原发性肝癌患者血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其诊断意义

目的分析血浆循环游离线粒体DNA（CCF mt DNA）水平与原发性肝癌（HCC）的相关性,探讨其作为HCC标志物的可行性。方法收集HCC患者及体检健康者的血浆标本各60例,提取全基因组DNA;实时荧光定量PCR分析线粒体CoⅡ一段保守且与核基因组无同源的序列;构建含该靶序列的已知浓度的质粒作为标准品,系列稀释后定量检测CCF mt DNA的含量;独立样本t检验分析HCC患者与体检健康者CCF mt DNA水平的差异;ROC曲线分析CCF mt DNA诊断HCC的效能。结果HCC患者CCF mt DNA水平[（0.591±0.014）×106拷贝/m L]显著高于健康对照组[（0.364±0.012）×106拷贝/m L],差异有统计学意义（t=12.27,P〈0.05）;ROC曲线结果显示,以0.470×106拷贝/m L为cut off值,CCF mt DNA诊断HCC的敏感性为83.3%,特异性为88.3%;ROC曲线下面积（AUCROC）=0.916,95%CI：0.864-0.968,P〈0.05。结论 HCC患者CCF mt DNA水平升高,且诊断HCC的敏感性、特异性较高,可能作为肿瘤标志物用于HCC诊断。

肉碱缺乏症性心肌病患儿血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其临床意义

目的检测肉碱缺乏症性心肌病患儿血浆循环游离线粒体DNA(ccf-mtDNA)水平并探讨其临床意义。方法前瞻性病例对照研究。收集2017年7月至2022年6月吉林大学第一医院小儿心血管科病房收治的7例以心肌病为主要临床表现的原发性肉碱缺乏症(PCD)患儿(PCD组)、同期就诊的16例扩张型心肌病(DCM)患儿(DCM组)及50例健康体检儿童(健康对照组)血液样本,采用实时荧光定量PCR方法检测各组血浆ccf-mtDNA水平并比较其差异,分析PCD组中血浆ccf-mtDNA水平与血游离肉碱水平、心功能的相关性,并监测PCD组应用左旋肉碱治疗后ccf-mtDNA的水平变化。3组间比较采用Kruskal-Wallis检验,PCD组与健康对照组比较采用Mann-Whitney检验,PCD组内治疗前后比较采用配对Wilcoxon秩和检验,变量间相关分析采用Logistic回归分析。结果PCD组、DCM组患儿血浆ccf-mtDNA水平分别为3.69×10^(6)(1.09×10^(6)~7.26×10^(6))拷贝/L、0.99×10^(6)(0.25×10^(6)~4.10×10^(6))拷贝/L,明显高于健康对照组[0.09×10^(6)(0.01×10^(6)~0.35×10^(6))拷贝/L](H=33.34、24.69,均P<0.001),且PCD组较DCM组更高(H=6.31,P<0.05)。PCD组应用左旋肉碱治疗前:血浆ccf-mtDNA水平与血游离肉碱水平、左心室射血分数呈负相关(r=-0.85、-0.82,均P<0.05),与改良Ross评分、N-末端B型利钠肽原水平呈正相关(r=0.81、0.83,均P<0.05)。PCD组应用左旋肉碱治疗后:血浆ccf-mtDNA水平逐渐下降,血游离肉碱水平、心脏功能逐渐恢复。血浆ccf-mtDNA水平自治疗第3个月[0.96×10^(6)(0.50×10^(6)~2.27×10^(6))拷贝/L]开始,较治疗前明显下降(Z=2.24,P<0.05),在第6、9及12个月分别为0.27×10^(6)(0.18×10^(6)~0.76×10^(6))拷贝/L、0.29×10^(6)(0.19×10^(6)~0.78×10^(6))拷贝/L及0.16×10^(6)(0.10×10^(6)~1.06×10^(6))拷贝/L,与健康对照组[0.09×10^(6)(0.01×10^(6)~0.35×10^(6))拷贝/L]比较差异均无统计学意义(Z=1.23、1.09、2.12,均P>0.05)。结论血浆ccf-mtDNA可能是肉碱缺乏症性心肌病的致病因素之一,其水平对此疾病的心脏病情评估具有一定的临床价值。

