大黄虫丸血浆药理学与血清药理学作用的比较研究

目的建立血浆药理学研究方法,探讨话血化瘀方剂大黄(?)虫丸对血小板聚集的影响。方法健康志愿者54人,其中5人服大黄(?)虫胶囊,5人服阿司匹林用于制备含药的血清和血浆,44人不服药,采血后分离血小板PRP,随机分成8组:自体血清组、异体血清组、大黄应虫血清组、阿司匹林血清组、自体血浆组、异体血浆组、大黄(?)虫血浆组、阿司匹林血浆组。每组分别加入相应的血清和血浆孵育30 min,用ADP和肾上腺素二种诱导剂处理,观察各组对血小板聚集的影响。结果用ADP和肾上腺素二种诱导剂处理,血小板在自体血清组、异体血清组、大黄应虫血清组、阿司匹林血清组中均不聚集,而在自体血浆组、异体血浆组、大黄(?)虫血浆组、阿司匹林血浆组中聚集。用ADP诱导自体血浆组与异体血浆组相比较,P1(1 min聚集率)、P5(5 min聚集率)、PM(最大聚集率)、TM(解聚集率)、I(聚集时间) 差异均无显著性(P>0.05)。大黄(?)虫胶囊和阿斯匹林组与异体血浆组相比较,P1、P5、PM、I差异均有非常显著性(P< 0.01),TM也显著下降(P<0.05)。大黄(?)虫胶囊与阿斯匹林组比较,P1、PM、I差异均有显著性(P<0.05),而P5、TM 二者作用相似。用肾上腺素诱导自体血浆组与异体血浆组相比较,P1、P5、PM、TM、I差异均无显著性(P>0.05)。大黄(?)虫胶囊和阿斯匹林组与?

基于血浆药理学的鳖甲超微粉抗肝纤维化作用研究

目的用血浆药理学方法,体外观察鳖甲超微粉含药血浆抗肝纤维化作用。方法采用体外肝纤维化细胞模型,以大鼠含药血浆对HSC-T6细胞增殖的影响为指标,采用效应动力学方法,确定大鼠给药方案和采血时间,并优选体系中血浆添加量。制备鳖甲超微粉和普通粉含药血浆,MTT法检测含药血浆对HSC-T6细胞增殖的影响,ELISA法测定含药血浆对HSC-T6细胞胶原分泌的影响。结果鳖甲超微粉和普通粉含药血浆对HSC-T6细胞增殖和Ⅰ型胶原合成均有显著抑制作用(P<0.01),超微粉组的抑制作用强于普通粉组,且有显著性差异(P<0.01)。结论鳖甲超微粉碎后可提高其抗肝纤维化疗效。

中药血清药理学和血浆药理学应用比较研究

1988年,日本国东京都医院的田代真一正式提出了中药"血清药理学"的概念,为中药复方的研究提供了较好的方法。但随着该方法的广泛应用,不少问题凸显出来,2008年,贺石林创立"血浆药理学"方法,提出在一些研究中,血浆药理学的效果优于血清药理学。对血清药理学和血浆药理学进行比较,并对其应用范围进行综述。

关于中药血清药理学方法的再思考

血清的形成与凝血及其相关过程(纤溶与补体系统活化)的蛋白酶级联反应以及血小板和白细胞活化有关,这些过程直接影响血标本的组成,并可能也影响中药成分;但这些过程可用抗凝剂而加以避免。因此,血浆的组成较血清能更好地反映生理、病理状况和吸收进入循环血中药物变化。根据已有报道,药物浓度与反应物质在血浆与血清中可能存在差异,故倡导在中药半体内实验中采用血浆药理学方法。由于不同抗凝剂的作用机制各异,究竟哪一抗凝剂适用于哪类半体内实验,需要进一步开展研究。我们建议在大多数中药半体内实验中,可以采取含药血浆与含药血清平行观察,除非事先对该试验的干扰已有充分了解。

盐酸小檗碱含药血清与血浆抗鼻咽癌CNE-1细胞作用的比较分析

目的盐酸小檗碱体外抗肿瘤等作用活性显著,目前针对其从体外过渡到体内的研究偶见报道,文中研究通过半体内研究方法,比较盐酸小檗碱含药血清、血浆对人鼻咽癌CNE-1细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法新西兰白兔灌胃给药,分离血清、血浆后,56℃灭活30 min,制成含药血清、血浆,采用反向高效液相色谱法(rerersed phase high performancel iquid chromatography,RP-HPLC)分析盐酸小檗碱含量,采用MTT法比较不同作用时间和剂量对鼻咽癌CNE-1细胞增殖的抑制作用,用Annexin v-FITC流式细胞术观察诱导细胞凋亡情况。结果盐酸小檗碱含药血清、血浆均能够抑制CNE-1细胞增殖,含药血浆的抑制作用强于含药血清,且含药血浆能显著诱导CNE-1细胞凋亡。结论凡是使用血清与血浆均可的实验,应当优先选用含药血浆。

补阳还五汤及其有效组分和三七总皂苷含药血浆抗血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用

目的:研究补阳还五汤及其有效组分和三七总皂苷(total Panax notoginseng saponins,TSPN)含药血浆对血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)增殖的影响。方法:采用血浆药理学方法及 PDGF—BB 诱导 VSMC 增殖模型。以甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tet-razolium,MTT)法检测空白血浆对 VSMC 生长的影响和含药血浆对 PDGF—BB 诱导的 VSMC 增殖的半数抑制浓度,确定补阳还五汤及其有效组分和三七总皂苷用药浓度。MTT 法和流式细胞术检测补阳还五汤及有效组分和 TSPN、阿托伐他汀对 VSMC 增殖活性及细胞周期的影响。结果:PDGF—BB 刺激后,VSMC 增殖活性显著增强,G_0/G_1期细胞数减少,G_2/M 期和 S 期细胞数增多。与PDGF-BB 刺激组比较,补阳还五汤、有效组分生物碱和苷、TSPN、阿托伐他汀等含药血浆均可抑制 PDGF—BB 诱导的 VSMC 增殖,增加 G_0/G_1期细胞数,减少 G_2/M 期和 S 期细胞数。结论:补阳还五汤及其有效组分和 TSPN 均可抑制 PDGF—BB 诱导的 VSMC增殖。生物碱和苷可能为补阳还五汤中抗 VSMC 增殖的主要药效物质,补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷具有与阿托伐他汀、TSPN相似的抗 VSMC 增殖的作用。

