(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究

目的探讨(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原(procalcitonin,PCT)、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究。方法回顾性选取我院2020年1月—2022年6月住院的120例艾滋病患者为研究对象。依据实验室结果,将其分为马尔尼菲篮状菌感染确诊组(血或组织液培育养出马尔尼菲篮状菌),简称A组(62例),及马尔尼菲篮状菌感染临床诊断组[根据临床症状、体征、血常规及(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞多指标诊断],简称B组(58例)。检测患者(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞的表达水平,采用受试者工作特征(receiver-operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)评估上述指标联合检测对艾滋病患者感染马尔尼菲篮状菌的诊断效能。结果A组的(1-3)-β-D葡聚糖和PCT水平均高于B组,CD4^(+)T淋巴细胞个数低于B组(P<0.05);(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC为0.933,(1-3)-β-D葡聚糖单独检测的AUC是0.812,PCT单独检测的AUC为0.883,CD4^(+)T淋巴细胞单独检测的AUC是0.810,(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC皆优于三项单独检测,表明(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的诊断价值皆优于单一指标诊断,且联合检测的特异度、约登指数分别为92.43%和0.580,均高于三项单独检测。结论(1-3)-β-D葡聚糖联合PCT和CD4^(+)T淋巴细胞多指标对艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常高的临床诊断价值,能够帮助医生分析出高危风险患者,及时制定治疗方案,同时也承担预后效果的判断依据,对治疗艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常重要的研究价值。

β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配物的润肠通便功能

为探讨β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配对便秘小鼠通便作用的影响,将小鼠随机分为5组:阴性对照组、模型组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与副干酪乳酸杆菌质量比1∶1组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与鼠李糖乳杆菌质量比1∶1组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与乳双歧杆菌质量比1∶1组。除对照组外,其余组别均采用盐酸洛哌丁胺建立小鼠便秘模型。观察各组小鼠首粒黑便排出时间、6 h黑便粒数、粪便质量、粪便含水量及小肠墨汁推进率。结果表明:与模型组相比,3组处理组均能显著缩短便秘小鼠的首粒黑便排出时间,显著增加粪便质量、粪便粒数、墨汁推进率及粪便含水量。其中β-1,3/α-1,3-葡聚糖与副干酪乳杆菌1∶1组改善便秘效果优于β-1,3/α-1,3-葡聚糖与鼠李糖乳杆菌、乳双歧杆菌质量1∶1组。研究表明,β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配能有效促进便秘小鼠肠道蠕动,促进排便,具有润肠通便作用。

β-1,3-葡聚糖内切酶合成、制备及应用研究进展

β-1,3-葡聚糖内切酶是一类广泛存在于细菌、真菌和某些植物中,并能够水解β-葡聚糖产生不同分子量葡聚糖的酶。低分子量葡聚糖具有抗菌、抗氧化、免疫调节和抗肿瘤的生理活性,已在医药、食品、化工等多个领域显现良好的应用前景。目前生产低分子量葡聚糖的方法主要包括物理、化学和酶降解法。相较于物理和化学降解法,酶降解法具有催化效率高、反应条件温和、收率高及对环境友好等特点,但现阶段已开发的β-1, 3-葡聚糖内切酶的酶活性和稳定性仍无法满足工业化生产的需求。因此,开发适用于工业化生产的β-1,3-葡聚糖内切酶,已成为跨越通过降解高分子量葡聚糖制备低分子量葡聚糖技术壁垒的关键。本文系统介绍了β-1,3-葡聚糖内切酶的合成调节、特点、用于低分子量葡聚糖的制备以及工艺的优化等方面的研究进展,为促进β-1,3-葡聚糖内切酶的研究和工业化应用提供参考。

