大鼠血清淀粉样物质P(SAP)基因的克隆及重组腺病毒制备

目的:制备能够表达大鼠血清淀粉样物质P(Serum amyloid P component,SAP)的重组腺病毒。方法:采用RT-PCR扩增的方法获取大鼠SAP,并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒pAdTrace-TO4中,进一步采用同源重组的方法将该质粒和腺病毒骨架质粒Adeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,然后用脂质体介导的方法导入包装细胞HEK293中,产生表达目的基因的重组腺病毒,扩增病毒后用倍比稀释法测定其滴度。结果:通过PCR技术从重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒中扩增出700bp左右插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致。扩增后的重组腺病毒滴度为2.8×108pfu/ml。结论:成功构建了携带SAP基因的重组腺病毒载体Adeasy-1-SAP,为探讨SAP对肺纤维化的作用及其机制打下基础。

胰岛淀粉样多肽和P物质在不同发育阶段家兔直肠的表达及分布特点

目的观察不同发育阶段家兔直肠内胰岛淀粉样多肽(islet amyloid polypeptide,IAPP)、P物质(substance P,SP)的表达及分布特点。方法收集生后5、15、25、35、60 d及90 d家兔各10只。取直肠组织入Bouin液固定,梯度酒精脱水,常规石蜡包埋,制成连续切片。用免疫组织化学SABC法和图像分析法对IAPP、SP免疫反应阳性细胞的定位和表达进行观察。结果生后5 d家兔直肠内可见少量散在分布IAPP阳性细胞,多位于上皮;35 d IAPP阳性细胞的数量呈明显上升趋势,至60 d达到最多(P<0.05),90 d时减少(P<0.05),主要分布于固有层。图像分析测得IAPP阳性细胞的平均灰度值随家兔的生长发育逐渐降低,60 d达最低(P<0.05)。SP阳性细胞于生后15 d始出现,35 d后细胞数量明显增多(P<0.05),60 d达最高(P<0.05)。其平均灰度值也于35 d开始下降(P<0.05),于60 d达最低水平(P<0.05)。结论 IAPP、SP在直肠的表达随家兔的生长发育而逐渐变化,推测两者参与调节生后发育期间家兔直肠消化功能的成熟过程。

广西巴马小型猪血清淀粉样P物质基因真核载体构建及细胞转染

血清淀粉样P物质(Serum Amyloid Pcomponent,SAP)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用。以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出相应cDNA片段,连接到克隆载体pMD18-T上进行检测,测序结果为675 bp,与GenBank所提供相关序列同源性为100%,并成功构建pEGFP-N1-SAP重组真核表达载体,利用脂质体(Lipofectamine 2000)介导法将重组质粒导入到NIH-3T3细胞中培养,经转染24 h后,置于倒置荧光显微镜下观察,发现含有重组质粒的NIH-3T3细胞中表达出绿色荧光,为进一步研究SAP基因的功能特点及在试验动物相关疾病模型的应用提供条件。

血清淀粉样P物质在EV71感染小鼠肺和脑表达及其意义初探

目的探讨2周龄BALB/c小鼠在EV71感染后,不同分期肺和脑组织中血清淀粉样P物质(SAP)表达水平。方法 2周龄BALB/c小鼠按笼号分组,实验组35只,对照组29只。实验组予1×10~7TCID50·m L^(-1)的EV71病毒液0.1 mL腹腔注射,对照组腹腔注射等容量PBS液。观察小鼠的活动状态、皮疹、反应性、毛色、肢体活动及瘫痪情况等,依据实验组感染症状分为5期:精神反应期(建模后第2天)、部分瘫痪期(第3天)、全身瘫痪期(第3天)、死亡(第3~4天)和恢复期(第10天仍存活)。分别于5个分期称重实验组和对照组小鼠后处死,采集肺和脑组织以ELISA法测定SAP水平,分析不同分期SAP水平变化趋势。结果 1实验组建模后第2天均出现精神萎靡、活动减少,第3天部分小鼠出现肢体运动不协调、部分肢体瘫痪,甚至全身瘫痪至死亡,提示EV71感染小鼠模型建立成功。2建模后实验组精神反应期和对照组的体重差值差异无统计学意义,在部分瘫痪期、全身瘫痪期、死亡期和恢复期,两组体重差值的差异均有统计学意义。3实验组肺和脑组织中SAP水平在5个分期表达量均与对照组差异有统计学意义(P<0.05),实验组脑组织SAP水平是对照组的2~9倍,肺组织SAP水平是对照组的1.5~8倍。实验组部分瘫痪期、全身瘫痪期和死亡期脑组织SAP水平均显著高于精神反应期(P<0.05),肺组织SAP水平与精神反应期差异无统计学意义;脑和肺组织恢复期SAP水平均较精神反应期显著下降,但高于对照组水平。结论 SAP在EV71感染后小鼠的脑和肺组织中高表达,可能作为EV71感染后病情严重程度及预后判断的指标。