补阳还五汤含药血浆和含药血清对氧剥夺大鼠脑微血管内皮细胞分泌NO、vWF、6-keto-PGF1α的影响及与体内实验的比较研究

目的:比较补阳还五汤含药血清和含药血浆对缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)分泌NO、v WF、6-ketoPGF1α的水平与体内实验真实值的接近程度,为半体内实验选择含药血浆还是含药血清提供参考依据。方法:以氧剥夺BMECs模型为研究对象,观察补阳还五汤含药血浆和含药血清对BMECs条件培养液中一氧化氮(NO)、血管性假血友病因子(v WF)、6-酮-前列腺素1α(6-keto-PGF1α)含量的影响,并与补阳还五汤干预的中动脉阻塞模型大鼠血浆上述指标水平进行比较。结果:结果发现:与空白血浆组合空白血清组比较,补阳还五汤含药血浆和含药血清均能明显降低氧剥夺BMECs条件培养液中v WF的含量,升高NO、6-keto-PGF1α水平,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);含药血浆组v WF、6-keto-PGF1α水平与体内实验的相关系数r分别为0.928和0.933,明显高于含药血清组(r=0.715、0.770,P<0.05),而含药血浆组和含药血清组NO含量与体内实验相关系数分别为0.702、0.759,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:运用半体内实验研究补阳还五汤对脑血管内皮细胞的作用,血浆药理学方法比血清药理学方法可靠。

健脾消积汤含药血浆对肝细胞癌HepG2细胞的抑制作用及其机制

目的探讨健脾消积汤含药血浆对肝细胞癌HepG2细胞的抑制作用及其机制。方法将30只SD大鼠随机分为健脾消积汤组及空白对照组,每组15只,分别以健脾消积汤、生理盐水灌胃后,获取其血浆。以10%、15%、20%健脾消积汤组大鼠血浆作用于肝癌HepG2细胞(含药血浆组),同时以等浓度的空白对照组大鼠血浆处理HepG2细胞(空白血浆组)。两组细胞分别培养24 h、48 h、72 h后,以CCK-8法检测HepG2细胞的增殖情况。采用两组大鼠15%血浆作用于肝癌HepG2 48 h后,检测细胞的迁移情况及其转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的mRNA、蛋白表达水平。结果不同浓度空白血浆组及含药血浆组的A值比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中15%、20%含药血浆组在48 h的A值均低于相对应浓度的空白血浆组(P<0.05);含药血浆组仅于48 h时对HepG2细胞增殖的抑制率>0,但各组间的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。含药血浆组HepG2的迁移细胞数少于空白血浆组(P<0.05)。含药血浆组TGF-β_1mRNA的相对表达量低于空白血浆组(P<0.05),且TGF-β_1的蛋白表达量较空白对照组有所下调。结论健脾消积汤含药血浆对肝癌HepG2细胞增殖、迁移有一定的抑制作用,其机制可能与下调TGF-β_1的表达有关。

补阳还五汤含药血浆和血清对缺氧损伤大鼠BMECs纤溶系统和黏附分子表达影响及与体内实验的比较研究

目的:比较补阳还五汤含药血清和含药血浆对缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)纤溶系统和黏附分子的表达与体内实验真实值的接近程度,为半体内实验选择含药血浆还是含药血清提供参考依据。方法:用颈内动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,缺氧培养箱孵育BMECs,采用ELISA法测定PAI-1、t PA的表达,RT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1 mRNA的含量,Western Blot法测定ICAM-1、VCAM-1蛋白的含量。结果:补阳还五汤含药血浆较含药血清更显著降低缺氧损伤大鼠BMECs PAI-1、增强t PA水平,含药血浆和含药血清均能明显降低ICAM-1、VCAM-1、ICAM-1 mRNA及VCAM-1 mRNA含量,与空白血浆、空白血清比较,差异显著(P<0.05);半体内实验的含药血浆与体内实验真实值各指标相关系数均高于含药血清。结论:含药血浆比含药血清更接近体内真实情况,在进行半体内实验研究中药复方对纤溶系统和黏附分子蛋白及mRNA表达的影响时,特别是研究纤溶系统PAI-1和t PA指标的表达时,建议优先选择血浆药理学方法。

体外细胞实验中药干预方法研究进展

中药及复方的药理研究为中医中药的科学性提供证据,体外细胞培养技术在中药及复方的体外细胞实验中应用广泛,中药的复杂性使药物的添加方式成为研究的关键影响因素之一。目前应用的干预方法主要有3种:中药提取物/纯化物直接添加、中药血清药理学、中药血浆药理学。3种添加方法各有利弊,是否选择了合适的干预方法直接影响实验结果的可信度。国内研究多采取中药血清/血浆药理学,但是局限于口服中药复方的研究,同时其他给药途径的研究方法基础薄弱,需要归纳与总结。总之,中药干预方法的选择存在争议,需要进一步讨论。就此文章查阅近十几年来国内外文献,对体外细胞实验中中药的干预方法及选择进行总结,为今后相关实验研究提供参考。