实时荧光定量PCR法检测EB病毒感染患儿血浆EBV-DNA载量的临床意义

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法外周血血浆EBV-DNA载量检测在小儿EB病毒(EBV)感染性疾病中的应用意义。方法选取2017年12月至2019年7月于河南省儿童医院就诊的150例疑似EBV感染患儿,根据实验室EBV抗体谱检测结果分为EBV活动感染组(64例)、EBV既往感染组(65例)、非EBV感染组(21例)。所有患儿均接受外周血血浆EBV-DNA载量检测及血清EBV-CA IgM检测。分析各组外周血血浆EBV-DNA载量检测结果、血清EBV-CA IgM检测结果。结果3组患儿血浆EBV-DNA阳性率及血浆EBV-DNA载量相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。原发感染者外周血血浆EBV-DNA阳性检出率为83.67%(41/49),血清EBV-CA IgM阳性检出率为77.55%(38/49),差异有统计学意义(P<0.05)。活动感染者血浆EBV-DNA阳性检出率为81.25%(52/64),血清EBV-CA IgM阳性检出率为68.75%(44/64),差异有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光定量PCR法检测外周血血浆EBV-DNA载量是检测小儿EBV活动性感染的较好指标。

EB病毒抗体联合EBV-DNA载量在传染性单核细胞增多症患儿中的诊断价值

目的探讨EB病毒(EBV)抗体联合EBV-DNA载量在传染性单核细胞增多症(IM)患儿中的诊断价值。方法选取60例IM患儿作为观察组,同期在我院行健康体检EB病毒排查的60例正常儿童作为对照组。对比两组EBV抗体阳性率和EBV-DNA载量,不同年龄段患儿组EBV抗体阳性率,以及各检测指标对IM的诊断价值。结果两组EBV抗体(EA-IgM、VCA-IgG、VCA-IgM、EB-DNA及VCA-IgM联合EB-DNA载量)阳性率比较,观察组更高(P<0.05),而NA-IgG阳性率比较无差异(P>0.05)。经对比不同年龄段患儿EBV抗体阳性率发现,3~6岁患儿EBV抗体阳性率比例最高,且随着年龄增长,VCA-IgM和VCA-IgG阳性率呈现增高的趋势,但无差异(P>0.05)。单项指标检测比较发现,VCA-IgM的诊断价值最好,比较各组诊断指标(敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值)发现,VCA-IgM联合EB-DNA载量的各项诊断指标均高于VCA-IgG单独检测,敏感度、准确度和阴性预测值均高于VCA-IgM和EB-DNA单独检测(P<0.05)。结论IM患儿采用EBV抗体VCA-IgM联合EBV-DNA载量联合检测的敏感度、准确度和阴性预测值均更高,对评估患儿病情更有利,值得临床借鉴。

保存时间对血浆样本HIV-1病毒载量测定值的影响研究

目的观察保存时间对血浆样本艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒载量测定值的影响。方法应用HIV-1核酸序列扩增系统技术(NASBA)对87份-20℃保存的HIV-1抗体阳性血浆样本分组,分别在第0、3、6、11、12、13、14个月进行HIV-1病毒载量检测。结果-20℃保存3个月的样本病毒载量无明显降低,平均下降0.210Log值(P>0.05),6个月以后的样本病毒载量明显降低,平均下降0.256Log值(P<0.05),11、12、13个月以后的样本病毒载量明显降低,平均下降大于0.428Log值(P<0.05),但病毒载量下降幅度与原始病毒载量无关(P>0.05)。结论血浆样本在-20℃条件下保存6个月以上HIV-1 RNA病毒载量水平降低明显,已不能真实反映原始样本病毒载量水平,用于病毒载量检测的血浆样本在-20℃冰柜中不宜超过3个月。

血浆置换治疗对重型肝炎患者病毒载量的影响及临床意义

目的:观察并探讨经血浆置换(PE)治疗后重型肝炎(重肝)患者血清中HBVDNA载量的变化及其临床意义。方法:随机选取48例乙型肝炎病毒标志物阳性的重肝患者,在内科基础治疗上加用PE治疗。观察患者在PE治疗前后血清中HBVDNA载量的变化及各项肝功能指标的变化。结果:48例患者血清HBVDNA载量明显下降,治疗有效组比治疗无效组降低更明显,对肝功能和临床症状的改善也更明显。结论:PE治疗可有效去除重肝患者血清中HBVDNA ,从而减轻由其诱发的机体免疫反应,改善临床症状及肝功能,提高患者的存活率。

