深圳市嗜肺军团菌血清Ⅰ型菌株PFGE分型指纹图谱研究

目的研究深圳市公共场所中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LpⅠ)的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)技术对30株LpⅠ型军团菌进行电泳,并经Bionumer-ics软件进行聚类分析。结果30株菌可分为28种PFGE型。不同地区间分离出部分菌株,经PFGE分型,相似性系数为100%,表明深圳市公共场所中央空调冷却塔水间可能存在交叉污染;同一地区,菌株间相似性系数存在差异,没有优势菌株;同一采样地点,存在两种以上PFGE型别。结论深圳市公共场所冷却塔水中分离的LpⅠ型菌株基因呈多样性。

四川省嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)基因分型研究

目的为了解四川省嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)基因特征,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)和基因序列分型(SBT)两种方法对四川省1989—2016年分离到的42株嗜肺军团菌血清I型(LP1)进行基因分型研究。方法根据文献报道的军团菌8个VNTR位点和SBT 7个管家基因对42株嗜肺军团1型菌(LP1)分别进行PCR扩增。VNTR结果经毛细管电泳分析后,得到MLVA分型。SBT结果测序后上传至欧洲军团菌感染组(EWGLI)数据库得到ST分型。结果 42株嗜肺军团菌血清I型(LP1)分为8个MLVA型,优势型别为M08型(47.6%)和M07型(23.8%)。SBT分为12个ST型,其中有2个ST型(ST2359,ST2360)为首次发现。ST1(52.3%)、ST630(14.2%)为优势型别。12个ST型分为3个克隆群(Clonal Complex,CCs)和2个singleton。结论 MLVA方法和SBT方法均能用于LP1型分子流行病学监测及分子遗传学特征的研究。四川省LP1型具备较高的遗传多样性和地区特异性,有感染人的风险,应加强对公共卫生环境中军团菌的监测工作。

骨量减少人群血清Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列水平对FRAX~评估骨折风险的影响

目的评价低骨量人群不同水平血清Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(Beta C-terminal crosslinked telopeptides of typeⅠcollagen,β-CTx)下FRAX~系统对10年发生髋部骨折概率和主要部位骨质疏松性骨折风险的预测价值。方法收集2014年12月至2017年12月就诊的骨量减少的女性患者,根据β-CTx水平分为>472. 97 pg/m L组和<472. 97 pg/m L组,借助FRAX~评估系统,测算每例患者10年发生髋部骨折概率和主要部位骨质疏松性骨折的可能性,对比分析两组间的差异。结果β-CTx>472. 97 pg/m L组10年发生髋部骨折概率和主要部位骨质疏松性骨折概率分别为(5. 64±3. 18)%和(1. 79±1. 58)%,β-CTx<472. 97 pg/m L组分别为(4. 37±2. 94)%和(1. 21±1. 33)%,组间差异有统计学意义(t=2. 13,P <0. 05; t=2. 03,P <0. 05)。结论高β-CTx组患者未来10年骨折风险可能增大。

螺内酯对老年舒张性心力衰竭患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽水平的影响

目的观察老年舒张性心力衰竭患者使用螺内酯治疗前后血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PICP)水平的变化,探讨螺内酯减轻心肌纤维化、改善心脏舒张功能的可能机制。方法选择舒张性心力衰竭患者37例,随机分为常规治疗组及螺内酯(20 mg/d)治疗组,随访6个月,测定治疗前后血清PICP水平,并通过超声心动图观察治疗前后左心房、左心室大小、左心室壁厚度、左心室射血分数及舒张早期和晚期充盈速度(E、A)及其比值(E/A)。结果两组治疗后血清PICP水平与治疗前相比均明显下降(P<0.05),且螺内酯组低于常规治疗组(P<0.05)。两组治疗后E/A比值与治疗前相比均增高(P<0.05),且螺内酯组高于常规治疗组(P<0.05)。结论螺内酯通过降低Ⅰ型胶原的合成可能可以减轻心肌纤维化,改善心脏舒张功能。

