血栓性血小板减少性紫癜患者血浆VW因子裂解蛋白酶活性测定的临床意义

血浆VW因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性减低,超大VWF多聚体的出现,诱发血小板聚集,是血栓性血小板减少性紫癜(TTP)重要的发病机制。1997年以来国外已有逾千例TTP 溶血性尿毒症综合征 (HUS)患者作了ADAMTS13活性测定。作者综述了主要相关文献ADAMTS13的检测结果,就该项指标对TTP-HUS诊断敏感性和特异性,诊断意义作归纳评估,提出TTP综合诊断依据。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性及抑制物检测在获得性血栓性血小板减少性紫癜中的应用

目的探讨血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS 13）活性及抑制物检测在获得性血栓性血小板减少性紫癜（TTP）中的应用价值。方法应用残余胶原结合实验检测2013年1月至2014年12月17例获得性TTP患者的ADAMTS 13活性及抑制物,结合临床资料分析其临床意义。结果 17例患者中包括男3例、女14例,中位年龄49（27-73）岁。全部患者用残余胶原结合实验检测ADAMTS 13活性均降低并伴有抑制物阳性,其中16例（94.1%）ADAMTS 13活性重度降低（〈10%）。17例患者中仅5例出现＂五联征＂,全部患者均有溶血性贫血及血小板减少,查乳酸脱氢酶（LDH）、间接胆红素（IBIL）增高。15例患者送检外周血涂片,10例发现破碎红细胞,6例〉1%。结论获得性TTP诊断缺乏特异性临床表现及实验室指标,残余胶原结合实验检测ADAMTS 13活性及抑制物,方法简便、结果可靠,ADAMTS 13活性重度降低,伴有抑制物阳性可以为获得性TTP的诊断与鉴别诊断提供重要的实验室依据,并为血浆置换联合免疫抑制治疗提供理论基础。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性在系统性红斑狼疮并抗磷脂综合征中的临床意义

目的了解血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMT-13)活性与系统性红斑狼狼疮(SLE)合并抗磷脂综合征(APS)临床特点的关系以及其价值。方法采用残余胶原结合试验检测22例SLE患者、13例SLE并APS(SLE-APS)患者和22例正常人血清中的ADAMT-13水平,并分析其与SLE-APS患者及SLE患者临床表现、实验室指标、疾病活动度及预后的关系。统计学分析采用t检验、χ~2检验和Spearman检验。结果 (1)SLE-APS患者的血清ADAMTS-13活性下降,且与血栓及血小板减少的表现相关。(2)SLE-APS患者的血清ADAMTS-13活性与SLE疾病活动度成反比。结论 SLE-APS的患者可能存在更多的自身抗体以及存在更严重的血栓表现及血小板减少,因此可能导致体内血管性血友病因子(vWF)生成增加;存在抗ADAMTS-13抗体,从而最终导致血清ADAMTS-13的活性下降。

血管性血友病因子裂解蛋白酶的研究进展

血管性血友病因子裂解蛋白酶是一种大分子量的单链糖蛋白,属于金属蛋白酶的ADAMTS亚家族(ADAMTS13),在体外、体内有较长的半生存时间。其活性主要是在vWF225kDa亚单位A2区域的Tyr842-Met843间裂解vWF,将UL-vWF转变为分子量相对小的多聚体形式,从而保证vWF多聚体的多态性分布,预防微血管内血小板血栓形成。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性的检测方法及评估

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13,vWF-CP)裂解血浆中具有高黏附能力的超大分子量血管性血友病因子(UL-vWF),防止血小板因其引起聚集形成血栓。ADAMTS13活性异常是临床上血栓性血小板减少性紫癜(TTP),特别是遗传性TTP和特发性TTP发病的基础。其活性的检测在TTP临床诊断和治疗上具有日益重要的意义。目前报道的一些用于检测ADAMTS13活性的方法有十余种,本文对此进行综述。

血管性血友病因子裂解蛋白酶在血栓性血小板减少性紫癜的意义

血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWF-CP)是近年来新发现的一种金属蛋白酶,具有降解超大分子血管性血友病因子(vWF)的作用。vWF-CP缺乏是血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的主要发病机制,其原因多数为自身免疫性,少数为遗传性。多种疾病或药物引起的TTP也与内皮细胞毒性或免疫反应导致vWF-CP减少有关。血浆置换补充了vWF-CP,同时清除抗该酶的自身抗体与巨大vWF因子。vWF-CP的研究成果已使我们对TTP的临床诊断与治疗从经验阶段发展到理性阶段。