血浆循环游离DNA水平及其完整性用于肺结节良恶性的诊断研究

目的 探讨血浆循环游离DNA(cfDNA)水平及其完整性对肺结节良恶性的诊断价值。方法 选取110例肺结节患者作为研究对象,根据病理诊断结果分为良性肺结节组60例与恶性肺结节组50例,另选取同期健康体检者30例设为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆cfDNA水平和cfDNA完整性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析并比较血浆cfDNA水平、cfDNA完整性、CEA、Cyfra21-1单独和联合应用对恶性肺结节的诊断效能。结果 恶性肺结节组血浆cfDNA、CEA、Cyfra21-1水平依次为1 154.83(452.85,1 642.31)、7.93(3.21,10.31)、5.75(2.85,8.12) ng/mL,分别高于良性肺结节组的385.43(176.45,704.55)、2.67(1.36,5.45)、2.74(1.43,3.96) ng/mL,差异有统计学意义(P<0.001);恶性肺结节组患者cfDNA完整性为0.68(0.47,0.91),高于良性肺结节组的0.37(0.26,0.59),差异有统计学意义(P<0.001)。血浆cfDNA水平和cfDNA完整性与恶性肺结节患者性别、年龄、是否吸烟、肿瘤直径、病理类型、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。ROC曲线显示,血浆cfDNA水平、cfDNA完整性诊断恶性肺结节的曲线下面积、敏感度、特异度均大于或高于CEA、Cyfra21-1;血浆cfDNA、CEA、Cyfra21-1水平和cfDNA完整性联合诊断恶性肺结节的敏感度、特异度均高于四者单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 血浆cfDNA水平和cfDNA完整性对恶性肺结节具有一定的诊断价值,可作为肺结节良恶性辅助诊断的分子生物学指标。

急性胰腺炎患者血浆游离线粒体DNA水平变化及临床意义

目的探讨血浆游离线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数在急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者诊断、预后及病情评估中的应用价值.方法分别收集40例健康体检者,20例轻度急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)和20例中重度急性胰腺炎(moderate-severe acute pancreatitis,M-SAP)患者标本以及6例急性胰腺炎患者的住院第1、3、7天标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)测定所有标本血浆游离mtDNA拷贝数,比较实验组和对照组一般临床指标及血浆游离mtDNA拷贝数,并分析血浆游离mtDNA拷贝数与临床常用指标以及临床评分的相关性,动态监测AP患者住院后血浆游离mtDNA拷贝数变化,受试者工作特征(ROC)曲线评估血浆游离mtDNA对AP的诊断价值.结果健康对照组、MAP组和M-SAP组血浆游离mtDNA拷贝数分别为5.0×10^4(3.1×10^4)、1.2×10^5(1.6×10^5)和7.8×10^5(5.0×10^5)copies/mL,MAP组明显高于健康对照组,M-SAP组明显高于MAP组,三组间差异均有统计学意义(P<0.05).AP患者血浆游离mtDNA拷贝数与白细胞(WBC)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、甘油三酯(TG)、病情严重程度(Ranson)评分及急性生理学与慢性健康状况评估系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分呈正相关(r=0.453、0.539、0.562、0.513、0.653、0.869,P<0.05).AP患者在住院治疗后病情好转,血浆游离mtDNA拷贝数先上升后下降.ROC曲线显示,以8.5×10^4 copies/mL为截断值,血浆游离mtDNA诊断AP的敏感度为90%,特异度为97.5%,ROC曲线下面积为0.989(95%CI0.97~1.00).结论AP患者血浆游离mtDNA水平升高,血浆游离mtDNA拷贝数有助于诊断AP,也可作为预测AP病情严重程度及预后判断的一种标志物.