血清(1-3)-β-D葡聚糖检测在深部真菌感染诊断中的临床价值

目的探讨血清(1-3)-β-D葡聚糖(BG)检测(G试验)在深部真菌感染早期诊断中的临床应用与价值。方法选取2015年10月至2016年4月重庆市急救医疗中心132例疑似深部真菌感染患者作为研究对象,将38例确诊患者和拟诊患者视为阳性组,其余94例视为阴性组,采用金山川MB-80微生物快速动态检测系统测定血清BG水平,并与患者体液真菌培养结果进行比较分析。结果阳性组、阴性组血清BG水平分别为(150.8±133.2)、(25.7±20.1)pg/mL,差异有统计学意义(t=5.76,P<0.05)。G试验诊断深部真菌感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为78.9%、85.1%、68.1%、91.0%;真菌培养诊断深部真菌感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为57.9%、80.9%、52.3%、82.6%。结论血清BG检测方法快速、准确、简便,在深部真菌感染早期诊断及临床合理用药指导中具有临床应用价值。

血清(1,3)-β-D葡聚糖检测在新生儿真菌性败血症中的应用价值

目的探讨血清(1,3)-β-D葡聚糖检测在新生儿侵袭性真菌感染中应用价值。方法回顾性分析2015年1月至2017年12月本院新生儿病房住院治疗无菌体液真菌培养阳性的新产儿临床资料和实验室数据,共收集病例数30例为感染组;同时收集同期无感染患儿资料25例为对照组。比较血清(1,3)-β-D葡聚糖、WBC和PLT计数,血CRP和PCT水平的差异,通过制作ROC曲线评判各个指标单独或联合应用在新生儿侵袭性真菌感染诊断中的效能。结果感染组血清(1,3)-β-D葡聚糖、CRP水平显著高于对照组,PLT显著低于对照组;血清(1,3)-β-D葡聚糖ROC曲线下面积为0.79,在cut-off值为13.69 pg/ml时,诊断的敏感度和特异度分别为76.0%、71.4%;血清(1,3)-β-D葡聚糖联合CRP检测有最佳的诊断效能;感染组治疗后血清(1,3)-β-D葡聚糖较治疗前有显著下降。结论血清(1,3)-β-D葡聚糖在侵袭性真菌感染诊断和疗效判断中有较高的效能,联合CRP应用可以进一步提高诊断效能。

血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染辅助诊断的临床价值

目的:探讨血清(1-3)-β-D-葡聚糖(BDG)检测对深部真菌感染辅助诊断的价值。方法:对我院2014年336例疑似深部真菌感染病例分别进行血清BDG检测和真菌培养鉴定;对比分析血清BDG检测和真菌培养的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值。结果:BDG检测阳性171例,阳性率为50.89%(171/336);真菌培养阳性141例,阳性率为41.96%(141/336)。真菌培养阳性组血清BDG含量为(131.18±102.91)pg/m L,真菌培养阴性组血清BDG含量为(45.06±33.64)pg/m L,两组差异有统计学意义(t=9.57,P<0.01)。以真菌培养结果为标准,BDG检测的敏感性为54.61%(77/141),特异性51.79%(101/195);阳性预测值和阴性预测值分别为45.03%(77/171)和61.21%(101/165)。真菌培养显示白念珠菌仍然是临床深部真菌感染的主要病原菌。结论:BDG检测可实现疑似深部真菌感染的快速诊断,但对(1-3)-β-D-葡聚糖阳性结果需辅以真菌培养鉴定,两者联合使用具有较高的临床应用价值。

血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染患者的诊断价值

探讨血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染患者的诊断价值及临床意义,应用MB—80微生物动态快速检测系统,及GKT—5MSet动态真菌检测试剂盒定量检测血清中(1-3)-β-D-葡聚糖的含量,从而统计出待检标本深部真菌感染的阳性率。结果60例可疑深部真菌感染患者,经传统培养方法诊断28例阳性,32例阴性,阳性率为46.7%;经血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测33例阳性,12例为可疑感染,阳性率为55.0%,20例健康对照组均为阴性。说明血清(1-3)-β-D-葡聚糖检测较传统的真菌分离、培养与鉴定方法简便,快速,阳性率高,可用于深部真菌感染的早期诊断。

