低氧低糖及血清剥夺联合处理抑制Nrf2信号通路诱发大鼠骨髓间充质干细胞氧化应激和凋亡

目的探讨低氧低糖血清剥夺(GSDH)处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)氧化应激及凋亡的影响。方法在体外对提取纯化后的原代BMSCs利用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理建立BMSCs细胞损伤模型。采用集落形成实验、细胞周期测定以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;通过细胞凋亡试剂(AnnexinV-FITC/PI)、线粒体膜电位检测试剂(JC-1)染色和线粒体荧光探针(Mito-Trancker)检测细胞凋亡;细胞活性氧簇(ROS)和钙离子(Fluo-4AM)检测细胞氧化应激水平;Western blotting检测抗氧化应激相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)等以及核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)信号通路中关键分子的蛋白表达水平。结果大鼠原代BMSCs表面标志物高表达CD29、CD71,低表达CD45、CD34;GSDH处理抑制BMSCs细胞增殖(P<0.05)和迁移(P<0.05),增加ROS和钙离子水平(P<0.05),且抑制抗氧化应激相关分子GPX4等蛋白表达(P<0.01);与空白对照组相比,GSDH处理后BMSCs凋亡显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.01),网络化减少(P<0.01)。Nrf2信号通路中Nrf2蛋白及下游关键分子的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GSDH处理诱发的BMSCs氧化应激及进一步导致的凋亡损伤与Nrf2信号通路被抑制有关。

香萱解郁方对血清剥夺诱导HT22细胞损伤模型的神经保护作用

目的探讨香萱解郁方含药血清对血清剥夺致小鼠海马神经元HT22细胞损伤模型的影响。方法采用血清剥夺培养HT22细胞建立神经损伤体外模型,实验分为对照组、模型组和中药组[中药组A(含药血清15%浓度)、中药组B(含药血清20%浓度)],各组血清剥夺12 h后,通过CCK8法检测各组细胞活力,确定15%浓度含药血清干预后细胞的存活率最高,设定为后续实验中药组的药物浓度。免疫荧光染色法检测神经元特异性微管蛋白(β-TubulinⅢ)在各组中的表达,蛋白质免疫印迹法及qPCR法检测脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及其mRNA在各组中的表达。结果在加药后培养12 h,中药组的细胞活力明显高于对照组与模型组(P<0.001)。培养24 h,模型组细胞活力较对照组明显下降(P<0.001),中药组较模型组明显提高(P<0.001)。培养36 h,模型组细胞活力较对照组显著下降(P<0.001),中药组较模型组明显提高(P<0.001)。模型组BDNF蛋白含量及BDNF mRNA表达量较对照组显著降低(P<0.05,P<0.001),模型组少数神经元长出突起;中药组BDNF蛋白含量及BDNF mRNA表达量较模型组显著增加(P<0.05),中药组HT22细胞轴突突起长度和分支增加,β-TubulinⅢ阳性表达明显增多。结论香萱解郁方含药血清对血清剥夺诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有神经保护作用,可能与促进BDNF蛋白表达有关。

血清剥夺法分离U87细胞系中的胶质瘤干细胞

背景:细胞周期分析已证实,90%以上的干细胞处于G0静止状态,因此采用不含任何生长因子和其他相关营养添加剂的血清剥夺培养基更适合筛选分离肿瘤干细胞。目的:应用血清剥夺法培养胶质瘤U87细胞,并筛选鉴定该细胞系中的胶质瘤干细胞。方法:将U87细胞培养在只含有DMEM和L-谷氨酰胺的培养基中培养6d,筛选出胶质瘤干细胞,接着更换为神经干细胞培养基,观察细胞肿瘤球的形成过程;将肿瘤球接种于血清培养基,观察其在体外的分化特点;免疫荧光鉴定血清剥夺后尚存的细胞、增殖形成的肿瘤球细胞和分化细胞。结果与结论:应用血清剥夺的方法成功地筛选出了表达CD133的肿瘤干细胞,并能增殖形成肿瘤球;肿瘤球可多向分化,子代细胞表达胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶。说明U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞。