血浆置换治疗重型肝炎对病毒载量的影响及临床意义

目的观察并探讨血浆置换(PE)治疗后重型肝炎患者血清中HBV-DNA载量的变化及其临床意义。方法随机选取48例乙型肝炎病毒标志物阳性的重肝患者,在内科基础治疗上加用血浆置换治疗。观察患者在PE治疗前后血清中HBV-DNA载量的变化及各项肝功能指标的变化。结果48例患者经PE治疗,血清HBV(?)DNA载量明显下降,治疗有效组比治疗无效组降低更明显,对肝功能和临床症状的改善也更明显。结论PE治疗可有效去除重型肝炎患者血清中HBV-DNA,从而减轻由其诱发的机体免疫反应,改善临床症状及肝功能,提高患者的存活率。

HIV/AIDS患者血浆病毒载量及外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的观察国内HIV/AIDS患者血浆病毒载量和外周血CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞的变化,探讨这些变化的临床意义。方法选择未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者124例,用bDNA法检测血浆病毒载量,并用流式细胞仪检测外周血CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞。结果 AIDS患者的血浆病毒载量明显高于HIV感染者,血浆病毒载量与CD_4^+细胞计数呈显著负相关,但其最高峰位于CD_4^+细胞计数100/μl处,然后随着CD_4^+细胞计数的下降而减少。CD_4^+T细胞计数为AIDS组<HIV组<正常对照组;HIV感染者的CD_8^+T细胞计数显著高于正常组和AIDS组,而AIDS患者CD_8^+T细胞数则随着CD_4^+T细胞减少而下降。结论血浆病毒载量随着疾病进展而显著升高,但在疾病晚期则有所降低。外周血CD_4^+T细胞计数随着疾病的进展而进行性减少;CD_8^+T细胞计数在感染早期显著升高,进入晚期则减少。在评价HIV感染者和AIDS患者病情时,应结合病毒载量、CD_4^+、CD_8^+T细胞计数综合分析。

EB病毒抗体联合EBV-DNA载量检测诊断儿童传染性单核细胞增多症的临床价值

目的研究EB病毒(EBV)抗体联合EBV-DNA载量检测诊断儿童传染性单核细胞增多症(IM)的临床价值。方法回顾性分析2020年1月至2021年12月该院收治的75例IM患儿作为病例组,另选取同期70例非IM儿童作为对照组。检测并比较两组EBV抗体水平以及EBV-DNA载量,分析EBV抗体以及EBV-DNA载量对IM的诊断效能。此外,对所有IM患儿实施常规治疗,将其根据治疗1周后的EBV-DNA载量差异分为EBV-DNA转阴组及未转阴组。通过单因素及多因素Logistic回归分析IM患儿治疗1周后EBV-DNA未转阴的影响因素。结果病例组EBV-CA-IgG、EBV-CA-IgM以及EBV-DNA载量阳性率分别为62.67%、85.33%、77.33%,均高于对照组的15.71%、8.57%、7.14%,差异均有统计学意义(P<0.05)。EBV抗体以及EBV-DNA载量联合检测诊断IM的灵敏度、准确度分别为96.00%、91.03%,均高于EBV-NA-IgG、EBV-CA-IgG、EBV-CA-IgM以及EBV-DNA载量单项检测的灵敏度、准确度(P<0.05)。EBV-DNA未转阴组使用干扰素人数比例以及年龄、初始Ct值均低于EBV-DNA转阴组(P<0.05),而两组性别、白细胞计数及淋巴细胞计数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。经多因素Logistic回归分析发现,未使用干扰素是IM患儿治疗1周后EBV-DNA未转阴的危险因素(P<0.05),而年龄、初始Ct值均是IM患儿治疗1周后EBV-DNA未转阴的保护因素(P<0.05)。结论EBV抗体联合EBV-DNA载量检测诊断儿童IM的临床价值较高,可提升IM诊断的灵敏度及准确度。此外,使用干扰素与否、年龄以及初始Ct值均与患儿治疗1周后EBV-DNA未转阴有关。

外周血异型淋巴细胞比值联合EBV-DNA载量在小儿传染性单核细胞增多症诊断中的应用研究

目的 探讨在实施小儿传染性单核细胞增多症诊断期间外周血异型淋巴细胞比值+EBV-DNA载量检测的查应用可行性。方法 选取该院2020年3月—2021年8月收治的50例小儿传染性单核细胞增多症引发的发热患儿作为研究组;同时期选取该院收治的50例其他发热患儿作为参照组;针对两组患儿合理展开外周血异型淋巴细胞比值+EBV-DNA载量检测,对比两组单核细胞(M)、EBV-DNA、异型淋巴细胞。结果 研究组M(18.25±3.22)%、EBV-DNA(7.32±2.25)×10^(7)copies/mL、异型淋巴细胞(29.25±5.52)%均高于参照组,差异有统计学意义(t=9.262、18.210、34.868,P<0.05)。结论 外周血异型淋巴细胞比值+EBV-DNA载量联合应用,可通过对M%、EBV-DNA、异型淋巴细胞加以明确,显著提高小儿传染性单核细胞增多症诊断准确性,为疾病早期确诊奠定基础。