血液透析对血清(1→3)-β-D-葡聚糖浓度的影响

目的观察聚砜膜透析器透析对终末期肾脏病患者血清(1→3)-β-D-葡聚糖浓度的影响。方法选择维持性血液透析半年以上的终末期肾脏病患者58人,均采用聚砜膜透析器透析,分别在透析前以及透析结束后(临下机前5 min)抽外周静脉血,检测血清(1→3)-β-D-葡聚糖浓度,观察透析前后血清(1→3)-β-D-葡聚糖浓度的变化,并与健康对照组进行比较。结果患者透析前后血清(1→3)-β-D-葡聚糖浓度无明显变化,与健康对照组比较也无显著差异(P>0.05)。结论血液透析过程本身对血清(1→3)-β-D-葡聚糖浓度无影响,聚砜膜透析器透析不会导致血清(1→3)-β-D-葡聚糖检测的假阳性。

血清1,3-β-D葡聚糖在极低出生体质量儿真菌败血症中的临床分析

目的探讨血清1,3-β-D葡聚糖检测在极低出生体质量儿侵袭性真菌性败血症中的诊断和预后作用。方法选择2017年9月-2019年9月疑似侵袭性真菌败血症患儿共78例,分为治疗组(确诊侵袭性真菌败血症)和对照组(非侵袭性真菌败血症)。比较两组血清1,3-β-D葡聚糖、白细胞、血小板、超敏C反应蛋白(CRP)差异;同时比较治疗组在治疗后第7天、第14天与治疗前清血清1,3-β-D葡聚糖、白细胞、血小板、超敏C反应蛋白(CRP)的变化。结果治疗组血清1,3-β-D葡聚糖、超敏CRP水平显著高于对照组,血小板显著低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。治疗组血清1,3-β-D葡聚糖、超敏CRP在治疗后第7天和第14天较治疗前有明显降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。血小板在治疗后第7天与治疗前比仍继续下降,但治疗后第14天明显高于治疗前。白细胞在治疗组和对照组,治疗前后均无差别(P> 0.05)。结论血清1,3-β-D葡聚糖,结合血小板及超敏CRP的变化,为临床极低出生体质量儿侵袭性真菌感染的诊断及治疗提供重要的参考价值。

联合检测血清及肺泡灌洗液(1,3)-β-D-葡聚糖在诊断侵袭性肺真菌病中的应用研究

目的探讨联合检测血清及肺泡灌洗液(1,3)-β-D-葡聚糖在侵袭性肺真菌病中诊断价值。方法选取2020年1月~2020年9月诊治为侵袭性肺真菌病患者40例进行研究,按照《肺真菌病诊断和治疗专家共识》标准进行抗真菌治疗,治疗期间均取患者血液和支气管肺泡灌洗液进行(1,3)-β-D-葡聚糖检测、真菌培养和药敏检查,根据治疗效果将患者分为观察组(治疗有效患者,24例)和对照组(治疗无效患者,16例),比较两组患者治疗期间血清及肺泡灌洗液(1,3)-β-D-葡聚糖水平。结果观察组血清和肺泡灌洗液(1,3)-β-D-葡聚糖水平显著高于对照组(P<0.05)。观察组血清和肺泡灌洗液(1,3)-β-D-葡聚糖阳性率均高于对照组[54.17%vs.12.50%,66.67%vs.6.25%,P<0.05]。结论血清和肺泡灌洗液(1,3)-β-D-葡聚糖在侵袭性肺真菌患者中辅助诊断有较高临床价值,两者联合检测对提高诊断率有重要价值。

