Z-score分数和泊松分布在血站血液核酸筛查室内质控的应用

目的制作1种采用Z分数(Z-score)和泊松(Poisson)分布方法对数值自定义的核酸定性室内质控图以反映血站血液(核酸)筛查实验室在控、假阳性、假阴性质控点。方法采集2018年12月份本站核酸实验室检测数据作出Excel表,自定义室内质控品检测阴性和阳性结果,以时间为横坐标,自定义值为纵坐标,绘制自定义室内质控核酸室内质控图;以时间为横坐标,以±3为告警限,±4为失控限,采用Z分数法建立核酸实验室内部质控品(IQ)、外部质控品(EQ)及标本内对照(IC)的核酸检测系统产生的扩增循环数(Ct值)Z-score质控图;采用Poisson分布概率法计算每日核酸检测阳性概率,在Excel表中以时间为横坐标,以概率为纵坐标,以P=0.05为失控限,绘制Poisson分布阳性概率质控图。验证将这3种统计方法质控图在血液筛查实验室的实用性、可行性。结果自定义核酸定性室内质控图简单明了可适用于不产生数值的室内质控;Z-score质控图能够同时呈现3个联检项目和内标的Z值,能够避免数据非正态分布引起的假失控;Poisson分布阳性概率图能够反应出实验室污染或检测过程有效性。结论 Z-score和Poisson统计方法建立的室内质控图满足了血站血液筛查实验室NAT定性检测室内质控的要求,具有预警失控和试验有效性的功能,能有效提升献血者血液核酸检测质量控制和实验室管理能力。

两种血液核酸筛查系统的核酸筛查能力比较研究

目的:对比分析两种国产血液核酸筛查系统的血液核酸筛查能力,以保障患者输血安全。方法:收集并整理无偿献血者2018-2019年使用A血液核酸筛查系统(简称A系统)和2020-2021年使用B血液核酸筛查系统(简称B系统)共计215330份血液核酸标本检测结果资料,其中A系统检测标本104649份,B系统检测标本110681份;分析比较A系统与B系统血液核酸筛查中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、人类免疫缺陷病毒核糖核酸(HIV-RNA)和丙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HCV-RNA)反应性标本,以及标本有效拆分率和反应性率。结果:在215330份检测标本中A系统和B系统共检出159份反应性标本,其中HBV-DNA反应性标本154份,HIV-RNA反应性标本4份,HCV-RNA反应性标本1份。在A系统检测的104649份标本中,有效拆分率为25.11%,标本反应性率为0.54‰,B系统检测的110681份标本中,有效拆分率为44.98%,标本反应性率为0.93‰,两者有效拆分率与标本反应性率比较,差异均有统计学意义(x^(2)=19.554,x^(2)=11.402;P<0.05)。A系统2018年和2019年有效拆分率分别为36.76%和20.00%,标本反应率分别为0.49‰和0.57‰;B系统2020和2021年有效拆分率分别为41.04%和50.53%;标本反应率为1.00‰和0.87‰。结论:在两种国产血液核酸筛查系统的血液核酸筛查能力中,B系统有效拆分率、标本反应性率略高于A系统,且性能较优。

血液核酸筛查在无偿献血人群中的应用

目的分析探讨血液核酸筛查在无偿献血人群的应用。方法研究纳入齐齐哈尔地区2019年1月—2019年10月38054名无偿献血者,观察本地区无偿献血者HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA检测的阳性率从而评价核酸检测的价值。结果献血员样本38054份中酶免合格样本37513份,经血液核酸筛查系统检出22份核酸反应性标本,包括HBV DNA 21例,HCV RNA1例,未检出HIV RNA。核酸检测22815份样本,共检出14例HBV反应性样本和1例HCV反应性样本,筛查阳性率为0.66‰,拆分阳性率为44.12%。结论经血清学ELISA检测合格的血液仍存在输血传播疾病的风险,主要是HBV。因此,核酸检测技术在无偿献血者血液筛查中的应用,可以最大限度地防止输血疾病的传播,使血液筛查质量显著提高,大幅度的提高献血的安全性。