血浆游离DNA检测在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病。近年来,以高通量测序技术为基础的血浆游离DNA检测逐渐应用于卵巢癌,为卵巢癌的早期诊断、疾病监测及耐药机制的研究提供了新的方法,有望成为新的生物学肿瘤标记物。

荧光定量PCR测定原发性干燥综合征患者血浆循环DNA及其临床意义

目的：荧光定量PCR测定原发性干燥综合征（pSS）患者血浆循环游离DNA（cfDNA），分析其在疾病中的意义。方法选用人类基因组管家基因TaqMan？ GeneExpression Assays：ABI 4331182，ID：Hs02758991-g1，采用PCR水解探针模式（Taqman探针）测定pSS及正常对照组中血浆cfDNA的值，同时测定pSS患者血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM），并评定pSS的活动指数（SSDAI）和损害指数（SSDDI），分析cfDNA与疾病活动之间的关系。结果pSS组cf DNA浓度值为（380.64±259.10）μg/L，正常对照组cfDNA浓度值为（32.02±16.39）μg/L，两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）；pSS组中：cfDNA浓度与SSDAI呈正相关（r=0.533， P〈0.01），与SSDDI无相关性（r=0.051，P〉0.05），SSDAI与SSDDI呈正相关（r=0.412，P〈0.01），pSS组以SSDAI值中位数4分为2组，31例pSS （SSDAI≥4）的cfDNA浓度值（509.70±215.57）μg/L，35例pSS（SSDAI〈4）的cfDNA浓度值（262.65±186.35）μg/L，两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论血浆cfDNA在pSS患者中升高，与干燥综合征疾病活动性相关，血浆cfDNA可作为PSS疾病活动的观察指标。

血浆mtDNA水平与体外循环心脏术后炎症反应的关联性研究

目的探究体外循环心脏术后ICU患者血浆mtDNA水平与炎症细胞计数和炎症因子表达之间的潜在联系。方法2015年9月1日到2016年12月1日,华西医院心外科行体外循环心脏手术患者,返回ICU半小时内采集血常规、肝功和肾功、NT-proBNP、IL-6、CRP、PCT和mtDNA。规范完成检测和结果判定及录入,SPSS21.0进行统计分析。结果(1)纳入患者962名,男性459名,女性503名。(2)血浆mtDNA水平对数值与体外循环心脏术后血小板活化程度对数值之间存在直线相关(r=0.1027,P=0.0028)。(3)血浆mtDNA水平平方根数值与体外循环心脏术后中性粒细胞绝对值平方根数值之间存在直线相关(r=0.1069,P=0.0040)。(4)血浆mtDNA水平对数值与体外循环心脏术后IL-6对数值之间存在直线相关(r=0.0798,P=0.0453)。结论血浆mtDNA水平与体外循环心脏术后早期患者的全身炎症反应密切相关。体外循环过程中活化炎症细胞可能是血浆mtDNA的释放来源。

外周血游离线粒体DNA与肿瘤相关性的研究进展

线粒体DNA因长度短、分子结构简单、数量大等独特特点迅速成为引人注目的肿瘤早期诊断分子工具。近年来关于外周血游离线粒体DNA(ccfmt DNA)在肿瘤早期诊断和预后监测上潜在价值的转化研究已取得显著进展。本文归纳了ccfmt DNA的来源及含量变化的可能机制,总结了ccfmt DNA定量检测技术的挑战,综述了其含量变化同肿瘤发生发展的关系,并讨论其作为新的肿瘤标志物的潜在临床价值。