真菌荧光染色联合呼吸道标本培养与鉴定和血清1,3-β-D葡聚糖检测诊断侵袭性肺部真菌感染的应用价值

目的评估实验室常用三种真菌检测方法对侵袭性肺部真菌感染(IPFI)的诊断效能,为IPFI的诊疗提供依据。方法回顾性分析2020年1月至2020年12月昆明医科大学第一附属医院呼吸内科收治的具有高危IPFI因素的住院患者301例,其中临床出院诊断为侵袭性肺部真菌感染患者83例作为观察组,肺部细菌感染患者218例作为对照组,分别进行真菌荧光染色、血清1,3-β-D葡聚糖、呼吸道标本培养与鉴定联合检测,评估联合三种检测方法对IPFI的诊断效能。结果真菌荧光染色检测、血清1,3-β-D葡聚糖、呼吸道标本培养与鉴定检测对IPFI的检出率分别为36.9%(111/301)、9.6%(29/301)、18.6%(56/301)。在观察组中三种方法的阳性率分别为80.7%(67/83),15.7%(13/83),45.8%(38/83),高于对照组的20.1%(44/218),7.3%(16/218),8.3%(18/218),差异均有统计学意义(P<0.05)。真菌荧光染色检测灵敏度、特异度、曲线下面积(AUC)分别为80.7%、79.8%、0.803;血清1,3-β-D葡聚糖检测分别为15.7%、92.7%、0.542;呼吸道标本培养与鉴定检测分别为45.8%、91.7%、0.688;三项指标联合检测分别为86.7%、77.5%、0.855,优于任何一类单项检测效能。结论真菌荧光染色法在IPFI检测中更具优势,是一种快速可靠,敏感性高的IPFI的诊断方法;但三项指标联合检测对诊断IPFI的应用价值更显著,可以提高诊断效率。

深部真菌感染患者血浆1-3-β-D葡聚糖检测的临床意义

目的探讨深部真菌感染患者血浆1-3-β-D葡聚糖检测的临床意义。方法 应用ME-80微生物动态快速 检测系统,及GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆中1-3-β-D葡聚糖的含量。结果正常对照组血浆 1-3-β-D葡聚糖含量为(2.83士2.57)μg／L;深部真菌感染组为(54.06士36.13)μg／L,经t检验分析,对照组与深部 真菌感染组1-3-β-D葡聚糖平均值差异非常显著(t=7.741,P<0.001)。结论 血浆葡聚糖检测可在拟诊早期为 临床医生提供机体是否感染真菌的可靠信息,是一种实用的真菌感染早期诊断方法。

啤酒酵母中(1→3)-β-D-葡聚糖的提取及其机理研究

分别采用酸法、酸碱法来提取啤酒酵母中的(1→3) β D 葡聚糖,然后对其产品进行多糖成分和紫外光谱分析。结果发现,在用c(CH3COOH)=0 5mol/L的水溶液提取啤酒酵母中的(1→3) β D 葡聚糖时,其产品中除含有葡聚糖外,还含有一定量的甘露聚糖和蛋白质这两种成分。但先用c(NaOH)=1 0mol/L的水溶液提取,再用w(CH3COOH)=4%的醋酸溶液处理时,产品为高纯度的(1→3) β D 葡聚糖。此结论由傅立叶红外光谱和核磁共振碳谱得到进一步的证实。接着从其水解机理上阐述了产生上述两种不同结果的原因,从而说明了酸碱法是从啤酒酵母中提取(1→3) β D 葡聚糖的理想途径。

国产血浆(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂对侵袭性真菌病诊断价值评估

目的观察国产血浆(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂对侵袭性真菌病(IFD)的诊断效果。方法筛选2009年4月—2011年6月上海交通大学医学院附属新华医院疑似IFD病例,根据欧洲癌症研究和治疗组织/真菌病研究组(EORTC/MSG)的IFD诊断标准定义,甄选出57例确诊IFD和6例拟诊IFD的真阳性病例为IFD组,100例非IFD真阴性病例为对照组,应用国产血浆(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂定量检测血浆中(1-3)-β-D葡聚糖的质量浓度,并进行组间比较。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析利用血浆(1-3)-β-D葡聚糖水平诊断IFD的最佳临界值。结果两组的血浆(1-3)-β-D葡聚糖水平皆为非正态分布,峰度系数>0、偏度系数>0,呈正偏态分布。对照组和IFD组血浆(1-3)-β-D葡聚糖质量浓度分别为(33.62±5.0)pg/mL和(373.82±125.5)pg/mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示:血浆(1-3)-β-D葡聚糖用于诊断IFD的最佳临界值为20.85,曲线下面积最大为0.857(P<0.05),95%CI 0.792～0.923,灵敏度和特异度分别为77.8%和86.0%。结论国产血浆(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂对于IFD具有诊断应用价值。

