比较原发干燥综合征(pSS)、系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血浆中循环DNA(cDNA)浓度的差异性,探讨cDNA浓度在pSS、SLE诊治中的意义。方法选用人类基因组管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)设计引物,测定pSS、SLE及健康对照组中血浆cDNA浓度,同时测定血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)并评定不同疾病的活动指数和损害指数,分析血浆cDNA浓度与疾病活动性、相关参数的关系。结果 pSS组cDNA浓度[(368.24±196.68)ng/ml]明显高于SLE组[(244.51±164.10)ng/ml]及健康对照组[(24.56±16.76)ng/ml],差异均有统计学意义(均P<0.05);pSS组中的cDNA浓度值与干燥综合征活动指数(SSDAI)呈正相关(P<0.05),与干燥综合征损害指数(SSDDI)无相关性(P>0.05);SLE组中cDNA浓度值与SLE活动指数(SLEDAI)无相关性(P>0.05)。结论 cDNA浓度可作为pSS与SLE鉴别指标之一,pSS患者cDNA浓度与SSDAI呈正相关,可作为pSS疾病活动性观察指标之一。

荧光定量PCR测定原发性干燥综合征患者血浆循环DNA及其临床意义

目的：荧光定量PCR测定原发性干燥综合征（pSS）患者血浆循环游离DNA（cfDNA），分析其在疾病中的意义。方法选用人类基因组管家基因TaqMan？ GeneExpression Assays：ABI 4331182，ID：Hs02758991-g1，采用PCR水解探针模式（Taqman探针）测定pSS及正常对照组中血浆cfDNA的值，同时测定pSS患者血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM），并评定pSS的活动指数（SSDAI）和损害指数（SSDDI），分析cfDNA与疾病活动之间的关系。结果pSS组cf DNA浓度值为（380.64±259.10）μg/L，正常对照组cfDNA浓度值为（32.02±16.39）μg/L，两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）；pSS组中：cfDNA浓度与SSDAI呈正相关（r=0.533， P〈0.01），与SSDDI无相关性（r=0.051，P〉0.05），SSDAI与SSDDI呈正相关（r=0.412，P〈0.01），pSS组以SSDAI值中位数4分为2组，31例pSS （SSDAI≥4）的cfDNA浓度值（509.70±215.57）μg/L，35例pSS（SSDAI〈4）的cfDNA浓度值（262.65±186.35）μg/L，两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论血浆cfDNA在pSS患者中升高，与干燥综合征疾病活动性相关，血浆cfDNA可作为PSS疾病活动的观察指标。

血浆循环DNA和CK-MB联合检查用于诊断手足口患儿心肌损伤的价值

目的探讨联合检测血浆循环DNA与心肌酶CK—MB在诊断手足口病（HFMD）患儿心肌损伤的应用。方法选择30例健康儿童和40例HFMD患儿发病后3日内静脉血．用双重荧光定量PCR技术检测血浆DNA水平，同时检测心肌酶CK—MB。结果血浆循环DNA在HFMD并发心肌损伤组的水平为（21．93±8．82）ng／mL，显著高于未并发心肌损伤组的（9．724±5．870）ng／mL（P〈0．05）。血浆CK—MB在重型HFMD患儿组显著升高．在普通比例组和正常对照组无显著差别；血浆循环DNA在普通病例组和重型病例组均较对照组显著升高．而且重型病例组升高程度显著高于普通病例组；HFMD患儿外周血血浆循环DNA与CK—MB呈显著正相关。结论联合检测HFMD患儿心肌酶CK—MB和血浆循环DNA有助于早发现心肌损伤。

血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达

目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,NanoDrop1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.396)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。

血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的差异表达

目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,Nan-oDrop 1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.306)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。

荧光定量PCR检测手足口病患者血浆循环DNA及其临床意义

目的利用实时荧光定量PCR技术检测手足口病患者血浆循环DNA水平。方法分别收集健康人和手足口病患者的血浆样本,用实时荧光定量PCR方法检测样本中的血浆循环DNA。结果手足口病患者的血浆循环DNA的CT值为(23.58±1.18),显著低于健康对照组的(35.66±1.32)(P<0.001)。结论实时荧光定量PCR技术检测血浆循环DNA可以作为诊断手足口病的一种方法。