血浆cfDNA甲基化联合检测在肝癌诊断中的价值

目的 探讨血浆循环游离DNA(cfDNA)中GNB4、TCF24、Riplet、ACP1和TSPYL5基因甲基化对肝癌诊断的临床价值。方法 利用滑动窗口技术在公共数据库中筛选肝癌和正常组织间的差异甲基化标志物并分析其甲基化水平。从郑州大学第一附属医院收集肝癌、肝硬化组织和健康人白细胞样本,Sanger测序检测筛选出的标志物的甲基化水平,选出敏感度和特异度较好的标志物。收集24例肝癌、23例肝硬化和99例健康人血浆,通过甲基化特异性PCR检测上述标志物单独和组合时对肝癌的诊断性能。结果 5个标志物(GNB4、TCF24、Riplet、ACP1和TSPYL5)在肝癌样本中显著高甲基化。组织测序结果显示除TCF24外,其他标志物在肝硬化组织中的甲基化阴性率均大于80.0%。在血浆样本验证中,GNB4单独诊断肝癌的曲线下面积(AUC)最大,为0.765,敏感度为66.7%,特异度为91.8%。在多基因组合中,GNB4+TSPYL5的诊断性能最佳,AUC值为0.893,敏感度为83.3%,特异度为90.2%。结论 GNB4、Riplet、ACP1和TSPYL5甲基化可用于肝癌诊断,且联合诊断性能优于单一基因。

外周血游离线粒体DNA定量检测在结直肠癌患者中的表达及意义

目的评价外周血游离线粒体DNA(circulating cell free mitochondrial DNA, CCF mtDNA)在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者组织中的表达及其临床意义。方法收集102例CRC患者的癌组织及癌旁组织标本、30例原发性CRC患者及体检健康者血浆标本,实时荧光定量PCR检测各组CCF mtDNA的表达水平,并分析CCF mtDNA含量与CRC患者临床病理参数的关系。ROC曲线分析其作为CRC筛查标志物的效能。结果 CRC患者癌组织中的CCF mtDNA含量(85.94±4.54)明显低于癌旁组织(183.10±7.59),差异有统计学意义(t=11.04,P<0.05)。低分化癌组织中的CCF mtDNA含量(57.75±5.26)明显低于中分化(92.64±5.68)及高分化(110.00±14.95)癌组织,差异有统计学意义(F=8.42,P<0.05)。CCF mtDNA含量高低与CRC患者的预后无关(χ2=0.261,P=0.610)。CCF mtDNA筛查CRC的AUCROC为0.921,敏感性为0.833,特异性为0.933。结论 CCF mtDNA含量在癌组织中下降,但与预后无关,可能作为CRC的筛查标志物。

食管癌高发人群血浆游离DNA中的p38MAPK基因检测研究

目的:检测食管癌高发人群哈萨克族食管癌患者血浆游离DNA(cfDNA)中的p38MAPK基因并结合食管癌组织样本中p38MAPK蛋白的表达情况,探讨cfDNA中p38MAPK基因作为食管癌诊断新型分子标志物的意义。方法:收集20例哈萨克族食管癌患者手术治疗前、后的清晨空腹外周静脉血各10 mL及相对应患者术后组织的石蜡切片标本,10例健康哈萨克族人群的外周静脉血10 mL。离心柱吸附法提取cfDNA,直接PCR法检测cfDNA中的p38MAPK基因。免疫组织化学法检测患者术后组织中p38MAPK蛋白的表达情况并根据患者年龄、性别、分化程度、肿瘤最大径、T分期进行分组比较。结果:哈萨克族食管癌患者手术治疗前、后血液中cfDNA浓度均高于健康哈萨克族人群(P<0.05);患者手术治疗前cfDNA中p38MAPK基因检出率显著高于健康人群组(P<0.05),手术后cfDNA中p38MAPK基因检出率与健康人群组差异无统计学意义(P>0.05);患者术后免疫组化检测结果显示p38MAPK蛋白在高、中分化组中的阳性表达率高于低分化组(χ^(2)=13.939,P<0.05),在肿瘤最大径≤2.5 cm组中的阳性表达率高于>2.5 cm组(χ^(2)=0.014,P<0.05),p38MAPK蛋白的阳性表达率在不同年龄、性别、T分期患者肿瘤组织之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:食管癌高发人群血液中cfDNA浓度显著高于健康人群,提示cfDNA浓度可能用于早期食管癌筛查。哈萨克族食管癌患者血液cfDNA中p38MAPK基因检出率显著高于健康人群组,又提示cfDNA中p38MAPK基因可能作为诊断食管癌的非侵入性新型分子标志物。