孕妇血清淀粉样P物质作为神经管缺陷产前标志物的研究

目的验证血清淀粉样P物质(SAP)在正常孕妇和有神经管缺陷患儿的孕妇血清中的表达情况,探讨其作为神经管缺陷产前诊断标志物的可能。方法于清晨空腹抽取病例组(12例胎儿患神经管缺陷的孕妇)和对照组(12例胎儿正常的孕妇)外周静脉血5 mL后静置离心,抽取上层血清,用Western blotting方法检测SAP表达水平,并计算受试者操作特征(ROC)曲线,评估SAP诊断神经管缺陷的价值。结果在妊娠12~19周、21~28周时,病例组孕妇血清中SAP表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线下面积(AUC)=0.770 8(95%CI:0.573 9~0.967 8,P<0.05)。当敏感度为83.33%时,其特异度为66.67%。结论胎儿神经管缺陷的孕妇血清中SAP表达显著降低,提示SAP有作为神经管缺陷的产前诊断标志物的潜在可能。

血清淀粉样P物质对细胞炎症反应以及氧化应激的影响及机制

目的观察不同浓度的血清淀粉样P物质(SAP)对炎症免疫及氧化应激的影响,并探讨其可能的机制。方法将RAW264.7细胞分成对照组、SAP(1.25 mg/L、2.5 mg/L、5 mg/L)组,不同浓度刺激24 h后,流式细胞术测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、Fcγ受体表达量,RT-PCR或ELISA检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)及ICAM-1的表达。Western blot检测炎症相关脾酪氨酸蛋白激酶(Syk)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p ERK1/2)的表达。结果 SAP与RAW264.7细胞共同孵育24 h后,SAP作用无论在基因表达水平还是在蛋白表达水平,均可促进炎症因子IL-1β、TNF-α、ICAM-1和活性氮NO的分泌(P<0.05),且随浓度的增加而增加;机制研究发现SAP对细胞Fcγ受体、p ERK1/2的表达无明显影响,但SAP可剂量依赖增加Fcγ受体下游通路蛋白Syk的表达量(P<0.001)。结论 SAP与Fcγ受体结合后,可增加Syk的表达,增加炎症免疫和氧化应激反应。

血清淀粉样蛋白酶P(SAP)在3种常见结缔组织病患者中的表达及其意义

目的:研究血清淀粉样蛋白P(SAP)在3种常见结缔组织病患者血清中含量,探讨其在结缔组织病发生发展中的作用及意义。方法:用ELISA方法测定正常人、系统性红斑狼疮活动期和缓解期、类风湿关节炎活动期和缓解期、初治干燥综合征等风湿性疾病血清中血清淀粉样蛋白P(SAP)含量。统计各型患者血清中血清淀粉样蛋白P(SAP)的表达水平及其意义。结果:SAP在系统性红斑狼疮患者活动期血清中高表达,且其表达水平显著高于缓解期和正常人,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血清淀粉样蛋白P(SAP)在系统性红斑狼疮活动期高表达,可以作为系统性红斑狼疮患者活动期的诊断指标之一。