戊型肝炎病毒核酸血液筛查的研究进展

戊型肝炎是一种戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染后以肝脏损伤为主的急性传染病,主要经粪-口传播,好发于青壮年及中老年人,在孕妇及免疫抑制人群中危害较大。据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)统计,全球每年约有2000万人感染HEV,其中约330万患者出现戊型肝炎症状。近期,通过血源传播而感染HEV的病例受到了广泛关注。经研究发现在全世界的无症状献血者中仅有0.013%~0.281%存在HEV病毒血症,但HEV在非常低的病毒血液浓度下同样具有传染性,并且迄今无特异的治疗药物和方法,所以对献血者进行HEV筛查是必要的。目前HEV筛查政策只在少数国家实施,包括普遍筛查和选择性筛查。而对献血者提供的血液,尚没有明确规定检测HEV感染的标志物。本综述主要通过对比国内外HEV的核酸血液筛查情况探讨其研究进展及必要性。

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术之间的相关性分析

目的探讨HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测方法与血液病毒核酸筛查技术之间的相关性。方法对我院血液科2011年12月到2013年12月血样标本12 300个,首先进行HBsAg和抗-HCV ELISA检测,再利用中和试验和重组免疫印迹试验(RIBA)进行确认检测,并对确认检测阳性和阴性样本行血液病毒核酸筛查,分析ELISA检测与血液病毒核酸筛查之间的相关性。结果经过HBsAg ELISA国产试剂和进口试剂检测血样标本12 300个,221个为阳性,占1.80%,国产和进口试剂检测一致率为99.72%,经过配对卡方检验,两种试剂间差异无统计学意义(P>0.05);抗-HCV ELISA检测阳性112个,占0.91%,国产和进口试剂检测一致率为99.60%,两种试剂间差异无统计学意义(P>0.05);HBsAg经过再次确认检测其中阳性201个,阴性20个,再次确认检测与国产和进口试剂检测一致率为90.95%;抗-HCV再次确认检测其中阳性55个、阴性43个、可疑14个,再次确认检测与国产和进口试剂检测一致率为61.61%;经过核酸检测技术(NAT)检测HBV DNA阳性和阴性分别为203个、18个,HCV RNA阳性和阴性分别为70个、42个。将两种因素合并计算,ELISA检测联合再次确认检测灵敏度为97.44%、特异度93.33%。结论 HBsAg和抗-HCV ELISA检测具有较高的灵敏度和特异度,但是由于使用ELISA试剂盒不同,常存在误检,而血液病毒核酸筛查技术可以减少这种误检,再次提高检出率。

核酸血筛试剂6混样和48混样检测在血液筛查中的适用性评价

目的评价核酸血筛试剂48份标本混合方式(以下简称48混样)与6份标本混合方式(以下简称6混样)在血液筛查中的适用性,为临床用血检测方案的制订提供参考。方法将阳性标本编到日常检测剩余的标本组中,分别用48混样和6混样方式进行检测,并分析检测结果。两种混样检测方式结果不一致的标本分别复检,将试验中阳性结果的混样拆分单检,单检阳性标本及背景为阳性的标本采用核酸单份标本定量试剂进行检测,并分析统计结果。结果共检测11856份标本,符合方案的共计10944份标本。6混样和48混样检出的HBVDNA、HCVRNA、HIV-1RNA阳性pool数分别为23、15、20和22、14、20。两种混样方式检测的HBV、HCV、HIV-1阳性符合率分别为95.65%、93.33%、100.00%,阴性符合率均为100.00%,总符合率分别为99.56%、99.56%、100.00%,Kappa值分别为0.975、0.963、1.000,两种混样方式检测结果一致性良好。结论综合6混样和48混样检测的检出率、效率、成本和漏检风险,48混样检测可以作为血站和血液制品公司血筛检测的一种参考方案。