血清剥夺致PC12细胞死亡及对细胞周期的影响

目的 观察血清剥夺致PC12细胞死亡及对细胞周期的影响。方法 流式细胞术检测在含 5 %和 2 %胎牛血清的培养基中 ,PC12细胞死亡和细胞周期的改变。结果 随着血清浓度的下降 ,PC12细胞死亡或凋亡增加 ,同时 ,S期的细胞所占百分比降低 ,G2 期细胞所占的比例增加 ,在含 2 %胎牛血清的培养基中培养的细胞更加明显。结论 ①PC12细胞经血清剥夺培养后产生的损伤可能引发了细胞周期阻滞 ,当损伤未得以及时修复时 ,导致细胞凋亡。②在细胞周期和细胞死亡之间可能存在密切的联系。

缺氧和血清剥夺诱导的PC12细胞DNA损伤与修复

探讨 PC12细胞在缺氧 ( 3 7℃ ,5 % O2 ,95 % N2 )、血清剥夺条件下 DNA损伤与修复、凋亡、坏死或生存的变化规律。应用单细胞凝胶电泳技术、流式细胞学技术检测在不同时间点 ,缺氧、无血清培养等诱导下对 PC12细胞单链 DNA损伤与修复、凋亡的影响。结果发现在 PC12细胞 DNA损伤值均在 0 .5 h时达第一个峰值 ,随后下降。 3 h后DNA损伤数值再次逐渐增加并达到最高值。细胞凋亡峰值略滞后于 DNA损伤峰值 ,并于 DNA损伤程度基本相平行。提示 PC12细胞在缺氧和血清剥夺条件下存在 DNA损伤与修复的动态变化过程 ,DNA损伤后可能直接诱导细胞凋亡 。

环孢霉素A对缺氧血清剥夺再灌流后PC12细胞的保护作用

目的 :研究环孢霉素A对短暂缺氧血清剥夺再灌流后PC1 2细胞的保护作用和可能的作用机制。方法 :将PC1 2细胞随机分为对照组、缺氧组和干预组 ,缺氧组于缺氧血清剥夺 1 5min后复氧复注血清 1h ,干预组自缺氧前 4h即给予环孢霉素A ,并同样于缺氧血清剥夺 1 5min后复氧复注血清 1h ,测定各组ATP含量 (生化发光法 )、线粒体膜电位 (Rhodamine1 2 3标记 ,流式细胞仪测定 )、细胞活性 (MTT法 )。结果 :与对照组相比 ,缺氧组ATP含量、线粒体膜电位、细胞活性显著降低 ,差异具有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ;干预组与缺氧组的ATP含量、线粒体膜电位、细胞活性的差异有统计学意义 (P <0 .0 1 )。干预组与对照组间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :环孢霉素A是线粒体膜渗透性转换孔抑制剂 ,在短暂缺氧血清剥夺再灌流后对维持PC1 2细胞线粒体的完整和功能起着非常重要的作用 。

短暂缺氧血清剥夺再灌注后神经细胞顿抑现象的研究(英文)

目的 研究短暂缺氧、血清剥夺复氧复注血清 (再灌流 )后神经细胞顿抑现象及其可能机制。方法 将PC12细胞随机分为正常对照组和缺氧组,每组根据不同的再灌流时间又分为 3个亚组 (缺氧组分别为缺氧 15min再灌流 1h组、3h组、6h组,正常对照组各亚组的时间点与缺氧组相对应)。测定短暂缺氧血清剥夺再灌流后不同时间点的三磷酸腺苷含量、线粒体膜电位和细胞活性。结果 与正常对照组相比,缺氧血清剥夺 15min再灌流 1h后的三磷酸腺苷含量(1. 05±0. 34)、线粒体膜电位(41. 39±1. 242)和细胞活性 (0. 809±0. 087)显著降低 (P<0. 05),且于再灌流 6h后基本恢复至正常水平。结论 短暂缺氧血清剥夺再灌流后,存在低能量状态,且可完全恢复,表明可能存在神经细胞顿抑现象,其原因可能与再灌流后线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶等活性下降及线粒体的膜电位变化等有关。