血清淀粉样P物质对泡沫细胞形成的影响

目的通过观察泡沫细胞形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的情况,探讨血清淀粉样P物质（SAP）对泡沫细胞发生发展的影响。方法利用THP-1细胞,通过佛波酯（PMA）处理48 h,诱导其分化成为巨噬细胞,再用氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）联合脂多糖（LPS）诱导其成为泡沫细胞作为对照组,实验组在上述过程中加入不同浓度SAP（10、20 mg/L）进行干预。采用油红O染色分析SAP对泡沫细胞形成的影响,观察脂质蓄积;同时利用Bodipy493/503染色,在荧光显微镜下观察泡沫细胞内脂滴形态及数量;提取上述泡沫细胞内的脂质,通过试剂盒定量测定细胞内甘油三酯（TG）和胆固醇酯（CE）含量;利用Western blot对脂滴表面相关的蛋白进行分析,如乙酰辅酶A羧化酶（ACC1）、脂肪分化相关蛋白（ADRP）、47 k Da的尾连蛋白（TIP47）、组蛋白去甲基化酶（JMJD3）、脂肪酸合成酶（FAS）的表达水平。结果油红O染色和Bodipy493/503染色显示,实验组细胞内的脂滴大小更大、数量更多,且20 mg/L SAP干预组较10 mg/L SAP干预组趋势更明显;脂质定量检测结果显示,实验组TG、CE含量增高,20 mg/L SAP干预组较10 mg/L SAP干预组更高; Western blot结果显示,SAP能够增强ADRP、TIP47、JMJD3、FAS的表达水平,除了FAS在不同SAP浓度干预组表达水平一样外,其余均随着SAP浓度的增加表达水平也增强。结论 SAP能够促进泡沫细胞形成,增强脂质蓄积; SAP能够增强相关脂蛋白的表达水平。

SAP基因注射干预小鼠SLE样综合征的发生

目的 :研究SAP基因注射对SLE发病的干预作用 ,并进一步探讨SAP发挥作用的可能机制。方法 :通过RT PCR方法克隆SAP基因 ,构建其真核表达质粒pcDNA3 SAP ,观察SAP基因注射对活化淋巴细胞免疫诱导小鼠产生的SLE样综合征的干预作用 ,以ELISA方法检测抗dsDNA抗体的产生情况 ,以免疫荧光法检测肾脏免疫复合物沉积 ;通过巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响 ;用增殖实验检测巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后对预致敏淋巴细胞活化的影响。结果 :SAP基因注射可有效干预小鼠SLE样综合征的发生 ,SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可明显促进巨噬细胞对DNA的吞噬 ,并且巨噬细胞吞噬SAP结合的DNA后不引起预致敏淋巴细胞的增殖。结论

血浆淀粉样蛋白P成分的研究进展

血浆淀粉样蛋白P成分（SAP）属于五聚体血浆蛋白家族，具有装配成五聚体和依赖于钙离子结合配体的能力。SAP最早是在1965年从人的各种淀粉样变性病淀粉状沉淀物中被发现的。当时，人们只是简单地把它化分为糖蛋白类，并认为和正常血液循环中的糖蛋白类是一样。因此，称为血浆淀粉样蛋白P成分。后来，发现SAP在钙离子存在的情况下总是与补体C1的亚成分有稳定密切的联系。

ApoE^(-/-);SAP-Tg小鼠模型的构建

目的为研究SAP蛋白在动脉粥样硬化中的作用及机制,拟构建ApoE-/-;SAP-Tg小鼠模型。方法分别选取6~8周龄的雄性ApoE-/-小鼠与血清淀粉样蛋白P转基因(SAP-Tg)6周龄的雌性小鼠杂交,得到的杂交后代以剪尾方式提取基因组DNA,用PCR法检测小鼠的基因型。结果雄性ApoE-/-小鼠与雌性SAP-Tg小鼠杂交得F1代后自交,在F2代获得ApoE-/-;SAP-Tg基因型小鼠,模型构建成功。结论将ApoE-/-小鼠与SAP-Tg小鼠杂交2代后成功建立了ApoE-/-;SAP-Tg小鼠模型,并可通过筛选出的F2代ApoE-/-小鼠和ApoE-/-;SAP-Tg小鼠交配进行繁育筛选工作。

