血清单纯疱疹病毒2型抗体检测分析及临床应用评价

目的了解性病门诊等疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒(HSV)抗体类型,为临床治疗提供诊断依据。方法 178例成人疑似患者中,有典型症状者51例,无典型症状者63例,其他(患有其他性病、配偶感染、性乱史等)64例;另外3例为婴幼儿。健康对照组20例。应用酶联免疫吸附试验进行HSV-2IgM/IgG抗体检测。结果临床有典型症状者HSV-2IgM/IgG抗体阳性率高,吸光度(A)比值(A比值=样本孔A值/标准孔A值)平均值分别为2.650和3.912,不典型症状者A比值平均值分别为1.450和1.566,与健康对照组比较差异有统计学意义(t1=6.85,P<0.05;t2=3.25,P<0.05)。3例婴幼儿的HSV-2IgM/IgG抗体阳性应引起临床重视。结论对于疑似生殖器疱疹IgM抗体阳性者,应视为感染HSV,对于单纯IgG抗体阳性者,应结合临床资料判断是否感染HSV。该实验要求基层医院完全能满足,值得推广应用。

单纯疱疹病毒2型ICP27_(377-513)核酸疫苗联合IL-15核酸疫苗免疫效果的观察

目的构建表达单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27(infected cells protein 27,ICP27)的重组质粒pcDNA3.1-ICP27377-513并观察白细胞介素(IL)-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗的免疫效果。方法采用分子克隆技术构建pcDNA3.1-ICP27377-513重组质粒。将BALB/c雌性小鼠随机分为pcDNA3.1-ICP27377-513联合pcDNA3.1-IL-15(pIL-15)组、pcDNA3.1-ICP27377-513组、pcDNA3.1组和pIL-15组,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后28 d取血,用微量中和实验法检测血清中特异性中和抗体,ELISA法检测血清中IL-4、IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)水平。阴道给予致死量HSV-2攻击小鼠,分别于接种后3 d、7 d和14 d收集阴道冲洗液,用荧光定量PCR法检测生殖道病毒载量。结果pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组中和抗体效价分别为40.00±8.16、28.67±4.47,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组IFN-γ、IL-4水平明显高于pcDNA3.1-ICP27377-513组(P<0.05),但IL-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴道给予致死量HSV-2攻击后,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组小鼠阴道冲洗液中病毒载量随着时间延长逐渐减低,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗对小鼠有较好的免疫保护作用。

马疱疹病毒1型ORF2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

研究旨在克隆马疱疹病毒1型(EHV-1)ORF2基因,通过大肠杆菌原核表达系统获得ORF2蛋白,制备多克隆抗体。根据EHV-1 YM2019株全基因组序列(GenBank:MT063054)设计1对引物,将ORF2基因克隆至pET-28a-ORF2原核表达载体中,通过Transetta(DE3)感受态细胞,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达ORF2蛋白,使用Ni-NTA琼脂糖纯化树脂纯化,免疫BALB/c小鼠,检测多克隆抗体的效价和特异性。结果显示:ORF2基因成功克隆至原核表达载体pET-28a中,并通过大肠杆菌表达系统得到ORF2蛋白,大小约为38 ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA纯化树脂获得纯度较高的重组蛋白,能够与EHV-1阳性血清特异性结合;间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价为1∶64000,RK-13表达的ORF2蛋白可被多克隆抗体能特异性识别。研究表明,大肠杆菌表达的ORF2重组蛋白具有良好反应原性,ORF2蛋白制备的多克隆抗体效价高、特异性强,可为ORF2蛋白的生物学功能和基因缺失疫苗的研究奠定基础。

抗单纯疱疹病毒1型的IgY制备及其生物学活性检测

目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和蛋白浓度定量试剂盒测定IgY效价、纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测IgY中和病毒的能力,测定病毒阻断率,以Vero细胞为病毒感染靶细胞,测定不同抗体浓度(0.01560、0.03125、0.06250、0.12500、0.50000、和1.00000 g·L^(-1))作用后细胞病变效应(CPE),根据CPE程度测定IgY体外抗HSV-1能力。结果:制备的IgY效价随免疫时间逐渐升高,达到1/1024000后保持稳定;IgY轻链重链条带清晰;IgY平均蛋白水平为11.544 g·L^(-1);IgY对HSV-1的阻断率可高达77.90%;HSV-1致CPE程度随抗体浓度升高而逐渐降低,当IgY浓度达到0.50000g·L^(-1)及以上时,25%以下细胞(甚至无细胞)发生病变。结论:成功制备出抗HSV-1的IgY,该抗体对HSV-1具有明显的中和阻断能力和体外抑制活性,可用于药物及诊断方法的开发。