血清剥夺抑制心肌细胞增殖、促进凋亡及对P53和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的研究血清剥夺对心肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法将人心肌细胞AC16分为血清剥夺组(细胞在无胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h)、对照组(细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养48 h)。采用CCK-8法检测心肌细胞活力,EdU实验法检测细胞DNA合成水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平及线粒体膜电位变化,蛋白质印迹分析检测心肌细胞中caspase-9、Bcl-2、P53、增殖细胞核抗原(PCNA)、cyclinD1、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt5a、Axis抑制蛋白1(Axin1)、蓬乱蛋白2(Dvl2)、蓬乱蛋白3(Dvl3)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示对照组的光密度值为1.93±0.01,血清剥夺组的光密度值为1.08±0.08,后者为前者的55.8%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);细胞DNA合成受到抑制,血清剥夺组细胞DNA合成水平下降为对照组的65.6%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清剥夺诱导了心肌细胞的凋亡,对照组凋亡率为(6.34±0.47)%,血清剥夺组凋亡率为(56.83±1.90)%,后者为前者的8.9倍,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);血清剥夺组心肌细胞线粒体膜电位下降,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质印迹分析结果显示,血清剥夺促进了心肌细胞中caspase-9蛋白的表达,同时抑制了心肌细胞中Bcl-2、P53、PCNA、cyclin D1蛋白的表达;血清剥夺抑制了心肌细胞中β-catenin、Wnt5a、Axin1、Dvl2、Dvl3、LRP6蛋白的表达。结论血清剥夺可抑制心肌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

用于相对和绝对定量的等量异位标签-二维液相色谱-串联质谱法分析雌二醇和血清剥夺对乳腺癌细胞内蛋白质含量的影响

雌激素和血清中的激素及各种生长因子在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。研究雌激素和血清对乳腺癌细胞中蛋白质组成和含量的影响对于阐明雌激素和血清对乳腺癌细胞影响的分子机理具有重要的意义。利用四重用于相对和绝对定量的等量异位标签(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)标记结合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chrom atography-tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)对雌二醇(17β-oestradiol,E2)和血清各自以及共同作用对MCF7乳腺癌细胞内蛋白质表达的影响进行了比较,共鉴定到置信度在95%以上的蛋白质576种,其中各组相对于正常培养组的细胞共找到26种差异在1倍以上的蛋白质,其中10种上调,16种下调。研究发现E2和血清可显著影响细胞内与蛋白质合成相关的蛋白质的水平。实验结果表明:iTRAQ-LC-MS/MS是进行多个样品差异蛋白组比较的一种有效方法。

血清剥夺促进成纤维细胞向内皮细胞转分化的体外研究

目的模拟体内急性心肌梗死缺血缺氧微环境,探讨血清剥夺是否能激活心肌成纤维细胞向内皮细胞转分化。方法取新鲜分离的C57BL/6新生小鼠心脏组织,获取成纤维细胞进行培养,用白血病抑制因子(LIF)促进成纤维细胞自我更新、长程维持干性和抑制其向终末分化。将第3代成纤维细胞分为:对照组[DMEM+10%胎牛血清(FBS)培养]、血清剥夺24 h组(不含FBS的DMEM培养24 h)、血清剥夺48 h组(不含FBS的DMEM培养48 h)、血清剥夺72 h组(不含FBS的DMEM培养72 h)。经过不同处理后,采用q PCR法检测各组细胞谱系特异性基因的表达变化,采用体外血管新生实验和Dil-Ac-LDL吞噬实验检测血清剥夺后成纤维细胞的功能学变化,采用ELISA法检测血清剥夺后成纤维细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的情况。结果血清剥夺不同时间组成纤维细胞形成血管分叉的数目与对照组相比均增加(P<0.05),但均未发现诱导细胞吞噬Dil-Ac-LDL的现象。与对照组比较,血清剥夺48 h组成纤维细胞中内皮特异性基因CD31和VE-herin的表达均升高(P<0.05);其中血清剥夺48 h组成纤维细胞中CD31的表达是对照组的13.7倍(P<0.05),血清剥夺72 h组是对照组的2倍(P<0.05)。ELISA检测结果显示,血清剥夺48h组成纤维细胞分泌的VEGF是对照组的7倍(P<0.05),血清剥夺72 h组是对照组的3.7倍(P<0.05)。结论血清剥夺可以激活心肌成纤维细胞向内皮细胞谱系的转分化。

