实时荧光PCR结合血浆池策略提高输血安全的研究

目的:探讨适合于实时荧光PCR技术筛查我国献血者和受血者的血浆池的大小,筛查HBV和HCV免疫学检测阴性的受血者和献血者血液标本,以期发现肝炎病毒血清转换前窗口期的血液标本。方法:用实时荧光定量PCR检测不同拷贝数的HBV DNA和HCV RNA;检测2006年3月~2007年3月期间协和医院接受输血且乙肝三系和丙肝检测结果为阴性的受血者标本,同时检测2006年4月~2006年7月期间孝感市血液中心乙肝三系和丙肝检测结果为阴性的无偿献血者。结果:不同拷贝数的阳性混合标本在1∶24稀释时,HBV DNA和HCV RNA的检测均为阳性;当滴度大于等于1∶48时,则出现了假阴性结果。2006年3月~2007年3月期间协和医院2142名接受输血且所有ELISA检测结果为阴性的患者进行核酸检测,HBV DNA荧光定量测定有2份标本阳性,HCV RNA荧光定量检测没有发现阳性标本;2006年4月~2006年7月期间孝感市血液中心1121名ELISA检测HBV和HCV结果为阴性的无偿献血者进行核酸检测,没有发现阳性标本。结论:采用24份标本混合组成一个检测池进行血液筛查,既准确又经济。

荧光定量PCR技术在血液筛查中的应用及可行性分析

目的 了解 ELISA法筛查血液乙型肝炎病毒 ( hepatitis B virus,HBV)的漏检率 ,探讨荧光定量聚合酶链反应 ( Flurescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术用于混合血浆标本病毒核酸检测的可行性。 方法 应用 FQ-PCR技术对常规 ELISA初复检正常献血者 (包括无偿献血者和个体献血者 )的微量血浆汇集池标本 ( 1 0人份× 2 0 μ1 )进行 HBV DNA检测 ,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。用双蒸水和 HBV DNA阴性汇集池中的血浆标本分别对 HBV DNA标准品(浓度为 1 0 3拷贝 /ml)作 1 0～ 5 0倍稀释后行 FQ-PCR测定 ,观察不同的血浆标本混合后是否存在 Taq酶抑制物的叠加作用及对 PCR结果有无影响。对浓度为 1 0拷贝 /ml～ 1 0 4拷贝 /ml的 HBV DNA标准品分别进行 FQ-PCR检测 ,确定试剂盒的敏感度。 结果 1 2 0 0份无偿献血者标本中有 1 1例 HBV DNA阳性 ( 0 .92 % ) ;4 70份个体献血者标本中有 1 0例 HBVDNA阳性 ( 2 .1 3% )。双蒸水与混合血浆稀释的 HBV DNA标准品的 FQ-PCR检测结果 (定性 )完全一致。试剂盒的检出下限为 1 0 2拷贝 /ml。 结论 ELISA法筛查血液存在较高的 HBV漏检率 。