荧光定量PCR检测病毒性心肌炎患者血浆循环DNA及其临床意义

目的:利用实时荧光定量PCR技术来检测病毒性心肌炎患者血浆循环DNA水平。方法:分别收集健康人和病毒性心肌炎患者的血浆样本,用实时荧光定量PCR方法检测样本中的血浆循环DNA。结果:病毒性心肌炎患者的血浆循环DNA的CT值为25.22±1.26,明显低于健康人30.66±1.52,有显著性差异(P<0.01)。结论:实时荧光定量PCR技术检测血浆循环DNA可以成为诊断病毒性心肌炎的一种方法。

血浆循环DNA在肺癌诊断上的应用

目的研究血浆循环Fhit基因D3S1300位点杂合性缺失(LOH)作为肿瘤标志物在非小细胞肺癌早期诊断中的意义。方法以微卫星技术检测58例非小细胞肺癌(Nonsmallcelllungcancer,NSCLC)患者血浆及肿瘤组织以及40例非肺癌肺科住院患者血浆Fhit基因D3S1300LOH的表达情况。结果58例NSCLC患者中肿瘤组织D3S1300LOH检出率为41.4%(24/58),在其匹配的血浆中D3S1300LOH检出率为29.3%(17/58),二者差异有统计学意义(P<0.05)。对照组血浆游离DNAD3S1300LOH检出率为5%(2/40),与NSCLC组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论血浆循环DNAFhit基因D3S1300LOH是一种简单有效的肺癌肿瘤筛选标志物。

血浆循环DNA定量检测在食管鳞癌诊断中的意义

目的：通过对食管鳞癌患者血浆循环DNA定量检测，分析并讨论血浆循环DNA含量检测在食管鳞癌诊断中的价值。方法：用血液微量DNA抽提试剂盒提取血浆循环DNA，并以实时荧光定量PCR（SYBRGreenⅠ）分别检测49例食管鳞癌患者、60例健康对照者血浆循环DNA含量，并应用受试者工作特征（ROC）曲线评价血浆循环DNA水平在食管鳞癌的诊断中的价值。结果：食管鳞癌组患者血浆循环DNA水平（54．41±31．23）ng／mL显著高于健康对照组（19．03±7．24）ng／mL，二者差异有统计学意义（P〈0．001）；以29．43ng／mL为食管鳞癌诊断临界值，敏感性和特异度分别为77．5％和93．3％，ROC曲线下面积为0．918（95％CI 0．870～0．967）。TNMⅢ期患者血浆循环DNA水平（76．52±34．51）ng／mL显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者（40．40±18．76）ng／mL（P〈0．05）：淋巴结转移患者血浆循环DNA水平（66．25±35．60）ng／mL显著高于未发生淋巴结转移的患者（41．02±18．31）ng／mL（P〈0．05）。食管鳞癌患者血浆循环DNA水平在年龄、性别、肿瘤部位及分化程度间差异无显著性（P〉0．05）。结论：血浆循环DNA定量检测在食管鳞癌的筛查和早期诊断中具有一定的临床意义，并可能与食管鳞癌的分期相关。

肉碱缺乏症性心肌病患儿血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其临床意义

目的检测肉碱缺乏症性心肌病患儿血浆循环游离线粒体DNA(ccf-mtDNA)水平并探讨其临床意义。方法前瞻性病例对照研究。收集2017年7月至2022年6月吉林大学第一医院小儿心血管科病房收治的7例以心肌病为主要临床表现的原发性肉碱缺乏症(PCD)患儿(PCD组)、同期就诊的16例扩张型心肌病(DCM)患儿(DCM组)及50例健康体检儿童(健康对照组)血液样本,采用实时荧光定量PCR方法检测各组血浆ccf-mtDNA水平并比较其差异,分析PCD组中血浆ccf-mtDNA水平与血游离肉碱水平、心功能的相关性,并监测PCD组应用左旋肉碱治疗后ccf-mtDNA的水平变化。3组间比较采用Kruskal-Wallis检验,PCD组与健康对照组比较采用Mann-Whitney检验,PCD组内治疗前后比较采用配对Wilcoxon秩和检验,变量间相关分析采用Logistic回归分析。结果PCD组、DCM组患儿血浆ccf-mtDNA水平分别为3.69×10^(6)(1.09×10^(6)~7.26×10^(6))拷贝/L、0.99×10^(6)(0.25×10^(6)~4.10×10^(6))拷贝/L,明显高于健康对照组[0.09×10^(6)(0.01×10^(6)~0.35×10^(6))拷贝/L](H=33.34、24.69,均P<0.001),且PCD组较DCM组更高(H=6.31,P<0.05)。PCD组应用左旋肉碱治疗前:血浆ccf-mtDNA水平与血游离肉碱水平、左心室射血分数呈负相关(r=-0.85、-0.82,均P<0.05),与改良Ross评分、N-末端B型利钠肽原水平呈正相关(r=0.81、0.83,均P<0.05)。PCD组应用左旋肉碱治疗后:血浆ccf-mtDNA水平逐渐下降,血游离肉碱水平、心脏功能逐渐恢复。血浆ccf-mtDNA水平自治疗第3个月[0.96×10^(6)(0.50×10^(6)~2.27×10^(6))拷贝/L]开始,较治疗前明显下降(Z=2.24,P<0.05),在第6、9及12个月分别为0.27×10^(6)(0.18×10^(6)~0.76×10^(6))拷贝/L、0.29×10^(6)(0.19×10^(6)~0.78×10^(6))拷贝/L及0.16×10^(6)(0.10×10^(6)~1.06×10^(6))拷贝/L,与健康对照组[0.09×10^(6)(0.01×10^(6)~0.35×10^(6))拷贝/L]比较差异均无统计学意义(Z=1.23、1.09、2.12,均P>0.05)。结论血浆ccf-mtDNA可能是肉碱缺乏症性心肌病的致病因素之一,其水平对此疾病的心脏病情评估具有一定的临床价值。