白藜芦醇对血清剥夺诱导大鼠皮层神经元自噬的影响

目的:研究白藜芦醇(RSV)对血清剥夺诱导大鼠神经元自噬的影响及分子机制。方法:将原代培养的大鼠皮层神经元分为对照组(control)、血清剥夺组(SD)、RSV处理组(RSV)和RSV联合组SIRT1抑制剂EX527处理组(RSV+EX 527),利用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞活性,免疫荧光染色检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达变化、Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达水平变化。结果:与正常对照组相比,血清剥夺引起细胞活性下降、SIRT1表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例减少,Beclin1表达降低(P <0. 05);经过RSV处理后,细胞活性增加(P <0. 05),大鼠神经元SIRT1表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例增加,Beclin1表达增加;使用EX 527处理后,RSV的神经保护作用受到抑制。结论:RSV通过激活SIRT1活性促进大鼠皮层神经元自噬。

糖皮质激素对抗血清剥夺诱导的小鼠肝癌细胞凋亡作用及机制研究

目的探讨糖皮质激素对血清剥夺条件下小鼠肝癌细胞系H22凋亡的影响及相关机制。方法血清剥夺诱导H22细胞凋亡的同时分别添加不同浓度的糖皮质激素皮质酮(CORT)以及糖皮质激素受体拮抗剂RU486,将细胞依次分为对照组、血清剥夺组、CORT组(0.25、0.5、1μmol/L)、RU486组(1μmol/L)、CORT+RU486组(1μmol/L CORT+1μmol/LRU486),24 h后流式细胞术染色检测H22细胞凋亡水平变化。同时,在正常血清培养条件下,CORT(1μmol/L)处理H22细胞48 h后提取细胞各组分蛋白进行蛋白质免疫印迹实验,检测糖皮质激素受体(GR)核转位以及Hsp90蛋白表达水平变化。结果与对照组相比,血清剥夺组H22细胞凋亡水平显著升高(P<0.001);CORT处理后细胞凋亡水平与血清剥夺组相比又显著降低(P<0.05),并呈现剂量依赖性;CORT与RU486联合处理后H22细胞凋亡水平与CORT(1μmol/L)组相比又显著升高(P<0.001)。在正常血清培养条件下,CORT处理后H22细胞中GR核转位增加,同时协助GR进行核转位的热休克蛋白(Hsp90)表达水平升高。结论糖皮质激素可以对抗血清剥夺诱导的小鼠肝癌H22细胞凋亡,其机制可能与Hsp90协助下增强的GR核转位有关。

血清剥夺反应因子(Sdpr)敲除及转基因小鼠的建立与表型分析

目的建立Sdpr基因敲除小鼠及Sdpr转基因小鼠模型,为Sdpr基因功能的研究提供小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9技术构建Sdpr基因敲除小鼠,利用过表达质粒构建Sdpr转基因小鼠模型,利用PCR鉴定小鼠基因型,利用qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达情况,获取小鼠组织进行组织病理学分析,利用流式细胞术对小鼠免疫细胞比较分析。结果获得Sdpr基因敲除及转基因小鼠模型。与野生型小鼠相比,基因敲除小鼠Sdpr基因表达降低;组织多处出现炎性灶,肺、脂肪有炎性细胞浸润;肝出现脂肪变性,中央静脉周围可见髓外造血;脾组织红髓出现髓外造血;骨髓中T细胞比例降低,胸腺中CD4^(-)CD8^(-)细胞增多,CD4^(+)CD8^(+)细胞减少。转基因小鼠Sdpr基因表达增加;肝组织轻微脂肪变性;肺泡间隔增宽;脾组织淋巴细胞增生,红髓细胞增多;外周血中B细胞比例增加,M细胞、T细胞比例降低,胸腺CD4^(+)细胞增多,CD4^(+)CD8^(+)细胞减少。结论建立和鉴定了Sdpr敲除和转基因小鼠,可以为研究SDPR蛋白及其相关胞膜窖蛋白在不同组织器官中的作用机理提供模型。

