警犬狂犬病血清中和抗体调查

狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染引起的一种致死性人兽共患病,病死率几乎高达100%。目前,对狂犬病尚无有效的治疗方法,及时接种疫苗是预防狂犬病的最有效措施之一。全世界所有报告的动物狂犬病病例中约有95%是在犬,超过90%的人死亡归因于狂犬病犬,大规模疫苗接种是犬狂犬病防治的主要方法。犬的狂犬病免疫覆盖率低于70%是诱发人间狂犬病发生的主要原因,2017年全国共报告502例人狂犬病死亡病例,狂犬病疫情呈整体下降趋势。

呼吸道合胞病毒血清中和抗体检测方法的建立

目的 建立荧光检测法测定呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)血清中和抗体的检测方法,并对其进行验证和初步应用。方法 采用反向遗传学拯救的表达绿色荧光蛋白的重组呼吸道合胞病毒(recombinant RSV experssed the enhanced green fluorescent protein, RSV-EGFP)进行RSV重组腺病毒疫苗免疫后血清的检测。通过对RSV-EGFP在人喉癌上皮(human epithelioma-2,HEp-2)细胞上荧光的检测波长、检测时间、病毒的感染剂量和HEp-2的细胞密度进行优化,确定合适的条件后,再将RSV血清倍比系列稀释后与RSV-EGFP混合接种至HEp-2细胞培养,利用多功能酶标仪检测HEp-2细胞中表达的绿色荧光蛋白的荧光强度,从而计算其中和抗体滴度。同时,通过对RSV重组腺病毒载体疫苗免疫棉鼠血清的检测进一步评估中和抗体检测方法的精密度、重复性、准确度以及边缘孔效应。结果 结果显示,当检测的激发波长为479 nm,发射波长为517 nm,检测时间为病毒感染后48 h,最佳病毒感染剂量为3 000 pfu/孔,检测的最佳细胞密度为2.0×10~4个/孔时,相对荧光强度最高,且病毒数量与荧光强度之间呈现出较好的剂量-效应关系。采用该方法检测不同抗体滴度的血清样本,日内与日间精密度的CV均<15%;同一血清样本10次重复性检测结果最大值与最小值的比值均≤4,且RSD均<15%;用建立的方法实际测得的中和滴度结果与稀释后理论中和滴度(酶联免疫斑点法)的回收率均在80%~120%之间;在边缘孔与非边缘孔检测RSV血清中和抗体滴度结果一致性较好(P>0.05)。结论 建立的荧光检测法较酶联免疫斑点法操作简便、快捷,可被用来检测RSV血清中和抗体效价。

犬瘟热弱毒疫苗免疫犬抗体消长规律及影响因素

应用犬瘟热病毒（ＣＤＶ）血清中和试验，对从日本引进的犬瘟热弱毒疫苗免疫犬的血清中和抗体效价进行了检测，探讨了免疫剂量、免疫程序和犬的年龄对抗体效价的影响。结果表明，试验犬于第１次免疫后１４ｄ左右产生１∶９以上的血清中和抗体，随后抗体水平迅速升高，３５ｄ时７８．３８％的免疫犬抗体效价超过１∶１００，６０ｄ达到高峰，６个月试验结束时，血清中和抗体效价仍维持在１∶１００以上。该犬瘟热弱毒疫苗的最低免疫剂量为１０３．０ＴＣＩＤ５０，以２周或３周间隔连续免疫３次均可使免疫犬获得完全保护。

18例被同一狂犬咬伤者全程注射狂犬疫苗后五年随访及抗体测定

为了解犬咬伤者注射狂犬疫苗后抗体产生情况及维持时间，对１８名同一狂犬咬伤者全程注射狂犬疫苗后二周、一年、五年分别在血清中和抗体测定（ＥＬＩＳＡ），结果显示：二周后１８人抗体阳性率１００％，ＧＭＴ１０６（３６－３１８）ＩＵ；一年时间：ＧＭＴ１９（６－１７４）ＩＵ；加强一针抗体水平迅速增长；ＧＭＴ２１６（３９－７１４）ＩＵ；五年时ＧＭＴ８（４－５６）ＩＵ。五年随访均健在，随着时间的延长抗体水平逐渐下降，但五年时间仍具有一定保护力，无一人转阴，说明国产疫苗（２．５ＩＵ／支）质量可靠，保护期理想。