血浆(1-3)-β-D葡聚糖对侵袭性真菌感染诊断的临床意义

目的探讨血浆(1-3)-β-D葡聚糖检测(G试验)对侵袭性真菌感染(IFI)诊断的临床价值,为临床深部真菌感染的早期诊断提供可靠依据。方法对2011年9月至2014年12月四川省成都市第三人民医院2 133例疑似IFI住院患者使用MB-80微生物快速动态检测系统进行G试验检测;同时留取下呼吸道分泌物及各种体液标本进行真菌培养,以患者临床诊断、影像学表现、使用抗真菌药物及相应临床症状转归情况作为IFI诊断标准,比较两种方法的敏感度及特异度。结果 2 133例患者中经临床诊断为IFI 745例,非感染1 388例;G试验诊断IFI468例,非感染1 665例,该方法的敏感度为59.3%,特异度为98.1%,阳性预测值(PPV)为94.4%和阴性预测值(NPV)为81.8%;真菌培养诊断IFI 440例,非感染1 693例,该方法的敏感度为45.9%,特异度为92.9%,PPV和NPV分别为77.3%和76.2%;G试验与真菌培养联合检测后敏感度提高为64.0%,特异度提高为99.2%,PPV和NPV分别为90.3%和83.3%。结论 G试验检测较传统的真菌分离培养与鉴定方法简便、快速、阳性率高,可在拟诊断早期为临床提供机体是否感染真菌的较可靠信息,是一种快速、实用的真菌感染早期诊断方法;传统的真菌培养方法虽敏感度低,但特异度高,并可确定感染菌种类,提供用药指导,建议临床在诊断深部真菌感染时,同时进行G试验及真菌镜检和培养等检查以提高IFI诊断的敏感度和特异度。

大鼠系统性毛孢子菌病模型3种体液标本(1,3)-β-D-葡聚糖检测

目的观察(1,3)-β-D-葡聚糖检测,在大鼠系统性毛孢子菌病模型不同体液标本中的意义。方法建立大鼠系统性毛孢子菌病模型,收集不同时间的支气管肺泡灌洗液、血浆和尿液标本,采用G试验测定(1,3)-β-D-葡聚糖,同时进行巢式PCR(nPCR)检测和真菌学培养。结果感染早期(10 d)血浆、支气管肺泡灌洗液、尿液标本G试验敏感性分别为80.00%、86.67%、6.67%,前两者与对照组比较差异有统计学意义;30只实验大鼠血浆标本G试验平均敏感性为76.76%,nPCR法为68.85%、血真菌培养为3.33%,G试验结果与血真菌培养相比差异有统计学意义(P<0.05);血浆(1,3)-β-D-葡聚糖浓度值(pg/ml)与感染的脏器数目呈正相关(┃r┃>0.7,P<0.05)。结论对血浆、支气管肺泡灌洗液等标本进行(1,3)-β-D-葡聚糖检测,有助于系统性毛孢子菌病的临床早期诊断、判断感染范围和疾病转归的评价。