关于血浆病毒载量,CD_4^+细胞计数及细胞产生HIV-1病毒的讨论

关于血浆病毒载量，ＣＤ＋４细胞计数及细胞产生ＨＩＶ－１病毒的讨论最近许多文章都相继报道了在艾滋病毒感染者的血液里含有大量的ＨＩＶ－１病毒。有人估计在被感染者的全身血液中，每毫升血中至少要含有约１０６数量级的病毒颗粒。ＪｏｈｎＭ．Ｃｏｆｔｉｎ认为每毫升...

一种简易的人艾滋病毒(HIV-1)载量测定方法的建立与初步评价

目的 :建立一种简易的HIV 1感染者和艾滋病人血浆病毒载量测定的方法。方法 :构建含保守的引物SK14 5 SK4 31扩增靶序列的重组质粒pSPgag737,重组质粒体外转录产物经系列稀释得到HIV 1定量测定的外参照 ,在同样条件下以引物SK14 5 SK4 31对外参照和待测样品进行RT PCR扩增 ,用电泳图谱分析系统分析经EB染色的扩增产物电泳图谱 ,作出外参照的初始加入拷贝数与光强度的标准曲线 ,获得相应的回归方程 ,进而计算出待测样品的HIV 1病毒载量。结果 :重组质粒pSPaga737经酶切和PCR鉴定 ,确认含有引物SK14 5 SK4 31的扩增靶序列 ,用重组质粒体外转录 ,得到了 1～ 10 5copies的 10倍系列稀释的外参照 ,外参照标准曲线有较好的线性关系 (r =0 96 )。该方法的测定范围为 5× 10 2 ～ 5× 10 7拷贝 ml血浆。对 10个样品进行 3次重复测定 ,平均变异系数较小 (CV =2 0 % )。结论 :所建立的HTV 1病毒载量定量测定方法 ,操作简单 ,价格便宜 ,特异性好 ,同时有较好的可重复性。

NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力对儿童EB病毒感染的评估分析

目的评估EB病毒(EBV)早期抗体(EA-IgG)、病毒核抗原抗体(NA-IgG)、病毒衣壳抗原抗体(CA-IgM)、病毒衣壳抗原抗体(CA-IgG)及CA-IgG亲和力检测在儿童EBV感染诊断的临床价值。方法选取疑似EBV感染的受试儿245例,所有受试儿均由同一位接诊医师初步诊断为EB感染,采集所有受试儿的静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血浆EBV-DNA指标,采用间接免疫荧光法测定(IIFT)检测血浆NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力指标,参照EBV感染诊断的金标准诊断结论,计算采用血浆EBV-DNA载量、NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力及联合诊断EBV感染的诊断灵敏度、特异度及准确度。结果经临床诊断、实验室检测结果及病情随访综合诊断为EBV感染的患儿共计203例;血浆EBV-DNA载量诊断EB感染共计200例,NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力指标诊断EB感染分别为11例、169例、38例、182例、183例。EBV-DNA检测的诊断灵敏度及准确度均高于NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力及其联合诊断方案。结论NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力检测作为诊断儿童EBV感染虽然诊断效能方面稍差于血浆EBV-DNA载量检测诊断方法,但其可显示既往感染情况,且操作简便、快速,作为儿童大规模EBV感染筛查及完善病情资料的有益补充。