血浆循环游离DNA(cf DNA)联合癌胚抗原(CEA)在评估晚期非小细胞肺癌治疗疗效的临床价值

目的:研究血浆循环游离DNA(cf DNA)联合癌胚抗原(CEA)在评估晚期非小细胞肺癌(NSCLC)治疗疗效中的临床价值。方法:选取我院2019年1月~2022年1月收治的96例晚期NSCLC患者作为研究对象,所有患者均接受含铂双药化疗方案或放疗,评估治疗6个月后的临床疗效,根据疗效分为有效组与无效组,检测所有患者cf DNA及CEA水平并进行比较,单因素、多因素分析患者疗效的影响因素,并通过受试者工作特征曲线图(ROC)分析cf DNA及CEA对晚期NSCLC患者治疗疗效的评估价值。结果:本研究中96例患者均顺利完成化疗治疗,疗程结束后,有54例(56.25%)治疗有效,42例(43.75%)治疗无效;无效组肿瘤TNM分期Ⅳ期、体力状况(PS)评分2~4分占比大于有效组(P<0.05);无效组患者cf DNA及CEA水平明显高于有效组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,肿瘤分期Ⅳ期、PS评分2~4分、cf DNA及CEA高水平均为影响晚期NSCLC患者疗效的相关因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,cf DNA、CEA对晚期NSCLC患者治疗后无效均有预测效能(P<0.05),其中两指标联合预测的曲线下面积(AUC)最大,为0.794,特异度、敏感度分别为85.19%、78.57%。结论:治疗无效晚期非小细胞肺癌患者cf DNA及CEA水平更高,肿瘤分期Ⅳ期、PS评分2~4分、cf DNA及CEA高水平均为晚期NSCLC患者疗效的影响因素,联合cf DNA及CEA检测有利于对晚期NSCLC患者治疗疗效进行评估。

循环血浆外泌体及其应用研究进展

外泌体是直径为30~150 nm的磷脂双分子层细胞外小囊泡,富含蛋白质、脂质和核酸等生物活性物质。外泌体广泛分布于血浆、尿液、脑脊液等多种体液中,人体几乎所有的细胞都可分泌外泌体。越来越多的研究表明,外泌体具有重要的生物学功能,不仅参与调控多种生理和病理过程,并且在疾病的诊断、发生发展和治疗中都发挥着重要作用。来源于循环血浆的外泌体因更易于获取标本和开展实时检测,成为近年来外泌体研究中的热点研究对象。本文主要就循环血浆外泌体在相关疾病研究和临床应用等方面进展加以综述,以期为促进循环血浆外泌体的深入研究提供参考。

子痫前期孕妇血浆循环游离微小RNA表达的分析

妊娠20周后出现高血压[收缩压≥140mmHg（1mmHg=0．133kPa）和（或）舒张压〉90mmHg]、蛋白尿（24h尿蛋白量〉0．3g），称为子痫前期（pre-eclampsia，PE）；PE的发病率为2％～8％，是导致孕产妇死亡的主要原因之一。目前，尽管已经证实，胎盘生长因子、胎盘蛋白13、可溶性内皮因子等可被用于监测PE的发生和发展，但其敏感度和特异度均较差。因此，临床上亟待新的诊断标志物的开发和应用。