性病门诊单纯疱疹病毒2型特异性抗体血清学调查

目的了解性病门诊患者单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus type 2,HSV-2）感染情况。方法用ELISA法检测我院性病门诊1215例患者HSV-2型特异性抗体,并对不同性别和不同年龄组的HSV-2 Ig g G抗体阳性情况进行对比研究。结果 1215例患者中,HSV-2 Ig g G抗体阳性者共291例,阳性率为23.95%,男性阳性率为21.34%（197/923）,女性阳性率为32.19%（94/292）,女性阳性率高于男性,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。年龄以31~40岁最多,为119例（男性81例,女性38例）;其次为21~30岁,为85例（男性54例,女性31例）。结论 HSV-2型特异性抗体检测率存在男女差异,女性高于男性。生殖器疱疹易发于21~40岁性活跃人群。HSV-2型特异性抗体血清学检测具有快速、简便、灵敏度高等优点,适用于临床检测。

鲤疱疹病毒2型ORF144原核表达和多克隆抗体制备

鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)引起的鲫造血器官坏死病是近年来对鲫(Carassius carassius)养殖业危害最大的疾病之一。通过PCR扩增得到ORF144基因全长,将其与pET-32a原核表达载体连接构建重组载体pET-ORF144,转化到大肠杆菌中,经IPTG诱导表达得到大小约46 kDa的重组蛋白,该蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在。将重组融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接ELISA检测显示抗体效价大于1∶51200。经Western Blot验证该抗体可特异性识别感染CyHV-2的细胞中的蛋白质和纯化的融合蛋白。间接免疫荧光结果显示该蛋白定位于细胞质,呈点状分布。结果表明构建的ORF144多克隆抗体可为病毒的基因功能和致病机制研究提供基础。

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。

乙酰紫草素体外抗2型单纯疱疹病毒机理的研究

目的研究乙酰紫草素(acetylshikonin,AS)体外抗2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)的活性及作用机理。方法以阿昔洛韦(acyclovir,ACV)为阳性对照药物,采用CCK-8法检测细胞活力,确定AS对成年非洲绿猴肾细胞(Vero)的最大无毒浓度;致细胞病变法和噬斑形成抑制实验测定AS对HSV-2的抗病毒活性;实时荧光定量PCR及半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)法测定病毒载量以评估AS对HSV-2复制周期不同阶段的抑制作用;透射电镜观察AS对HSV-2病毒粒子结构的影响。结果AS对Vero细胞的最大无毒浓度(maximal atoxic concentration,TC0)为3.785μmol/L,浓度为1.678~3.785μmol/L时能有效抑制HSV-2复制,减少噬斑形成,半数有效浓度(50%effective concentration,EC50)为0.334μmol/L。在12和36 h,病毒释放期加入AS的实验组TCID50低于病毒感染对照组(13.43±10.04 vs.127.00±0.32;3.47±0.55 vs.5.80±0.12),差异均有统计学意义(t=8.359、4.161,P均<0.05);在12、24、36 h,AS直接灭活病毒组病毒载量低于病毒感染对照组(0.24±0.09 vs.1.35±0.07;4.46±0.06 vs.6.75±0.04;2.70±0.04 vs.5.27±0.10),差异均有统计学意义(t=9.920、33.360、24.020,P均<0.05)。此外,AS处理可导致HSV-2病毒粒子形态异常,随着AS浓度升高,作用后的HSV-2超微结构发生渐进改变。结论AS对HSV-2具有一定抗病毒效应,其机理可能为直接破坏病毒颗粒完整结构发挥抗病毒作用。