老年消化性溃疡患者血清Ⅰ型胶原氨基端前肽、胃泌素水平及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨老年消化性溃疡患者血清Ⅰ型胶原氨基端前肽(PINP)、胃泌素水平及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法选取该院老年消化性溃疡患者89例作为研究组,同期选取健康体检者87例作为对照组,采用竞争放射免疫分析法测定血清胃泌素水平,采用双抗体酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清PINP水平。结果研究组血清PINP水平明显低于对照组,血清胃泌素水平明显高于对照组(P<0.05)。老年消化性溃疡患者Hp阳性率为73.03%(65/89),其中Hp阳性组血清PINP水平明显低于Hp阴性组,血清胃泌素水平明显高于Hp阴性组(P<0.05)。胃溃疡患者Hp根除率为81.25%,十二指肠溃疡患者Hp根除率为90.91%,比较无统计学差异(P>0.05),根除Hp治疗后,血清PINP水平明显高于根除Hp治疗前,胃泌素水平明显低于根除Hp治疗前(P<0.05)。经Pearson相关性分析显示,血清PINP与Hp感染呈负相关(r=-0.521,P<0.05),血清胃泌素水平与Hp感染呈正相关(r=0.613,P<0.05)。结论老年消化性溃疡患者血清PINP明显降低,胃泌素水平明显升高,其中合并Hp感染PINP水平降低幅度更明显,胃泌素水平升高幅度更明显,两者水平与Hp感染具有紧密的关系。

多聚酶链反应区分血清Ⅰ型MDV强弱毒株

选用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ＿１）基因组中位于１３２ｂｐ正向重复序列两侧的２段寡聚核苷酸为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对Ⅰ型ＭＤＶ强毒株（京－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５Ｃ株）的核酸进行基因扩增。结果显示：该弱毒株核酸基因中含６个或更多个拷贝数的１３２ｂｐ正向重复序列，而强毒株核酸基因中仅含２个，相同引物对Ⅱ型、Ⅲ型ＭＤＶ（ＳＢ－１株，Ｆｃ１２６株）和禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）核酸作ＰＣＲ扩增，未检出任何核酸片段。

废用性骨质疏松症模型大鼠血清Ⅰ型前胶原N端前肽分析研究

目的:对雄性SD大鼠右后肢体制动建立废用性骨质疏松症(disuse osteoporosis,DOP)模型,探讨血清Ⅰ型前胶原N端前肽(procollagenⅠtype N-terminal peptide,PINP)与DOP的关系。方法:选取3月龄健康雄性SD大鼠20只,随机分为对照组(n=5,不做特殊处理)和实验组(n=15,右后肢固定制动4周)。分别于建模前后测定SD大鼠血清PINP和建模后两侧股骨骨矿物质密度(bone mineral density,BMD)值。结果:实验组左侧、对照组双侧BMD值高于实验组右侧BMD,差异有统计学意义(P<0.05);实验组左侧BMD值与对照组双侧BMD比较,差异无统计学意义(P>0.05)。建模前,实验组与对照组血清PINP水平差异无统计学意义(P>0.05);实验组建模后血清PINP水平明显高于对照组建模后和实验组建模前,差异有统计学意义(P<0.05)。且实验组建模后血清PINP水平与BMD呈负相关(r=0.609,P<0.05)。结论:肢体制动促使血清PINP形成和骨量减少,形成DOP,提示DOP发病机制与血清PINP变化有一定的关系。