血栓性血小板减少性紫癜患者vWF裂解蛋白酶活性检测的意义

目的探讨血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的诊断和治疗对策。方法回顾性分析了4例TTP患者的诊断治疗经过,对其中2例TTP患者进行了vWF裂解蛋白酶(ADAMTS13)的活性、抑制物和基因检测。结果4例TTP早期误诊2例,其中1例为胃印戒细胞癌继发的TTP和骨髓坏死。2例TTP患者ADAMTS13的活性严重缺乏,其中1例因存在ADAMTS13基因纯合子错义突变而确诊为遗传性TTP。临床治愈2例,疗效不显著2例。结论对于有明显的血小板减少与微血管病性溶血性贫血,同时血LDH增高而疑为TTP的患者,如能及时检测ADAMTS13的活性,有助于早期确诊TTP;ADAMTS13抑制物的检测对于TTP治疗方案的选择具有指导意义。

维生素D对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达的影响

目的观察维生素D（VD）对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子（vWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）表达的影响。方法采用腹腔注射内毒素的方法制备脓毒症大鼠模型，随机分为五组：正常对照组、脓毒症组、骨化三醇组（分别给予骨化三醇1mg／kg、5mg／kg、25mg／kg），观察大鼠一般情况，肺组织病理及肺湿／干质量比变化，血小板计数变化，血清vWF、ADAMTS13变化。结果脓毒症组大鼠病态表现明显，骨化三醇组病态表现优于脓毒症组，骨化三醇各组肺组织病理改变较脓毒症组明显减轻；脓毒症组及骨化三醇组（1mg／kg、5mg／ks）血小板计数低于正常对照组，骨化三醇组（25mg／ks）血小板计数与正常对照组比较差异无统计学意义，但低于脓毒症组；脓毒症组血清vWF较正常组显著增高，骨化三醇各组较正常组亦显著增高，但低于脓毒症组；脓毒症组及骨化三醇各组血清ADAMTSl3水平较正常对照组显著下降，骨化三醇各组血清ADAMTS13水平与脓毒症组比较差异无统计学意义。结论VD抑制vWF表达，改善内皮细胞损伤进而影响脓毒症发病进程，而这一作用并不是通过提高ADAMTS13的表达实现。脓毒症发生时循环中血小板降低主要与内皮细胞损伤、vWF增加有关。

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达影响及维生素 D 的干预作用

目的：观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC）内血管性血友病因子（von willebrand factor， VWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（A disintegrin-like andmetalloproteinase with thrombospond in type-1 domain 13，ADAMTS13）表达的影响，以及维生素 D（vitamin D，Vit D）的干预作用。方法体外原代培养大鼠 PMVEC，随机分为6组：NC 组、LPS 组（给予100μg/mL LPS）、骨化三醇（Calcitriol，Cal）组（给予100 nmol/L Cal）及LPS＋Cal 1、2、3组（分别给予100μg/mL LPS 和5 nmol/L、20 nmol/L、100 nmol/L Cal），分别检测细胞裂解液中VWF、ADAMTS13 mRNA和蛋白表达情况。结果 LPS 组和 Cal 组 VWF、ADAMTS13 mRNA 和蛋白表达均无显著变化，LPS 组和 LPS＋ Cal 各组VWF mRNA、蛋白表达较NC组显著增高，LPS＋ Cal各组VWF mRNA、蛋白表达较LPS组显著降低， LPS 组和 LPS＋ Cal 各组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 NC 组显著降低，LPS＋Cal 三组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 LPS 组显著增高。结论 Vit D 在生理状态下并不能改变 PMVEC 中 VWF 和ADAMTS13的表达，但在受到LPS刺激后可使已增高的VWF表达降低，已降低的ADAMTS13表达增加，在脓毒症或急性肺损伤（acute lung injury，ALI）发病过程中，补充 Vit D 可能通过对 PMVEC中VWF、ADAMTS13表达的影响对疾病的转归起作用。