新入伍人群单纯疱疹病毒Ⅰ型血清抗体检测分析

目的了解入伍新兵人群中单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染IgG抗体的流行分布,为预防提供科学依据。方法利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对本区近4年来自8个省市的360名入伍新兵血清进行HSV-ⅠIgG抗体检测。结果2002,2004,2006,2008年各年入伍新兵血清HSV-ⅠIgG抗体阳性率呈下降趋势,分别为90.00%,86.67%,85.55%,84.44%,平均86.67%;地区间差别明显,广西(96.00%)和江苏(92.98%)较高,甘肃(74.42%)和湖北(78.13%)较低;入伍前工作与否者的抗体阳性检出率差异无统计学意义。结论入伍新兵人群中HSV-Ⅰ感染水平较高,呈逐年降低趋势并有非常显著性地区差异;新兵入伍期间,应采取健康教育等有效预防措施,降低人群HSV-Ⅰ感染水平。

单纯疱疹病毒2型感染血清流行病学研究进展

单纯疱疹病毒 2型的发病率近年来不断上升 ,其与人类免疫缺陷病毒 1型的感染有协同作用。单纯疱疹病毒 2型引起的新生儿疱疹发病率也在上升。就单纯疱疹病毒 2型的感染特点 ,流行病学状况以及单纯疱疹病毒 2型血清型特异性诊断方法作一综述。

单纯疱疹病毒2型感染者血清Th1/Th2型细胞因子的检测

目的:探讨单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染者血清Th1/Th2型细胞因子的变化。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测了27例经荧光定量PCR(FQ-PCR)筛选HSV-2型DNA阳性感染者血清中细胞因子IL-2和IL-4水平。结果:(1)HSV-2型感染者血清中Th1型细胞因子IL-2的水平为(22.35±14.78)pg/mL,显著低于正常对照组(96.88±30.25)pg/mL(P<0.01)。(2)Th2型细胞因子IL-4的水平为(15.36±9.47)pg/mL,显著高于正常对照组(6.98±2.79)pg/mL(P<0.01)。结论:HSV-2型感染者血清Th1/Th2型细胞因子水平发生了显著改变,提示了HSV-2型感染者体内Th1/Th2型细胞亚群的飘移。

性病门诊患者与献血员单纯疱疹病毒Ⅱ型血清抗体的调查报告

目的:了解特定人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的流行情况。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测同期性病门诊患者297例和义务献血员91例血清HSV-2抗体(IgG),其中85例的检测结果用蛋白印迹法(WB)验证。结果:性病门诊患者血清HSV-2阳性率20.88％(62/297);义务献血员血清HSV-2阳性率8.79％(8/91)。WB法验证显示:ELISA法的敏感性与特异性分别为93.33％、97.14％,阳性与阴性预期值各为87.50％、98.55％。结论:江门市性病门诊患者血清HSV-2抗体阳性率明显高于献血员(P<0.01),接近某些西方国家的感染率。

禽腺病毒血清4型中国流行株fiber2蛋白单克隆抗体制备与鉴定

旨在制备禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)中国流行株的fiber2蛋白的特异性单克隆抗体。以纯化的FAdV-4中国流行株CH/HNJZ/2015免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,采用基于fiber2蛋白的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过5次亚克隆,获得2株分泌抗fiber2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2C3和7B4。以制备的2C3和7B4腹水进行亚型鉴定、反应原性、特异性以及中和活性测定。结果显示,成功制备了抗FAdV-4 fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,获得的单克隆抗体均为IgM亚型,可特异性识别FAdV-4及其fiber2蛋白,为FAdV-4的免疫检测和fiber2蛋白功能研究提供了研究材料。

养殖鲫鲤疱疹病毒2型的鉴定及病毒囊膜蛋白ORF131多抗的制备

为了解鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)在南京地区养殖场鲫鱼中的发病情况,对南京某渔场疑似CyHV-2感染鱼,采集鳃、肾脏等组织进行解旋酶基因(hel)PCR扩增测序及遗传变异分析;通过蔗糖密度梯度离心从发病鲫鱼组织中提纯病毒粒子,电镜观察其形态;对CyHV-2的10种囊膜蛋白编码基因进行测序,并基于生物信息学分析选择理想的囊膜蛋白进行原核表达,免疫小鼠制备抗血清。结果显示:患鱼组织hel基因检测阳性,其序列与参考株ST-J1毒株hel基因序列(GenBank登录号:JQ85364)高度同源(99.67%),并位于同一进化分支;利用蔗糖密度梯度离心结合Western blot检测发现,病毒粒子存在于40%~46%蔗糖层,电镜观察显示直径在160 nm左右;10种囊膜蛋白中开放阅读框131(ORF131)囊膜蛋白具有一段连续B细胞表位且抗原性良好,将ORF131原核表达、免疫小鼠后制备的抗血清ELISA效价达1∶4000。本研究为南京地区CyHV-2感染的检测和防控提供了依据。