血清Ⅰ型胶原羧基末端肽、基质金属蛋白-2水平与冠状动脉病变的关系

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血清Ⅰ型胶原羧基末端肽(ICTP)、基质金属蛋白-2(MMP-2)的水平变化与冠状动脉粥样硬化病变的关系。方法根据2007年ACC/AHA及2006年欧洲心脏学会(ESC)诊断标准入选178例患者,冠心病(CHD)组136例,其中急性冠脉综合征(ACS)组88例,稳定型心绞痛(SAP)组48例,另选42例冠状动脉造影阴性患者作为对照组,比较不同冠状动脉病变支数、程度、类型的ICTP和MMP-2水平。结果 ACS组、SAP组ICTP、MMP-2水平较对照组升高,ACS组较SAP组升高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。单支、双支、三支病变组,轻度、中度、重度组,A型、B型、C型病变组与对照组ICTP浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。双支、三支病变组,中度、重度组,B型、C型病变组与对照组MMP-2浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05),单支,轻度,A型病变组与对照组MMP-2浓度比较,无统计学差异(P>0.05)。ICTP与MMP-2呈正相关。结论冠心病Ⅰ型胶原羧基末端肽、基质金属蛋白-2活性增高是严重冠状动脉病变的相关危险因素。

血清Ⅰ型胶原氨基端延长肽和β-Ⅰ型胶原羧基端肽与2型糖尿病合并骨质疏松性骨折相关性分析

目的分析血清Ⅰ型胶原氨基端延长肽(P1NP)和β-Ⅰ型胶原羧基端肽(β-CTX)与2型糖尿病(T2DM)合并骨质疏松性骨折相关性。方法选取2016年6月—2019年1月中国人民解放军空军军医大学第一附属医院的120例T2DM骨质疏松患者,分为T2DM骨质疏松伴骨折组(54例)与T2DM骨质疏松不伴骨折组(66例)。用化学发光法测定血浆P1NP、β-CTX,同时检测骨密度,空腹血糖(FBG)、体重指数(BMI)、糖化血红蛋白(GHb)、血清25羟维生素D[25(OH)D],采用Pearson积差相关系数r表示线性关系。结果T2DM骨质疏松性骨折组P1NP、β-CTX水平低于T2DM骨质疏松不伴骨折组(均P<0.05)。两组P1NP、β-CTX与年龄、FBG、GHb、骨密度、BMI、25(OH)D无明显相关性(P>0.05),两组P1NP与β-CTX之间呈正相关(r=0.744、0.495,均P<0.05)。结论P1NP、β-CTX水平可能与T2DM骨质疏松性骨折有关。

Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为储备禽腺病毒病疫情防控技术,应用DNAStar软件分析GenBank中Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)全基因序列,选取Hexon基因的保守区域设计合成1对PCR引物和1条TaqMan探针,建立FAdV-4FQ-PCR检测方法,得到相应的标准曲线,并应用该方法对临床病例和人工感染动物进行FAdV-4核酸检测。结果表明,建立的FAdV-4FQ-PCR方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性。

禽Ⅰ群腺病毒血清1型株灭活疫苗的研制

优化病毒的增殖条件,获得108.14 TCID50/mL,病毒粒子数为108.74 copies/mL的FAV-1抗原液,制备禽I群腺病毒血清1型(FAV-1)油乳剂灭活苗。比较甲醛及β-丙内酯的灭活效果,并进行疫苗成分最佳配比的优化,最后确认HLB 7.0,乳化剂含量10%,油水比为4∶1的比例稳定性最好、免疫效果最佳。疫苗免疫抗体水平的监测结果表明接种后第4周抗体水平达到最高峰,并在接种后第8周时仍具有较高抗体水平。攻毒试验结果显示,该疫苗对免疫组的保护率为100%,能完全抵抗病毒攻击。田间试验表明该疫苗达到预期免疫抗体水平,在接种后4个月保持高效价,到6个月时保持中等水平。本研究所研制疫苗免疫效果好,保存期长,安全性高。

