血清冻存13年后乙肝病毒表面抗原检测结果的评价

目的 :评价血清常规冻存 13年后HBsAg的检测结果。方法 :采用酶免疫测定法 (EIA)对保留血清 2 5 5份作HB sAg检测 ,并与原用单克隆抗HBsAg诊断血细胞 (McAb -RPHA)检测的结果作一致性检验 (Kappa分析 )。结果 :以EIA为标准 ,与原McAb -RPHA检测的结果比较 ,McAb -RPHA检测的假阳性率为 12 .5 0 % (1/ 8) ,假阴性率为 0 81% (2 /2 4 7)。McAb -RPHA与EIA两种方法之间 ,即同一批血清 13年前后两次检验的符合率为 98 82 % ,k =0 8175。结论 :在 - 2 0℃环境下经 13年冻存后 ,血清HBsAg检测不受影响。

冻存血清的浓度分离现象与乙型肝炎病毒颗粒的分布状态

研究了冷冻储存的血清样品发生浓度分离现象的条件,讨论了它的形成机制同时发现,发生浓度分离后,上层和下层液体中血清蛋白的比率、密度,电泳图谱及HBsAg浓度,均有非常显著差异。Dane颗粒仅见于下层液体中。分部取样进一步分析表明,冷冻血清不仅有肉眼可见的分层,还有密度梯度形成,HBsAg浓度也成相应的梯度分布。这种浓度分离现象造成的冻存血清或溶液中溶质的不均匀分布,对病毒学,免疫学及分子生物学等实验研究具有普遍意义。

人胎脑神经干细胞来源少突胶质前体细胞冻存方法的优化

目的通过改变不同因素条件优化人胎脑神经干细胞来源的少突胶质前体细胞(OPC)冻存方法,进一步提高复苏活率。方法比较使用消化和机械吹打两种方法收集人OPC,采用人多能干细胞(hPSC)无血清冻存液、含930 mL/L胎牛血清(FBS)和70 mL/L二甲基亚砜(DMSO)的冻存液分别冻存细胞,比较两组冻存前后活率。择优后比较4种不同冻存液(含70 mL/L DMSO和930 mL/L FBS的冻存液,含70 mL/L DMSO、300 mL/L FBS的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、300 mL/L FBS、0.2 mol/mL海藻糖的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、100 mL/L FBS、300 mL/L羟乙基淀粉溶液的OPC完全培养基)、冻存速率(冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温)及冷冻保存时间3个因素对复苏活率的影响。在优选后的冻存方案基础上,复苏后7 d,使用免疫荧光细胞化学染色法比较OPC特异性标志物血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)、ST8α-N-乙酰神经酰胺α2,8-唾液酸转移酶1(ST8SIA1/A2B5)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4/NG2)、增殖相关KI-67抗原(ki67)表达。结果消化组收集细胞,冻存前后活率明显高于机械组;快速降温4组复苏活率均低于30%且无法继续培养,慢速降温4组复苏活率均较高。使用消化法收集细胞,冻存细胞数为2×10^6/mL;使用含海藻糖的冻存液,慢速降温冻存,复苏活率最高;可达(75.73±6.66)%。与对照组相比,复苏后培养组增殖倍数、ki67表达无明显差异,两组均表达PDGFRα、A2B5、NG2。短期和长期储存组复苏活率无明显差别。结论消化液收集OPC,使用含海藻糖的冻存液慢冻快融的方法,适用于人胎脑神经干细胞诱导OPC冷冻保存,复苏后不影响细胞增殖和标志物表达,储存时间对复苏活率无影响。

γ-聚谷氨酸在细胞冻存中的作用

无DMSO、无血清细胞冻存液在临床级细胞产品的冷冻保存中具有重要的应用价值。本文以K562细胞为模型,设置含10%(v/v)DMSO及胎牛血清的冻存液为阳性对照,含10%(v/v)甘油的RPMI 1640培养基冻存液为阴性对照组,含10%(v/v)甘油及0.01%(w/v)γ-PGA的RPMI 1640培养基冻存液为实验组,考察了在无DMSO、无血清细胞冻存体系中γ-聚谷氨酸对细胞的冷冻保护作用。将K562细胞以1×10^6cells/mL的密度分别悬浮在上述冻存液中,置于液氮冻存10周,检测复苏后K562的细胞复苏率、细胞形态以及复苏后细胞的扩增情况,以评判γ-聚谷氨酸在无DMSO无血清冻存液中对K562细胞的冷冻保护作用。结果显示,实验组的细胞复苏率为(83.00±3.00)%,明显高于阴性对照组的(70.33±5.51)%(p<0.05)和阳性对照组的(71.00±2.65)%(p<0.05);且实验组冻存后的细胞形态完整,冻存前后细胞的平均直径及圆度基本一致,细胞复苏后培养24h后的细胞活性为(88.83±14.29)%,明显高于阴性对照组的(67.51±5.20)%(p<0.05),与阳性对照组的(78.75±3.31)%没有显著性差异,同时复苏后细胞扩增的延滞期明显缩短。可见,在无DMSO、无血清的甘油冻存体系中添加γ-PGA可显著提高细胞的冻存效果,具有良好的实际应用价值。