EBV-IM患儿外周血EBV-DNA载量与Th1/Th2相关细胞因子及临床特征的关系

目的 探讨EB病毒(EBV)感染的传染性单核细胞增多症(IM)患儿EBV-DNA载量与外周血辅助型T细胞(Th)1/Th2型相关因子及临床特征的关系。方法 选取2020年1月-2021年7月在吴江区儿童医院确诊为EBV-IM患儿73例作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测患儿外周血中EBV-DNA。根据病毒拷贝数,将所有患儿分为低载量组(n=17),中载量组(n=35)和高载量组(n=21)。检测三组患儿相关生化指标[白细胞(WBC)、血沉(ESR)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸肌酶同工酶(CK-MB)]、Th1/Th2型细胞标志物[白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-6、IL-10]及淋巴细胞亚群水平[CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(19)^(+)、CD16^(+)+CD_(56)^(+)];观察三组患儿的临床特征。结果 中、高载量组WBC、ESR、ALT、IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6水平均高于低载量组,IL-4、IL-10水平均低于低载量组(P<0.05);中、高载量组CD_(3)^(+)、CD_(8)^(+)水平高于低载量组,CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(19)^(+)、CD16^(+)+CD_(56)^(+)水平低于低载量组(P<0.05);高载量组发热时间和住院时间均长于低载量和中载量组(P<0.05);高载量组咽峡炎发生率高于低载量组(P<0.05),肝脾肿大发生率均高于低载量和中载量组(P<0.05)。结论 不同EBV-DNA载量患儿外周血Th1/Th2细胞因子表达水平和临床特征存在差异,且EBV-DNA载量与Th1/Th2细胞因子存在相关性,可以反映疾病的严重程度。

外周血淋巴细胞亚群在儿童EB病毒感染中的变化及临床意义

目的:探讨外周血淋巴细胞亚群在儿童EB病毒(EBV)感染诊断中的临床意义。方法:选取EBV感染患儿48例作为观察组,另选取急性支气管肺炎患儿23例和肺炎支原体(MP)感染患儿48例作为对照组。流式细胞术检测患儿外周血淋巴细胞亚群,并收集患儿临床资料。比较观察组与对照组、观察组传染性单核细胞增多症(IM)与非IM、肝功能异常与肝功能正常患儿淋巴细胞亚群变化。线性相关分析法分析观察组淋巴细胞亚群与血清EBV-DNA载量的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线评估淋巴细胞亚群的诊断效能。结果:EBV感染患儿外周血淋巴细胞数量、T细胞数量和比例、CD8^(+)T细胞数量和比例升高(均P<0.05),CD4^(+)T细胞比例、B细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)降低(均P<0.05)。EBV感染患儿外周血淋巴细胞改变与EBV-DNA载量相关。与非IM和肝功能正常患儿相比,IM和肝功能异常患儿淋巴细胞数量(均P<0.001)、T细胞数量(均P<0.001)和比例(P<0.001;P=0.002)、CD8+T细胞数量(均P<0.001)和比例(均P<0.001)、NK细胞数量(P<0.001;P=0.001)升高更为显著,而B细胞数量(P<0.001;P=0.049)和比例(均P<0.001)及CD4^(+)/CD8^(+)(P=0.001;P<0.001)降低更为显著。淋巴细胞亚群诊断效能分析显示,外周血淋巴细胞计数、CD3^(+)T细胞计数、CD3^(+)CD8^(+)T细胞计数、NK细胞计数、CD3^(+)T细胞比例和CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例对EBV感染具有较好的检验效能(AUC分别为0.750、0.773、0.826、0.689、0.718和0.779,均P<0.05)。结论:淋巴细胞亚群能够反映机体免疫状态,对EBV感染诊断及疾病进展和预后评估有重要意义。

血浆和外周血单个核细胞中EBV DNA载量在儿童EBV感染相关疾病中的临床意义

目的探讨血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)中人疱疹病毒4型(EBV)DNA载量在儿童EBV感染相关疾病诊断及预后评估中的价值。方法回顾性分析上海市儿童医院2019年4月至2020年12月采用实时荧光定量PCR技术分别进行外周血PBMCs及血浆EBV DNA检测的456例EBV感染住院患儿以及2306例健康儿童的病毒载量,并分析其与儿童EBV感染相关疾病的关系。EBV感染组中,男253例,女203例,年龄在8个月至16岁;健康对照组中,男1267例,女1039例,年龄在8 d至16岁。运用卡方检验比较计数资料组间率的变异,Mann-Whiteny秩和检验比较拷贝数组间,并采用Pearson检验分析EBV DNA拷贝数对数的相关性。结果EBV感染相关疾病以传染性单核细胞增多症最常见占73.68%(336/456)。EBV感染组中EBV DNA在血浆中检出率为91.89%(419/456),在PBMCs中检出率为99.34%(453/456),在血浆或PBMCs至少1种标本中检出率为100%(456/456);健康对照组血浆检出率为1.13%(26/2306),PBMCs检出率为30.01%(715/2306)。儿童EBV感染相关各疾病组(传染性单核细胞增多症、急性感染、肺炎、移植后淋巴增殖性疾病、噬血细胞综合征、扁桃体炎和淋巴结炎)与健康对照组的血浆和PBMCs中EBV DNA载量均有显著差异(血浆Z值分别为-47.18,-34.41,-33.40,-31.71,-24.38,-20.86和-20.59;PBMCs Z值分别为-33.17,-16.45,-11.33,-9.45,-5.57,-5.16和-5.45;P<0.05)。传染性单核细胞增多症组治疗缓解期的血浆和PBMCs中EBV DNA载量显著低于感染期(Z值分别为-11.45和-8.53,P<0.05);移植后淋巴增殖性疾病组血浆在感染期和缓解期EBV DNA载量有显著差异(Z=-4.13,P<0.05),而PBMCs中EBV DNA载量则无显著差异(Z=-0.817,P>0.05)。结论EBV感染以传染性单核细胞增多症为主,血浆和PBMCs中EBV DNA载量可作为EBV感染相关疾病有诊断价值的指标,两者联合检测可能有助于提升EBV感染的诊断能力。