主动脉夹层患者主动脉壁中血清淀粉样P物质的表达变化及其潜在临床意义

目的探讨血清淀粉样P物质(SAP)在主动脉夹层患者主动脉壁组织中的表达变化及其潜在的临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科明确诊断为Stanford A型主动脉夹层(TAAD)患者主动脉壁标本60例(夹层组),以及心脏移植供体的主动脉壁标本30例(对照组)。用苏木素-伊红(HE)染色和弹性纤维(EVG)染色的方法分析两组主动脉壁组织结构的差异。进一步通过蛋白质免疫印迹(WB),免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC)检测SAP在主动脉壁组织中的表达水平及亚细胞定位。结果HE和EVG染色结果显示,与对照组相比,夹层组主动脉平滑肌细胞排列紊乱、弹性纤维断裂且减少。蛋白质免疫印迹、免疫荧光及免疫组化实验显示,与对照组对比,SAP蛋白表达水平在夹层组主动脉壁组织中显著降低(P<0.05),且免疫荧光染色显示SAP蛋白主要定位于细胞质和细胞外基质中。结论与对照组相比,主动脉夹层患者的主动脉壁组织中SAP蛋白水平降低,提示SAP蛋白可能与主动脉夹层的发生发展相关。

孕妇胎儿神经管缺陷易感性与MTHFR基因C667T位点突变、TYMS基因rs3819102位点突变及血清SAP水平的关系

目的研究孕妇胎儿神经管缺陷易感性与5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C667T位点突变、胸苷酸合成酶(TYMS)基因rs3819102位点突变及血清淀粉样P物质(SAP)水平的关系。方法前瞻性选择2017年12月至2019年12月在四川省雅安市人民医院产检的159例胎儿神经管缺陷的孕妇为观察组,159例胎儿健康的孕妇为对照组,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测并比较两组血清SAP水平,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)法对MTHFR基因C667T位点、TYMS基因rs3819102位点多态性进行检测分析,比较两组各位点的基因型和等位基因分布频率,采用Spearman相关性分析MTHFR基因C667T位点突变、TYMS基因rs3819102位点突变及血清SAP水平与孕妇胎儿神经管缺陷的相关性,采用Logistic回归分析孕妇胎儿神经管缺陷的危险因素。结果观察组血清SAP水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组MTHFR基因C667T位点的CC、CT、TT基因型频率及T、C等位基因频率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组TYMS基因rs3819102位点的AA、GG、AG基因型频率及A、G等位基因频率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);血清SAP水平与孕妇胎儿神经管缺陷呈负相关关系(r=-0.647,P<0.05);MTHFR基因C667T位点TT基因型频率及T等位基因频率与孕妇胎儿神经管缺陷呈正相关关系(r=0.205,P<0.05);TYMS基因rs3819102位点的GG基因型频率及G等位基因频率与孕妇胎儿神经管缺陷呈正相关关系(r=0.204,P<0.05);血清SAP低水平、MTHFR基因C667T位点T等位基因突变、TYMS基因rs3819102位点G等位基因突变是孕妇胎儿神经管缺陷的危险因素。结论血清SAP低水平、MTHFR基因C667T位点T等位基因突变、TYMS基因rs3819102位点G等位基因突变可能增加孕妇胎儿神经管缺陷易感性。

SAP水平对脑白质高信号患者认知功能的影响

目的探讨血清淀粉样P物质(SAP)水平对脑白质高信号(WMH)患者认知功能的影响。方法根据纳入及排除标准,通过CT或磁共振成像诊断为脑白质变性的患者297例为观察组。同时设立健康人群做对照组60例。通过Fazekas评分将脑白质变性患者分为轻度(0~2分)、中度(3~4分)及重度(5~6分),再比较三组间同型半胱氨酸(Hcy)、SAP水平、基质金属蛋白酶(MMP)-9、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)等水平。再根据脑白质变性评分将血清SAP分为轻度(50~70μg/ml,59例)、中度(70~90μg/ml,163例)及重度(90~110μg/ml,75例),将三组间利用蒙特利尔评估量表(MoCA)评估认知功能,词语流畅性测验(VFT)评价患者语言流畅度,画钟测验(CDT)、P300及MMSE检测患者认知功能障碍,日常生活活动能力(ADL)测试评价患者ADL。结果与对照组比较,观察组血清SAP水平明显升高(P<0.001);根据Fazekas评分,随着脑白质变性严重程度的增加,SAP、Hcy、hs-CRP及MMP-9水平逐级增高,其中SAP中度组较轻度组更高(t=16.235,P<0.001),重度组比中度组更高(t=17.301,P<0.001);Hcy中度组较轻度组更高(t=7.351,P<0.001),重度组比中度组更高(t=8.296,P<0.001);MMP-9中度组较轻度组更高(t=22.375,P<0.001),重度组比中度组更高(t=27.569,P<0.001)。根据MoCA评估认知功能及VFT、CDT、P300、MMSE评分也随着SAP水平的增加而减少,组间差异具有统计学意义(P<0.001);ADL评分也随SAP水平的增加而减少,但SAP中度与轻度组间差异无统计学意义(t=14.241,P=0.493),重度与轻度差异有统计学意义(t=17.336,P<0.001)。结论SAP水平与脑白质变性程度存在一定关系,随着脑白质变性严重程度的增加血清SAP水平也增加;关于患者认知功能评分,随着SAP水平的增加,认知功能随之下降。