血浆循环DNA在肺癌诊断上的应用

目的研究血浆循环Fhit基因D3S1300位点杂合性缺失(LOH)作为肿瘤标志物在非小细胞肺癌早期诊断中的意义。方法以微卫星技术检测58例非小细胞肺癌(Nonsmallcelllungcancer,NSCLC)患者血浆及肿瘤组织以及40例非肺癌肺科住院患者血浆Fhit基因D3S1300LOH的表达情况。结果58例NSCLC患者中肿瘤组织D3S1300LOH检出率为41.4%(24/58),在其匹配的血浆中D3S1300LOH检出率为29.3%(17/58),二者差异有统计学意义(P<0.05)。对照组血浆游离DNAD3S1300LOH检出率为5%(2/40),与NSCLC组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论血浆循环DNAFhit基因D3S1300LOH是一种简单有效的肺癌肿瘤筛选标志物。

孕期血浆游离DNA相关指标对不良妊娠结局预测价值的研究进展

不良妊娠结局会影响胎儿的生长发育,并威胁母婴生命安全。因此,不良妊娠结局的早筛查、早发现、早预防对母婴健康尤为重要。孕期血浆游离DNA(cfDNA)主要来自母体髓系/淋巴系细胞和胎盘滋养细胞,其中cfDNA浓度、游离胎儿DNA分数、线粒体DNA、核小体启动子等cfDNA相关指标对不良妊娠结局的预测价值各不相同,本文就近年来各cfDNA相关指标预测常见不良妊娠结局的研究进展进行综述。

血浆/血清游离核酸与无创性产前诊断

循环核酸包括循环DNA和RNA,是近年发现的一类新的血清/血浆分子生物标志物。循环核酸的发现、研究开创了无创性产前诊断的新领域。本文主要阐述了母体血浆中胎儿游离核酸的生物学特性及其在产前胎儿性别鉴定和RHD血型分型、孟德尔疾病、异倍体检测、妊娠合并症方面的应用。

中国人血浆DNA定量多中心合作研究进展

血浆DNA（plasmaDNA）又被称为循环DNA（circulating DNA），是存在于循环血液中的细胞外DNA（cell-free DNA）,它可以以DNA-蛋白质复合物的形式存在，也可以游离DNA片断形式存在。由于健康状态下少量衰老死亡（坏死或凋亡）细胞的DNA的释放,健康人血液中存在一定量的游离DNA。同时，由于健康状态下，循环DNA的生成与清除处于动态平衡状态，因此对于健康人而言，血液中循环DNA的水平能够维持在一个比较恒定的低水平。

循环肿瘤DNA在消化系统肿瘤中的应用

循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)属于血浆游离DNA(circulating free DNA,cfDNA)的一种,是通过凋亡或坏死的肿瘤细胞释放到血液中,或由肿瘤直接分泌。ctDNA携带肿瘤特异性基因特征和表观遗传学特征,包括基因突变、染色体重排、拷贝数变异和甲基化改变。ctDNA属于液体活检技术,具有操作方便、重复性高、创伤性小等优势。ctDNA可应用于消化系统肿瘤早期癌症的筛查和诊断、指导治疗、监测治疗效果、分析术后残余病灶及预防疾病复发。本文对ctDNA的生物学特性、检测方法、在消化系统肿瘤中的应用进行了探讨。

《自然：医学》报道检测循环肿瘤DNA的超灵敏新方法．iCAPP—Seq法

循环肿瘤DNA（ctDNA）是一种无细胞状态的胞外DNA，存在于外周血、滑膜液、脑脊液等体液中，亦称血浆DNA或血清DNA，由单链DNA或双链DNA以及单双链DNA混合组成，以DNA蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在。正常人循环血中少量游离DNA主要来源于细胞核DNA和线粒体DNA，常小于10ng／ml。而肿瘤患者循环DNA主要来自肿瘤细胞，其血浆DNA浓度平均可达180ng／ml。

孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究

本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性。采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化。结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因。结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断。