熊果酸通过抑制自噬对血清剥夺诱导的H9c2细胞起抗凋亡作用

目的冠状动脉粥样硬化心脏病(coronary atherosclerotic cardiopathy)造成的心肌缺血(myocardial ischemia)严重威胁人类生命安全,本研究从细胞水平阐述了熊果酸(ursolic acid,UA)对血清剥夺心肌细胞自噬和凋亡的作用。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞。分为对照组、血清剥夺组、熊果酸处理组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理联合熊果酸组、雷帕霉素预处理联合熊果酸组。流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、ATG5以及凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bc L-2、Bax的表达。结果10μmol/L熊果酸为处理H9c2细胞的最适浓度;血清剥夺能造成H9c2细胞LC3 II/I比值、Beclin1和ATG5表达增加(P<0.01),熊果酸处理后能降低其表达(P<0.05);血清剥夺造成H9c2细胞凋亡率增加(P<0.001),熊果酸处理后能降低凋亡率(P<0.01),3-MA预处理组能进一步降低凋亡率(P<0.001),而雷帕霉素预处理组凋亡率上升(P<0.001);血清剥夺能造成H9c2细胞cleaved-caspase3表达量、Bax/Bc L-2比值升高(P<0.001),熊果酸处理后抑制了血清剥夺造成的cleaved-caspase3的表达量和Bax/Bc L-2比值升高(P<0.01),3-MA预处理组能进一步降低cleaved-caspase3的表达量和Bax/Bc L-2比值(P<0.001),雷帕霉素预处理组Bax/Bc L-2比值回升(P<0.05)。结论熊果酸对血清剥夺H9c2细胞的抗凋亡作用与抑制自噬有关。

ABPPk对施万细胞血清剥夺损伤的保护作用机制研究

目的:探讨牛膝多肽k(Achyranthes bidentata polypeptides k,ABPPk)对血清剥夺引起的施万细胞凋亡的保护作用机制。方法:通过转录组测序及生物信息学方法分析ABPPk对施万细胞血清剥夺损伤的保护作用机制。结果:转录组测序及生物信息学分析结果显示,ABPPk组主要参与正向调节粒细胞分化、Rho蛋白信号转导、肌动蛋白细胞骨架、细胞增殖、蛋白质泛素化等生物学过程,Rhog、Pak2、Yes1、Mef2c、Dock7等基因参与其中;神经生长因子(nerve growth factor,NGF)组主要参与囊泡介导的运输、胞吞作用、细胞形态调节、钙离子稳态调节等生物学过程,Kalrn、Mapk6、Sgk1、Cdc42bpb、Cnot6等基因参与其中。结论:ABPPk和NGF对施万细胞血清剥夺的保护作用机制有所不同,主要调控分子也不同。

AIF和BNIP3在血清剥夺诱导的PC12细胞损伤和死亡过程中的变化

目的:研究凋亡诱导因子(AIF)和促凋亡调节蛋白3(BNIP3)在血清剥夺诱导的PC12细胞损伤和死亡过程中的变化。方法:PC12细胞在不含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,建立PC12血清剥夺模型,观察其增殖情况以及AIF和BNIP3的表达情况。结果:随血清剥夺的时间增加,细胞死亡率上升(P<0.05)。细胞免疫荧光实验显示,血清剥夺后AIF在细胞核中分布增多,胞核形状不一并聚集成团。免疫印迹法进一步证实了血清剥夺时间越久,AIF和BNIP3在细胞和线粒体中表达水平越高(P<0.05)。结论:AIF与BNIP3在血清剥夺诱导的细胞损伤和死亡相关过程中表达水平上升。

人参皂苷Re体外抗氧化能力及其对血清剥夺神经细胞作用的研究

目的:探讨三七中人参皂苷Re体外抗氧化能力和对血清剥夺损伤神经细胞的作用。方法:通过体外清除二苯代苦味酰肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)自由基法、还原能力测定法测定人参皂苷Re体外抗氧化能力;通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)测定人参皂苷Re对神经细胞血清剥夺损伤的保护作用。结果:人参皂苷Re体外自由基清除率不足10%,还原能力不足12%,低于阳性对照维生素E,但对血清剥夺损伤的神经细胞保护作用非常显著(细胞存活率最高78%),活性高于同浓度下的维生素E。结论:人参皂苷Re体外抗氧化能力微弱,不是通过提供电子来达到抗氧化作用,但可保护血清剥夺损伤的神经细胞,提高神经细胞成活率,抑制其损伤、凋亡的作用。