某型血液筛查核酸检测扩增系统方法学性能验证评价

目的对献血者罗氏COBAS S201血液筛查核酸检测混检系统关键性能指标参数进行验证,为血液病毒核酸检测混检系统性能的确认提供支持数据,并建立科学可行验证方案。方法根据《分子诊断检验程序性能验证指南》(CNAS-GL039:2019)的验证基本要求,对ROCHE COBAS S201核酸检测混检系统的95%检出限、符合率、抗干扰能力、操作人员比对等4个关键参数指标进行全面性能验证,与厂家提供的说明参数进行比对,评估实验室检测系统的实际性能,保证血液检测质量。结果对实验室2台COBAS S201核酸检测混检系统进行厂家声明的95%检出限定值进行单检(PP1)重复检测5次检测,均为100%检出靶核酸,测定下限验证通过。使用单检模式检测5个不同HBV DNA浓度(25~400)IU/mL、5个不同HCV RNA浓度(25~400)IU/mL、5个不同HIV RNA浓度(100~1 000) IU/mL、5个阴性管,结果20支管所有检测值与真实值100%一致,性能参数"符合率"验证通过。对含有脂肪血、溶血、ALT>50 mL/L及梅毒阳性内源性干扰物质的3倍95%检出限定值标本进行重复检测3次,反应率均为100%(3/3),检出率达到100%;对照组(不含或在正常范围干扰物质)在3倍95%检出限这种极低的核酸定值标本同样检出反应性结果,两者的检出率统计学没有显著差异(P>0.05),充分说明献血者血液含有验证浓度的干扰物质(脂肪血、溶血、ALT≥50及梅毒阳性),对检出HBV/HCV/HIV病毒靶核酸无显著影响。同样的仪器同样的试剂同样的标本,由不同的操作人员来进行上样检测,结果出现100%一致性,可初步评估操作人员之间的操作在本次验证并没有差异。结论本研究建立的核酸混检系统的方法学性能指标(95%检出限、符合率、抗干扰能力、操作人员比对)验证方案,具有简易、灵活、科学、可行的特点,可为国内采供血机构同行核酸验证工作提供借鉴与数据支持。

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系

目的分析乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系。方法选择13085个血样标本,经HBsAg与抗-HCV酶联免疫检测,对确认阳性及阴性的血样标本进行血液病毒核酸方面的筛查,分析HBs Ag与抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术之间的关系。结果经HBsAg酶联检测显示,13085个血样标本中阳性219个,约占1.67%,分别经过国产或进口试剂检测分析,其一致率为99.55%;经抗-HCV酶联免疫检测显示,13085个血液样本中阳性者108个,约占0.83%,分别经过国产或进口试剂检测分析,其一致率为95.37%;再次确认HBsAg结果显示219个中阳性者198个,阴性者21个,分别经过国产或进口试剂检测分析,其一致率为90.41%;经抗-HCV再次检测确认108个中阳性者57个、阴性者44个、可疑结果7个,分别经过国产或进口检测试剂分析,其一致率为59.26%。将血液标本经核酸筛查技术测定乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)显示结果阳性者195个,阴性17个,而丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)测定结果显示阳性者72个,阴性者36个;合并计算这两种因素,经酶联免疫法测定及再次确认测定灵敏度为97.26%,其特异性计算为94.44%。结论经过HBs Ag及抗-HCV酶联免疫检测,其检测结果显示灵敏度及特异度均良好,但因试剂盒有所不同而出现误检的情况,但血液核酸筛查技术能够有效避免误检情况出现,促进检出率提高。

两种多重核酸血液筛查系统在血液筛查应用中的比较

目的通过对两种多重核酸血液筛查系统临床数据分析比较,为血站系统的使用提供参考。方法汇总2018年1-10月哈尔滨市血液中心采用北京万泰和罗氏多重核酸血液筛查系统进行检测的数据及部分阳性标本跟踪数据,统计分析这两个检测系统的性能差异及原因。结果万泰和罗氏核酸检测系统分别检测86 475份和36 641份标本,万泰系统的乙型肝炎病毒(HBV)假阳性率低于罗氏,罗氏系统的丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)假阳性率低于万泰;两个系统的HBV、HCV和HIV的阳性率基本一致。罗氏系统的无效率高于万泰系统。结论两个多重核酸血液筛查系统各有优劣,具有一定互补性,但均能从ELISA阴性标本中检测出一定数量的核酸阳性标本,检出率基本一致,均能提高输血安全性。