人类免疫缺陷病毒-1感染者血浆病毒载量与睡眠质量分析

HIV感染后往往引发复杂的症候群.临床上,艾滋病的治疗方式也从早期的单纯关注抑制HIV复制和相关并发症的控制,发展到对艾滋病患者的身体和精神状况进行全方位的评估和保护[1-3],特别是对艾滋病患者的心理健康状况,如失眠、抑郁、躁狂等与艾滋病关系的研究[4-6],已成为艾滋病医疗和护理领域的一个新的热点.国内外均有研究表明,HIV感染者中失眠症的比例显著高于非HIV感染者[9-10].但以往的研究常将问卷调查和访谈作为主要手段,对患者不同的睡眠状况,也倾向于归因为患者对艾滋病这一客观事实的心理承受能力差异;而对患者睡眠相关生理指标则观察较少,且未区分不同病情程度患者的睡眠情况.本研究以HIV-1感染者血浆HIV RNA载量作为衡量病情程度的分组标准,收集不同组患者的匹兹堡睡眠指数评估问卷（PSQI）和相对应的体内褪黑素水平[11-12],试图对不同病情程度HIV-1感染者的睡眠情况与其体内生理因素变化进行初步探索.

儿童传染性单核细胞增多症48例临床分析

目的总结儿童传染性单核细胞增多症(IM)的临床特点,提高对该疾病的认识。方法对2021年1月1日至2022年12月31日广州市白云区第二人民医院收治的48例IM患儿的临床资料进行回顾性分析,其中女性20例,男性28例,年龄(5.53±2.15)岁,体质量(13.42±4.26)kg。结果IM发病以学龄前儿童多见,男性多于女性;所有的病例均有发热,其余的体征有咽峡炎、颈淋巴结肿大、皮疹、眼睑浮肿,呼吸系统受累最常见,部分病例伴有肝功能受损、脓毒血症、脾大;在48例病例中,白细胞计数、淋巴细胞比例升高者分别占66.7%(32例)、54.2%(26例),异型淋巴细胞≥10%患儿40例(83.3%),EB病毒(EBV)-CA-IgM阳性30例(62.5%),EBV-DNA载量阳性48例(100.0%),EA-IgG阳性6例(12.5%);有6例(12.5%)使用了抗生素,2例(4.2%)使用了免疫球蛋白,2例(4.2%)使用伐昔洛韦抗病毒。结论儿童IM临床表现多样,早期诊断困难,因此,对发热时间较长、抗生素治疗无效的患儿应及早完善外周血异型淋巴细胞、EBV-CA-IgM及EBV-DNA检测,以提高早期诊断率。大部分病例无须特殊治疗,以对症治疗为主。

143例首诊发现的中国艾滋病患者临床特征分析

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染及获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的临床特征,提高HIV/AIDS患者的早期诊断水平。方法回顾性分析了1988年1月～2006年4月在我院首诊发现并有完整病史资料的143例HIV/AIDS患者的临床资料。结果143例患者中,57例无临床症状,经常规检查发现;86例有临床症状,全身症状中发热50例、消瘦18例,系统症状中呼吸系统34例、皮肤黏膜17例、消化系统16例。合并的常见机会感染包括卡氏肺孢子菌肺炎(PCP)27例(34.2%),口腔念珠菌感染16例(20.2%),结核感染15例(19.0%),巨细胞病毒(CMV)感染9例(11.4%)。所有患者多种机会感染均发生在CD4+T淋巴细胞计数小于200/mm3时,而合并CMV感染及隐球菌脑膜炎时该计数多小于100/mm3。血浆病毒载量与CD4+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.420,P=0.001)。结论HIV/AIDS患者全身症状以发热、气短、消瘦最为明显。机会感染多侵及呼吸系统、皮肤黏膜、消化系统,并以PCP最常见。真菌是引起机会感染最多的病原。机会感染的发生与CD4+T淋巴细胞计数有一定相关性。