冠状动脉内血管性血友病因子裂解蛋白酶活性和全球急性冠状动脉事件注册评分对急诊经皮冠脉介入术治疗ST段抬高型心肌梗死病人住院期间主要心血管不良事件的预测价值

目的 探讨冠状动脉内血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性和全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)行急诊经皮冠脉介入术(PCI)的病人住院期间主要心血管不良事件(MACE)的预测价值。方法 选取2019年10月至2021年6月在潍坊医学院附属医院住院的162例STEMI接受急诊PCI治疗的病人,根据住院期间是否发生MACE,分为MACE组(38例)和无MACE组(124例)。记录两组病人的重要临床特征、GRACE评分。采用荧光共振能量转换法(FRETS-VWF73)分别测定两组病人急诊PCI术前外周血和冠脉内的ADAMTS13活性。四格表χ~2检验及独立样本t检验比较两组病人的重要临床特征、GRACE评分。Pearson相关性分析探讨ADAMTS13活性与GRACE评分的相关性。多因素logistic回归分析MACE的独立危险因素。应用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析冠脉内ADAMTS13活性、GRACE评分以及联合诊断对MACE的预测效能。结果 两组比较,MACE组病人糖尿病史、吸烟史更多,年龄较大、外周血血小板计数更低、凝血酶原时间(PT)更长、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)和肌钙蛋白I(cTnI)更高(P<0.05);MACE组病人GRACE评分更高[(187.26±35.50)分比(153.87±32.95)分,P<0.001],术前外周血[(59.01±4.56)%比(63.86±5.75)%]和冠脉内[(46.37±5.43)%比(54.26±5.70)%]的ADAMTS13活性更低(均P<0.001)。术前冠脉内ADAMTS13活性与GRACE评分中等强度负相关(r=-0.40,P<0.001),而外周血ADAMTS13活性与GRACE评分无明显相关性(r=-0.08,P=0.457)。多因素logistic回归分析,糖尿病史和GRACE评分为MACE的独立危险因素[OR=2.513,95%CI:(2.045,3.381),P=0.007;OR=1.089,95%CI:(1.033,1.147),P=0.001],术前冠脉内ADAMTS13活性是MACE的保护性因素[OR=0.568,95%CI:(0.429,0.753),P=0.001]。术前冠脉内ADAMTS13活性、GRACE评分诊断MACE的AUC及其95%CI分别为0.833(0.735,0.932)和0.746(0.624,0.867),截断值分别为50.95%和158.50分,联合诊断的AUC为0.893(0.824,0.962)。结论 GRACE评分增高、术前冠脉内ADAMTS13活性降低均是接受急诊PCI治疗的STEMI病人住院期间MACE的独立危险因素,二者联合诊断的预测价值更高。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性检测方法的研究新进展

血管性血友病因子裂解蛋白酶（vWF-cp）的活性与血栓形成及出血、微血管病变、弥散性血管内凝血（DIC）、肿瘤浸润与转移、肝脏疾病、自身免疫性疾病以及血栓性血小板减少性紫癜（TTP）等疾病的发病密切相关,检测ADAMTS-13活性水平对诊治这些疾病有着极其重要的意义,目前ADAMTS-13活性的检测方法繁多,而且检测技术不断改进。

血管性血友病因子裂解蛋白酶与血栓性微血管病的研究进展

血栓性微血管病(Thrombotic microangiopathy,TMA)是一组以非免疫性血管内溶血和缺血性器官功能障碍为特征的疾病,包括原发性血栓性微血管病[如血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)等]和继发性血栓性微血管病[如弥散性血管内凝血(Disseminated intravascular coagulation,DIC)等]。目前血管性血友病因子裂解蛋白酶(A disintegrin and metalloprotease with a thrombospondin type 1 motif member 13,ADAMTS13)在TTP诊疗中的作用相对明确,但是否在其他血栓性微血管病的诊疗中存在同样重要的价值并不清楚,ADAMTS13作用于相关血栓性微血管病的具体机制较为复杂。ADAMTS13在DIC、系统性红斑狼疮肾炎以及严重肝损伤等相关血栓性微血管病中活性均有不同程度的降低,或许可作为该类疾病的辅助诊断指标。本文主要从ADAMTS13与血栓性微血管病的发病机制及其在相关血栓性微血管病诊疗中的应用价值进行综述。

血管性血友病因子裂解蛋白酶与炎症反应相关疾病的研究进展

血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS-13)主要由肝脏星状细胞、血管内皮细胞、骨骼肌细胞等细胞合成和分泌,随着研究的深入发现,ADAMTS-13与血栓性血小板减少性紫癜、脓毒症、弥漫性血管内凝血以及自身免疫性疾病等的发生发展均有密切关系,本文就AD-AMTS-13与炎症反应相关疾病方面的研究进展作一综述。