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系

目的评价乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系。方法抽取90份血液样本作为研究对象,通过抽签法分为实验组与对照组,每组45份。对照组采用HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测,实验组采用血液病毒核酸筛查技术。对比两组检测结果。结果实验组检测阳性22份,阴性22份,不确定1份,检测准确率为97.8%。对照组检测阳性20份,阴性12份,不确定13份,检测准确率为71.1%。实验组检测准确率高于对照组,差异具有统计学意义(χ~2=12.1805, P=0.0004<0.05)。实验组供血者检测很好20例,一般23例,不好2例,检测满意度为95.6%。对照组供血者检测很好10例,一般22例,不好13例,检测满意度为71.1%。实验组检测满意度高于对照组,差异具有统计学意义(χ~2=9.6800, P=0.0018<0.05)。实验组敏感性为95.7%(22/23),对照组敏感性为74.1%(20/27),实验组敏感性高于对照组,差异具有统计学意义(χ~2=4.3028, P<0.05)。实验组特异性为100.0%(22/22),对照组特异性为66.7%(12/18),实验组特异性高于对照组,差异具有统计学意义(χ~2=8.6275, P<0.05)。结论在血液检验的过程中,血液病毒核酸筛查技术具有较高的敏感性与特异性,属于新型的血液病毒测定技术,可以更好的保障血液安全。

核酸检测在血液传染病筛查的应用价值

目的探讨核酸检测在血液传染病筛查[乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)]的应用价值。方法选取2018-2019年在该院住院因手术或输血需要检测乙肝五项和抗HCV、HIV抗原抗体的500例患者血清标本。化学发光法检测乙肝五项、抗HCV、HIV抗原抗体,提取核酸定性检测HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA。比较两种方法的检测结果,不一致的标本检测病毒载量确认最终结果。结果检测出11例HBV化学发光与核酸定性结果不一致标本,未检出HCV和HIV化学发光与核酸定性结果不一致标本。2例HBsAg阳性HBV DNA定性阴性检测标本检测载量均小于20 IU/mL。9例HBsAg阴性HBV DNA定性阳性样品中2例未检测到HBV DNA载量,6例标本检测到HBV DNA载量小于20 IU/mL,1例标本HBV DNA载量为23.6 IU/mL。结论HBV、HCV、HIV病原体核酸检测有利于检测出窗口期和免疫状态异常的感染者。

HBV核酸血筛试剂国家参考品的研制

目的研制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸血筛试剂国家参考品。方法将从上海、甘肃、河南、湖南、湖北等地域的血液中心、浆站、生物制品公司等收集到的多份人HBV抗体阳性或HBV感染者血浆样品,经HBV DNA病毒检测,筛选出阴性及阳性参考品候选品;将HBV DNA国家标准品用人阴性血浆稀释至10^(3)IU/mL,作为最低检出量(limit of detection,LOD)候选品。将HBV核酸血筛国家阴性及阳性参考品候选品、LOD参考品待标品分发至8家企业实验室,分别进行HBVHCVHIV核酸血筛联检测定。对整套国家参考品进行均匀性和稳定性考察。结果共筛选出8份HBV病毒载量为0的阴性样品,作为阴性参考品;9份HBV DNA病毒载量为10^(3)~10^(4)IU/mL的阳性样品,作为阳性参考品;1份LOD参考品,经WHO HBV DNA标准品标定,病毒含量为1.0×10^(3)IU/mL。整套国家参考品稳定性好,均匀性检查符合规定。结论制备了HBV核酸血筛试剂国家参考品,为我国HBV核酸血筛试剂的质量控制和标准化提供了依据。

罗氏核酸检测系统性能验证

目的:验证全自动核酸血液筛查系统Cobas-s 201对HBV DNA/HCV RNA/HIV RNA的实时检测满足预期使用要求,符合《血站实验室质量管理规范》、《血站技术操作规程》(2015版)等相关标准的要求。方法:对Cobas-s 201检测HBV DNA/HCV RNA/HIV RNA的分析灵敏度、重复性、抗交叉污染、抗干扰、样本稳定性性能进行验证,并与厂商声明和相关的质量标准进行比较。结果:分析灵敏度、重复性、抗交叉污染、抗干扰、样本稳定性性能验证满足要求,与乌鲁木齐市血液中心比对数据结果符合。结论:Cobas-s 201核酸检测系统满足血站对核酸检测的相关要求。