维生素C对TNF-α及血清剥夺诱导的人髓核细胞凋亡的作用

目的探讨维生素C(Vitamin C,Vit C)在TNF-α及血清剥夺诱导人椎间盘髓核细胞凋亡中的作用及机制。方法取脊柱矫形手术患者的髓核组织,消化法获得正常髓核细胞,取第3代细胞按不同处理因素分为Vit C作用组(A组)、TNF-α诱导组(B组)和血清剥夺组(C组),每组再分为以下亚组:A组分为A1组(基础培养液)、A2组(100μg/m L Vit C)、A3组(200μg/m L Vit C);B组分为B0组(对照组)、B1组(100 ng/m L TNF-α)、B2组(100μg/m L Vit C+100 ng/m L TNF-α)、B3组(200μg/m L Vit C+100 ng/m L TNF-α);C组分为C0组(对照组)、C1组(FBS浓度由8%降低为2%)、C2组(2%FBS+100μg/m L Vit C)、C3组(2%FBS+200μg/m L Vit C)。各组作用24 h后,采用流式细胞术检测各组膜联蛋白V、碘化丙啶双染后髓核细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测p53(基因编码相对分子质量为53×103的蛋白质)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Sox9和糖胺多糖(Aggrecan)m RNA表达。结果 A组:与A1组比较,A2、A3组的Vit C均能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达(P<0.05),但A2、A3组间比较差异无统计学意义(P>0.05);A2、A3组的Vit C可促进髓核细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan、Sox9 m RNA表达,且A3组促进作用显著大于A2组(P<0.05)。B组:与B0组比较,B1组TNF-α促进了髓核细胞凋亡,增加了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达(P<0.05);与B1组比较,B3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达,而B2组的Vit C则增加其凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组:与C0组比较,C1组2%FBS能诱导髓核细胞凋亡,但降低了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达(P<0.05);与C1组比较,C3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达,而C2组的Vit C则增加其凋亡及p53、FAS m RNA表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Vit C能延缓或降低髓核细胞凋亡、促进细胞外基质合成与分泌,200μg/m L Vit C可延缓或降低100 ng/m L TNF-α和2%FBS诱导的凋亡,而100μg/m L Vit C则促进其诱导的凋亡。

血清剥夺对滋养细胞生物行为的影响及其机制研究

目的:观察人滋养细胞(TEV-1)经血清剥夺刺激后,VEGF、Netrin-1的表达及分布,同时监测TEV-1增殖、凋亡及管腔形成等生物学行为的变化,探讨血清剥夺对滋养细胞生物行为的影响及其机制。方法:行早孕期滋养细胞株TEV-1培养,并随机分为实验组(无血清培养基处理)及对照组(15%胎牛血清培养基处理),应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖凋亡情况,并监测管腔形成的变化。同时利用免疫荧光细胞化学染色法及实时定量PCR检测VEGF、Ne-trin-1蛋白表达定位及mRNA变化情况。结果:MTT及FCM检测表明,血清剥夺能抑制TEV-1细胞增殖、诱导TEV-1凋亡。滋养细胞培养24 h后可出现管腔形成现象,且这一现象不受血清剥夺的抑制。VEGF、Netrin-1蛋白均表达于TEV-1细胞胞浆,此外,实验组TEV-1VEGF mRNA与Netrin-1mRNA的表达水平依次为对照组的(0.94±0.02)、(0.62±0.11)倍。结论:血清剥夺后,滋养细胞出现凋亡增加及增殖抑制现象,并且VEGF、Netrin-1表达减少。血清剥夺可能通过影响VEGF、Netrin-1的表达来参与对滋养细胞增殖凋亡的调控。

短暂缺氧、血清剥夺再灌流后神经细胞顿抑现象的研究

目的 研究短暂缺氧、血清剥夺复氧复注血清 (再灌流 )后有无神经细胞顿抑现象存在及可能的发生机制。方法 将PC12细胞随机分为正常对照组和缺氧组 ,每组根据不同的再灌流时间点又分为 3个亚组 (缺氧组分别为缺氧 15min再灌流 1h组、3h组、6h组 ,正常对照组各亚组的时间点与缺氧组相对应 )。测定短暂缺氧血清剥夺再灌流后不同时间点的三磷酸腺苷含量、线粒体膜电位和细胞活性。结果 与正常对照组相比 ,缺氧血清剥夺 15min再灌流 1h后的三磷酸腺苷含量、线粒体膜电位、细胞活性显著降低 ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;缺氧血清剥夺 15min再灌流 6h后基本恢复至正常水平 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 短暂缺氧血清剥夺再灌流后 ,存在低能量状态 ,且可完全恢复 ,表明可能存在神经细胞顿抑现象 ,其原因可能与缺氧血清剥夺再灌流后线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶等活性下降及线粒体的膜电位变化等有关。