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体的鉴定以及生物学功能的研究

目的:构建并鉴定血管血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体,并研究其生物学功能。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截断型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠,经标准单克隆抗体技术制备单克隆抗体。用ELISA方法鉴定单克隆抗体的特异性;应用免疫印迹技术确定单克隆抗体与全长ADAMTS13的识别能力;观察单克隆抗体对ADAMTS13水解v WF的影响。结果:最终获得6株抗ADAMTS13的单克隆抗体,克隆号分别为1G11、2F11、6G3、9E1、10A8、10B4。经ELISA鉴定,纯化后的单克隆抗体1G11和2F11的效价最高,与截断型ADAMTS13-T7蛋白结合能力比较,明显高于全长ADAMTS13蛋白。Western blotting结果显示,6个单克隆抗体都能与全长ADAMTS13结合,其中1G11和2F11条带最亮。功能实验表明,在变性条件下1G11和2F11能够明显抑制ADAMTS13水解v WF,并随着单克隆抗体浓度的增加而抑制作用增强。结论:成功获得针对ADAMTS13的单克隆抗体,其中两株为抑制性功能抗体。

血管性血友病因子裂解酶CUB区的稳定表达及其鉴定

目的 该研究旨在得到血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13中重组的CUB区蛋白,进一步研究其生物功能.方法 利用脂质体将编码CUB区序列的重组质粒pSecTag-CUB转染Hela细胞.用潮霉素（hygromycin-B）筛选得到阳性克隆细胞株,并扩大培养,收集上清.利用Ni-NTA琼脂糖柱,梯度咪唑淋洗法纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化产品纯度和免疫学活性.结果 成功获得一株能恒定分泌重组CUB区蛋白的细胞株CUB-7,每1 L培养上清可纯化剑6.0mg重组蛋白.Western blotting结果显示,6×His抗体能与重组蛋白在41kD处显单一条带.结论 重组蛋白具有较好的免疫原活性和纯度,为进一步研究CUB区在ADAMTS13中的作用机理和运用奠定了良好的基础.

血小板裂解液与血小板凝胶生长因子谱的表达差异研究

目的研究富血小板血浆(PRP)在不同制备条件下生长因子表达谱的变化,为临床治疗选择不同类型PRP提供实验依据。方法使用血液成分分离机单采7份PRP(30 mL/份),同一份PRP各留取10 mL并随机分成贫血小板血浆(PPP)对照组、PRP凝胶上清组和PRP裂解液组,PRP凝胶上清组采用牛凝血酶和葡萄糖酸钙制成预混剂,预混剂与PRP按照1∶9的比例添加以获取PRP上清液;PRP裂解液组采用在–20℃和37℃反复冻存融化5次,获取血小板裂解液。应用Quantibody®生长因子蛋白芯片检测获取的样品中生长因子谱的变化,并采用ELISA对差异生长因子进行验证。结果与PPP对照组比较,在PRP凝胶上清组中共有5个生长因子表达升高,分别为脑源性神经营养因子(BDNF,14.64倍),血小板衍生生长因子(PDGF-AA,4.53倍),表皮细胞生长因子(EGF,4.52倍),血管内皮生长因子(VEGF,3.45倍)和肝细胞生长因子(HGF,2.16倍),GO和KEGG分析表明这些因子主要富集于细胞迁移和Ras及PI3K-Akt信号通路激活,参与组织修复;而在PRP裂解液组中升高的生长因子分别为BDNF(20.74倍),EGF(11.12倍),转化生长因子-β1(TGF-β1,5.76倍),减少的生长因子是胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6,1.46倍),这些因子主要富集于MAPK信号通路和FoxO信号通路发挥抗炎作用。结论PRP凝胶上清和PRP裂解液均可释放多种生长因子;PRP凝胶上清产生的生长因子主要参与创面修复和伤口愈合,而PRP裂解液产生的生长因子主要参与组织修复和抗炎,因此针对不同的临床治疗目的,应选择不同方式制备的PRP制品,以达到最佳的治疗效果。