余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究

目的从余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物3种提取物体外筛选抗单纯疱疹病毒1型和2型的活性成分。方法通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、空斑减数法,判断药物的毒性及其抗病毒效应。结果余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物对于单纯疱疹病毒1型的半数抑制浓度分别为25.28,66.17,100.94μg/ml;余甘子的3种提取物对于单纯疱疹病毒2型的半数抑制浓度分别为31.70,180.3,112.1μg/ml。结论余甘子3种提取物在体外对单纯疱疹病毒1型和2型均有一定的抑制作用。

不同人群单纯疱疹病毒2型IgG抗体的检测情况分析

目的:了解珠海市一般人群、无症状可疑生殖器疱疹患者及有症状可疑生殖器疱疹患者血清单纯疱疹病毒2型(HSV-2)IgG抗体感染水平。方法:应用酶标仪对一般人群、无症状可疑患者、有症状可疑患者三组人群进行HSV-2IgG抗体检测,分析三组人群HSV-2的感染率,并比较无症状与有症状可疑生殖器疱疹患者血清学的状况。结果:在96名一般人员中HSV-2IgG抗体阳性率13.54%,175例无症状可疑患者HSV-2IgG抗体阳性率57.1%,174例有症状可疑患者HSV-2IgG抗体阳性率72.41%。结论:HSV-2IgG抗体对无症状可疑患者和中、后期及复发有症状患者具有协助诊断的意义。

白介素2基因佐剂协同单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗免疫诱导的特异性免疫应答

目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响,以及在HSV-1病毒角膜攻击时的保护效果。方法利用pcDNA3.1载体分别构建HSV-1糖蛋白D和IL-2的真核表达质粒pgD和pIL-2,体外鉴定其表达。动物实验分为pcDNA3.1空载体对照组、pgD单独免疫组和pgD+pIL-2联合免疫组3组,具体为通过肌肉免疫接种BALB/c小鼠3次,间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体滴度并做亚型分析,利用3H-TdR掺入法进行Th细胞增殖实验,ELISA试剂盒检测Th细胞分泌的IL-2、IFN-γ和IL-10水平,耳廓肿胀实验检测迟发型超敏反应(DTH)反应;HSV-1病毒角膜攻击后,裂隙灯显微镜观察角膜上皮病变。结果与pgD单独免疫组相比,pIL-2的协同免疫可以显著提高IgG2a抗体滴度、Th细胞增殖反应和DTH反应,Th细胞分泌IL-2和IFN-γ水平也显著提高,IL-10水平明显下降。在动物保护实验中,pIL-2的协同免疫明显增强了pgD疫苗在病毒攻击时对角膜的保护效果。结论IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高pgD核酸疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,增加核酸疫苗的免疫保护效果。

马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的实验研究

目的观察马齿苋合剂水提液对单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的抑制作用。方法马齿苋水提液作用于Hep-2、Vero细胞和原代兔肾(PRK)3种细胞上研究其抗病毒作用。结果马齿苋合剂水提液在Hep-2、Vero细胞和PRK细胞上均有明显的抗HSV-2作用,对HSV-2的最小有效浓度(MTC)为0.5 mg/ml,而且毒性低,最大无毒浓度(TDO)为12mg/ml,治疗指数(TI)为30.0,并有直接杀灭HSV-2的作用。结论马齿苋合剂水提液具有抗HSV-2作用。

生命泉膏滋抗实验小鼠阴道单纯疱疹病毒2型感染的研究

目的 :研究中药生命泉膏滋 (FESOL)抗小鼠阴道 HSV- 2感染的药效学作用。方法 :以不同剂量 FESOL作用于阴道感染 HSV- 2实验小鼠 ,观察用药后动物的发病率、死亡率和病变发展速度及程度。结果 :FESOL 高、中剂量组 ,[8.33、1.6 7、0 .34 g/ (kg.d) ]能显著降低感染鼠的发病率、死亡率 ,同时显著减轻病变程度 ,减慢病变发展速度。结论 :中药 FESOL能有效抗小鼠阴道 HSV- 2感染。