还脑益聪方对老龄大鼠学习记忆及脑组织β类淀粉样蛋白和P物质水平的影响

目的:观察还脑益聪方对老龄大鼠学习记忆功能及脑组织β类淀粉样蛋白(β-AP)和P物质(S.P)水平的影响。方法:以Morris水迷宫试验检测老龄大鼠的空间学习记忆能力,将学习记忆减退的40只大鼠用随机表分成4组,每组10只。即模型(记忆减退老龄大鼠)对照组、还脑益聪方大剂量(13.68 g生药/kg)组、小剂量(6.84 g生药/kg)组和阳性药物对照组(盐酸多奈哌齐片,0.45 mg/kg)组,另取学习记忆能力正常老龄大鼠10只为正常对照组,给与等量水,其余灌胃给药8周。观察测定老龄大鼠的空间学习记忆能力和脑组织匀浆测定β-AP和P物质含量,并检测大鼠血清超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,以HE染色观察大鼠脑组织形态学的病理变化。结果:模型组老龄大鼠在水迷宫中的游泳时间、路径长度明显延长。给药8周后,还脑益聪方大、小剂量组大鼠游泳持续时间、路径长度较模型组显著缩短,寻找平台的方式有所改进。和正常老龄大鼠组比较,模型组大鼠MDA含量显著升高,SOD活力显著降低。与模型组比较,给药组大鼠脑组织的β-AP含量下降和P物质水平增加,血清SOD水平显著升高(P<0.01),脑组织形态结构得到改善。结论:还脑益聪方可降低β-AP在老龄大鼠脑组织的沉积,保护脑组织海马形态的完整性,从而改善老龄大鼠空间学习记忆能力。

维持性血液透析患者超滤量对尿量的影响

临床上已有很多证据证明开始血液透析后尿量对患者的重要性，它不仅在一定程度上能有效清除尿毒症的毒素，而且对水盐代谢、高血压、调节钙磷代谢、清除B2-微球蛋白，避免淀粉样物质沉积起重要作用[1]。由于致肾功能衰竭的原发病、肾性高血压、药物等因素的影响，导致透析患者的残余肾功能仍以一定的速率进行性丧失[2]。

广西巴马小型猪SAP真核表达载体的构建及胚胎水平表达

本研究的目的是构建广西巴马小型猪SAP真核表达载体并在胚胎水平对其进行验证。利用RT-PCR技术扩增并克隆SAP基因,再用T4连接酶将其连入P-Dsred-N1载体,构建P-Dsred-N1-SAP载体,并通过胞质注射生产转SAP的猪胚胎。结果表明,本研究成功构建了P-Dsred-N1-SAP重组载体,经胞质注射后在胚胎发育早期和囊胚期均有红色荧光表达。本研究为下一步研究SAP基因的功能和生产转SAP基因猪奠定基础。

猪SAP基因对PK15细胞凋亡的影响

为了研究不同浓度的血清淀粉样P物质(serum amyloid P component,SAP)对猪PK15细胞凋亡的影响,试验采用不同浓度的pEGFP-N1-SAP转染细胞及RT-PCR检测的方法,观察细胞形态、数量的变化,研究细胞中SAP基因的表达情况。结果表明:SAP基因能够在PK15细胞中表达,转染后的细胞变扁平,随着pEGFP-N1-SAP浓度的增加,细胞凋亡数目增加,细胞总DNA降解越多,说明SAP能够促进猪PK15细胞的凋亡。