特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮患者血浆中血管性血友病因子裂解蛋白酶的测定

血管性血友病因子（vwF）裂解蛋白酶（ADAMTS13）是近年发现的调节vwF分子量大小的主要蛋白酶。ADAMTS13活性缺乏临床上可导致血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的发生。Moore等报道特发性血小板减少性紫癜（ITP）、系统性红斑狼疮（SLE）等患者ADAMTS13活性也降低，为进一步明确ADAMTS13在ITP和SLE发病中的意义，我们用新近建立的试剂盒检测了上述患者ADAMTS13及vWF的抗原含量。

肝硬化患者血型和病情分级与VWF、F Ⅷ和ADAMTS 13因子的关系

目的探讨ABO血型与血管性血友病因子抗原(VWF:Ag)、F Ⅷ活性(F Ⅷ:Ac)及血管性血友病因子裂解蛋白酶抗原(ADAMTS13:Ag)在肝硬化患者中的关系,并分析血型与肝硬化患者病情严重程度的相关性。方法收集228例肝硬化患者和168例健康对照人群的血液样本。VWF:Ag和ADAMTS13:Ag使用酶联免疫吸附试验检测;纤维蛋白原(Fib)、D-二聚体和FⅧ:Ac使用全自动凝血分析仪检测;ALT、AST、TB使用自动生化分析仪检测;PLT和ABO血型的表现型分别使用血液分析仪和间接方法检测。结果与健康对照组比较,肝硬化患者VWF:Ag和FⅧ:Ac明显升高,ADAMTS13:Ag明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与O血型肝硬化患者相比,非O血型患者VWF:Ag和FⅧ:Ac显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),而ADAMTS13:Ag在两组血型间的比较无统计学差异(P>0.05)。肝硬化患者CTP和MELD亚组分析显示:与O血型患者相比,非O血型患者VWF:Ag和FⅧ:Ac显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论非O血型肝硬化患者具有较高的VWF:Ag和FⅧ:Ac,且非O血型的肝硬化患者更易处于微循环障碍的状态,其病情发展较O血型肝硬化患者更加的严重。

血浆vWF和ADAMTS-13在评估VSD患儿术后血管内皮损伤及预后中的应用价值

目的:动态观察先天性心脏病室间隔缺损(VSD)患儿围手术期血浆中血管性血友病因子(v WF)、血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS-13)水平和活性变化,探讨VSD患儿血浆v WF抗原(v WF:Ag)和ADAMTS-13活性(ADAMTS-13:AC)对评估血管内皮损伤及预后的应用价值。方法:在这项横断面研究中,收集2018年9月至2019年3月期间于泰达国际心血管病医院行手术治疗的VSD患儿74例为观察组,其中单纯VSD 28例,VSD合并肺动脉高压32例,VSD合并心脏瓣膜病14例。收集同期于天津市儿童医院体检的健康儿童31例为对照组。记录患儿入院时各项生化指标,并分别留取患儿入院时、心脏手术后当天、术后1 d的外周静脉血浆,检测v WF:Ag、v WF活性(v WF:AC)、ADAMTS-13抗原(ADAMTS-13:Ag)、ADAMTS-13:AC的水平。结果:观察组术前v WF:Ag、v WF:AC水平明显低于对照组(均P<0.001),术后当天、术后1 d均持续明显升高(P<0.001)。观察组术前ADAMTS-13:Ag水平明显高于对照组(P<0.001),术后当天较术前明显下降(P<0.001),术后1 d较术后当天明显上升(P=0.033)。观察组术前ADAMTS-13:AC水平明显低于对照组(P=0.015),术后当天较术前明显下降(P=0.037),术后1 d较术后当天有所上升但差异无统计学意义(P=0.051)。3个亚组术后v WF、ADAMTS-13水平与观察组整体变化趋势基本相同。术后当天及术后1 d v WF:Ag/ADAMTS-13:AC比值在血管内皮损伤中具有较高诊断价值(AUC=0.80,P<0.001;AUC=0.93,P<0.001)。术前v WF和ADAMTS-13水平及相关基线指标均与术后感染、出血、血栓形成等事件无相关性。结论:VSD患儿术前v WF:Ag、v WF:AC和ADAMTS-13:AC水平较低,而ADAMTS-13:Ag水平较高;术后v WF:Ag、v WF:AC水平上升,ADAMTS-13:Ag水平下降。术后v WF:Ag/ADAMTS-13:AC比值在评价血管内皮损伤中有较高诊断价值;术前v WF和ADAMTS-13水平与围手术期临床事件的发生无相关性。