血清1型Ⅰ群禽腺病毒Fiber-2蛋白的表达及其中和作用研究

为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫SPF鸡制备抗血清,通过鸡LMH细胞研究Fiber-2蛋白抗血清对FAdV-1感染的中和作用。结果显示,FAdV-1 Fiber-2基因扩增产物大小为1 233 bp,构建了pCold-FAdV-1-Fiber-2重组质粒,表达的FAdV-1 Fiber-2蛋白分子量大小为105 ku;FAdV-1 Fiber-2蛋白的抗血清孵育LMH细胞后,与阳性对照组相同第4天细胞出现病变,而阴性对照组细胞均无病变。结果表明,FAdV-1 Fiber-2蛋白抗血清在体外试验中不能中和本血清型病毒的感染,FAdV-1 Fiber-2蛋白作为亚单位疫苗的研究存在风险。

鸡Ⅰ群禽腺病毒血清4型油乳剂灭活疫苗的研制

为研制鸡Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)油乳剂灭活疫苗,试验采用鸡肝癌细胞(LMH)扩增FAdV-4,测定FAdV-4最佳灭活条件和疫苗最佳油水比,研制了FAdV-4油乳剂灭活苗。按《中华人民共和国兽药典》进行疫苗质量、安全性和临床效力检验。结果显示:LMH细胞接种FAdV-4 72h后其毒力最高,TCID50=10-7.78/0.1mL;终浓度0.15%的甲醛溶液37℃24h可灭活FAdV-4;油水比为2∶1的疫苗性状最稳定,质量和安全性检验均合格;疫苗最小免疫剂量为0.4 mL/只;抗体水平在免疫后第2周开始上升,第4周达到最高,而后缓慢下降。对疫苗免疫鸡14 d后注射0.2 mL FAdV-4病毒液(含10-5.78TCID50/0.1 mL),经14 d观察可见鸡全部存活,剖检后无病理变化且攻毒后第3、5、7、10、14天PCR检测均为阴性,临床保护率为100%。研究提示:LMH细胞可有效提高FAdV-4毒价,通过优化FAdV-4灭活条件和疫苗油水比,所研制的疫苗安全性高,保存期长,能有效预防FAdV-4感染,为鸡心包积液综合征防控提供参考。

缬沙坦对自发性高血压大鼠血清PⅠCP、PⅢNP和MMP-1的影响

目的探讨缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)、血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)和血清基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响及意义。方法16只12周龄雄性SHR随机分为2组,每组各8只,分别予以缬沙坦和生理盐水灌胃;同时选取8只同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为对照。给药8w后采用ELISA法测定血清PⅠCP、PⅢNP和MMP-1浓度。结果SHR对照组血清PⅠCP、PⅢNP浓度明显高于WKY组(P<0.01);而SHR治疗组血清PⅠCP、PⅢNP浓度明显低于SHR对照组(P<0.01);SHR治疗组血清PⅠCP、PⅢNP、MMP-1浓度与WKY组比较无显著性差异(P>0.05)。结论缬沙坦可调控血清PⅠCP、PⅢNP及MMP-1的含量,恢复细胞外基质合成和降解的动态平衡,抑制心肌细胞外基质的增生,防止心室重构的发生。

β-胶原降解产物,N-端骨钙素,总Ⅰ型胶原氨基端延长肽在肿瘤骨转移诊断中的应用

目的探讨血清N-端骨钙素(N-MID Osteocalcin)、总Ⅰ型胶原氨基端延长肽(TPINP)、骨吸收标志物β-Ⅰ型胶原羧基端肽(β-C-terminal telopeptide of type I collagen,β-CTx)在骨转移癌诊断中的临床价值。方法将87例肿瘤患者分为骨转移组48例和无骨转移组(对照组)39例,采用不同分类依据将骨转移组分为A.B.C三个亚组。定量测定N-MID.β-CTx和TPINP。结果 N-MID.β-CTx和TPINP在骨转移组中的浓度均高于对照组,TPINP和N-IMD在与骨转移程度呈正相关。各标志物之间均有相关性。结论检测血清N-MID.β-CTx和TPINP水平都能反映骨转移患者的病情,对于骨转移诊断及病情监测中有重要意义。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者血清前胶原肽与左心室质量指数的关系