(1-3)-β-D葡聚糖联合半乳甘露聚糖抗原检测在侵袭性真菌感染中的应用价值

目的探讨(1-3)-β-D葡聚糖(G试验)和半乳甘露聚糖抗原(GM试验)检测在侵袭性真菌感染(IFI)中的应用价值。方法收集该院住院高危IFI患者126例,分别检测患者血清(1-3)-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖水平,计算G试验、GM试验及联合检测的敏感度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、假阳性率、假阴性率。结果 G试验的敏感度(83.0%)高于GM试验(77.4%),而特异度(74.2%)低于GM试验(89.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测敏感度、特异度、PPV及NPV分别为92.5%、95.5%、92.1%、92.0%,其敏感度和特异度均高于G试验、GM试验单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 G试验和GM试验联合检测,能提高诊断准确性,更有效地用于侵袭性真菌感染的早期诊断。

支气管肺泡灌洗液(1-3)β-D-葡聚糖定量检测对侵袭性肺部真菌感染的诊断

目的评价支气管肺泡灌洗液(BALF)(1-3)β-D-葡聚糖定量检测(G试验)对侵袭性肺部真菌感染(IPFI)的诊断价值,探讨其最佳诊断阈值。方法将ICU内具有侵袭性肺部真菌感染(IPFI)高危因素的214例肺部感染患者纳入研究。所有患者在入住ICU当天行支气管肺泡灌洗术检查,留取BALF标本行真菌涂片染色、真菌培养及G试验检测,同时留取血液标本行血浆G试验、血液真菌培养;依据IPFI诊断标准及检查结果将IPFI诊断分为确诊、临床诊断、拟诊3个层次并进行针对性治疗;将确诊、临床诊断及治疗有效的拟诊认定为IPFI真阳性,将治疗无效的拟诊及不能诊断认定为IPFI真阴性,测算并比较血浆G试验、BALF普通病原学检查及BALF G试验对IPFI诊断准确性上的差异。结果共155例患者可至少拟诊为IPFI,结合治疗效果,共112例患者最终诊断为IPFI;与其他病原学检测方式相比,以>30 ng/L作为检验阈值水平的BALF G试验为最优微生物依据诊断方法,经比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BALF G试验可为临床医师提供IPFI的诊断依据,但检验阈值水平需进一步验证。

血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测对血液病患者侵袭性真菌感染的诊断价值

免疫功能低下患者的侵袭性真菌感染(IFI)具有病死率高,诊断困难等特点。针对真菌病原的血清学方法如(1,3)-β-D葡聚糖(BG)检测(G试验)、曲霉半乳甘露聚糖检测(GM试验)具有操作简单、快速、敏感性相对高等特点,可做为IFI诊断的辅助手段。较GM试验比,G试验可用于诊断除曲霉菌外更多的真菌感染。本研究旨在探讨G试验在血液病患者IFI早期诊断中的价值。血浆标本来源于2007年5月-2008年5月来自北京道培医院162例疑为IFI的血液病患者,其中化疗后患者85例,造血干细胞移植后患者77例。应用MB-80微生物动态快速检测系统定量检测患者血浆中BG的含量,将检测结果及临床特征进行回顾性分析。按照欧洲癌症研究治疗组织及真菌研究组(EORTC/MSG)诊断标准,所有病例中有确定诊断2例,临床诊断18例,拟诊75例,排除诊断67例。结果表明:以20ng/ml为诊断界值,G试验的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为75%、91%、72.4%和92.4%。在75例拟诊病例中,其中有51例G试验阳性,且对广谱抗生素无效而经过抗真菌治疗有效,经过临床回顾性分析符合IFI,表明G试验使IFI诊断率提高31.4%。结论:G试验是早期诊断血液病患者IFI的简单、快速的方法。

禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立

本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础。通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法,得到适合禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达的载体和分离目的蛋白的方法。结果表明,载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBacGP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中进行表达,其中:GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺(dodecyldimethylamine oxide,DDAO)从细胞膜上分离,HA-8×His-GFPTEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-dodecyl-β-maltoside, DDM)、十烷基-β-D-麦芽糖苷(n-decyl-β-maltoside, DM)或DDAO从细胞膜上分离,GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离。本研究首次成功地在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中表达了β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2,FgRHO蛋白可促进FgGLS2的稳定表达,并筛选到适合FgGLS2提取的去污剂DDAO。