目的观察阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者血清Ⅰ型前胶原肽(PⅠP)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)水平的改变,探讨其与OSAS患者左心室质量指数(LVMI)的相关性。方法收集新近诊断并符合入选标准的OSAS患者60例,根据呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻中度OSAS组(5≤AHI≤30次/h)及重度OSAS组(AHI>30次/h),门诊健康体检者20例作为正常对照组,分别测定血清PⅠP、PⅢP浓度,行心脏彩超检查并计算LVMI。结果重度OSAS组的LVMI、血清PⅠP和PⅢP浓度均高于正常对照组及轻中度OSAS组(P<0.05)。多元线性回归分析显示:AHI是OSAS患者LVMI的影响因素;而血清PⅠP和PⅢP浓度均与LVMI、AHI相关(P<0.05)。结论 OSAS可能是左心室肥厚的独立危险因素,OSAS患者血清PⅠP和PⅢP浓度与患者LVMI、AHI相关。

不同T分期肺癌患者血清Th1/Th2平衡及MMP-9、TIMP-1水平变化分析

目的分析不同T分期肺癌患者血清Ⅰ型T辅助细胞(Th1)/Ⅱ型T辅助细胞(Th2)平衡及基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)水平变化情况。方法选取本院2013年1月至2018年5月收治的肺癌患者中筛选符合纳入排除标准的200例设为研究对象,应用酶联免疫吸附法检测Th1细胞干扰素-γ(IFN-γ)、Th2细胞白细胞介素-4(IL-4)水平,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清MMP-9、TIMP-1水平,并计算Th1/Th2比值;比较不同T分期患者血清Th1/Th2、MMP-9、TIMP-1水平,Spearman相关性分析法分析肺癌T分期与血清Th1/Th2、MMP-9、TIMP-1的关系。结果肺癌患者血清IFN-γ、Th1/Th2随着T分期增加而下降;血清IL-4、MMP-9、TIMP-1水平随T分期上升而上升;且不同T分期及任意T分期两两比较,患者血清FN-γ、IL-4、Th1/Th2、MMP-9、TIMP-1差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析,Th1/Th2比值与肺癌T分期显著负相关(r=0.808,P<0.01),MMP-9、TIMP-1与肺癌T分期显著正相关(r=0.499、0.406,P<0.01)。结论血清Th1/Th2、MMP-9、TIMP-1与肺癌T分期密切相关,其或在肺癌患者肿瘤生长、扩散及浸润中发挥重要作用,值得临床重视。

血清CTX、PINP、COMP表达水平与冠心病发生发展及疾病严重程度的相关性

目的探究血清Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX)、Ⅰ型原胶原氨基末端前肽(PINP)、血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达水平与冠心病(CHD)发生发展及疾病严重程度的相关性。方法选取首次因胸痛、胸闷就诊的CHD患者为观察组,以同期100例健康人群为对照组,分析血清CTX、PINP、COMP表达水平,探讨Gensini与血清CTX、PINP、COMP表达水平的相关性。结果观察组血清CTX、PINP水平显著低于对照组,血清COMP显著高于对照组(P<0.05);观察组随着病情的严重程度升高,血清CTX、PINP水平显著降低,血清COMP水平显著升高(P<0.05);Gensini与血清CTX、PINP表达水平呈显著负相关,与COMP表达水平呈显著正相关(P<0.05)。结论血清CTX、PINP、COMP表达水平可作为临床判断CHD患者严重程度的重要指标。

抗PⅠNP单克隆抗体制备及应用

P1NP重组蛋白免疫小鼠后,采用半固体杂交瘤培养技术制备特异的PⅠNP单克隆抗体,获得22株能稳定分泌抗体的阳性单克隆细胞株.所制备的抗PⅠNP单克隆抗体,经抗体配对筛选出能用于双抗体夹心法检测的抗体对,经荧光快速检测方法验证,其检测PⅠNP的灵敏度为0.98 ng/mL,具有良好的重复性和准确性,可用于检测血清样本中的PⅠNP.