血清可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4在胃癌早期诊断中价值

目的探讨胃癌患者可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(soluble cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,sCTLA-4)表达情况及其对胃癌的诊断价值。方法胃癌患者63例(胃癌组)、慢性萎缩性胃炎患者15例(胃炎组)、胃溃疡患者12例(胃溃疡组)、体检健康者24例(对照组),采用ELISA法检测4组血清sCTLA-4水平,电化学发光法检测癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)和糖类抗原72-4(carbohydrate antigen 72-4,CA72-4)水平,ROC曲线评价sCTLA-4单独及与CEA,CA72-4联合检测在胃癌诊断中的应用价值。结果胃癌组血清sCTLA-4,CEA及CA72-4水平明显高于胃炎组、胃溃疡组及对照组(P<0.05),胃炎组与胃溃疡组血清sCTLA-4水平明显高于对照组(P<0.05),胃炎组与胃溃疡组血清sCTLA-4水平比较差异无统计学意义(P>0.05),胃炎组、胃溃疡组与对照组血清CEA及CA72-4水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);胃癌组血清sCTLA-4水平在临床分期与淋巴结转移上差异有统计学意义(P<0.05);sCTLA-4诊断胃癌的AUC为0.618,临界值为8.31ng/mL,灵敏度和特异度分别为72.4%,79.3%,与CEA及CA72-4联合检测诊断胃癌的AUC为0.835,灵敏度和特异度分别为88.9%,94.2%。结论胃癌患者sCTLA-4表达明显升高,其对胃癌早期诊断有重要价值。

可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4联合癌胚抗原、糖类抗原19-9检测在诊断结直肠癌中的意义

目的探讨可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(s CTLA-4)、癌胚抗原(CEA)及糖类抗原19-9(CA19-9)联合诊断法对结直肠癌患者的临床诊断意义。方法选取80例结直肠癌患者作为实验组,选取40例健康人作为对照组,抽取其静脉血,测量s CTLA-4、CEA及CA19-9值。对比观察3种诊断方法和联合诊断法在敏感性、特异性、准确性、阳性预测值及阴性预测值方面的差异。结果联合诊断法的敏感性、准确性和阴性预测值明显高于单独任何一种诊断方法(P<0.05)。在特异性和阳性预测值方面与其他诊断方法差异无统计学意义(P>0.05)。结论 s CTLA-4、CEA及CA19-9联合诊断法在敏感性、准确性和阴性预测值方面有明显的优势,有很好的临床应用价值。

急性哮喘小鼠CD4^＋T淋巴细胞中细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4与气道重塑的相关性

目的 探讨急性哮喘小鼠CD4＋T淋巴细胞（简称T细胞）中细胞毒T细胞相关抗原（CTLA）-4与气道重塑的相关性.方法 采用腹腔注射含0.1％卵蛋白（OVA）的Al（OH）3溶液致敏制作急性哮喘小鼠模型,通过雾化吸入2.5％OVA激发哮喘,并使用地塞米松进行干预.最后1次激发完成后48 h,分别采集对照组和哮喘组小鼠眼球血检测IL-4和IFN-γ水平,取肺脏组织行HE染色.分别于最后1次激发完成后6h、12h、24h处死小鼠,采用流式细胞仪检测CD4＋T细胞中CTLA-4的表达水平,同时取肺脏组织行Masson染色检测气道上皮下胶原蛋白的沉积.结果哮喘组小鼠血清IL-4水平高于对照组,IFN-γ水平低于对照组（P〈0.01）.与对照组比较,哮喘组最后1次激发完成后12 h、24 h CD4＋T细胞膜内CTLA-4水平明显升高（P〈0.01）;而地塞米松组最后1次激发完成后6 h、12 h、24 h CD4＋T细胞膜内CTLA-4均明显升高（P〈0.01）.与对照组比较,哮喘组最后1次激发完成后24 h CD4＋T细胞膜外CTLA-4水平明显升高（P〈0.01）;而地塞米松组最后1次激发完成后12 h、24 h CD4＋T细胞膜外CTLA-4均明显升高（P〈0.01）.地塞米松组小鼠最后1次激发完成后12 h、24 h气道上皮下胶原蛋白沉积减少及基底膜增厚较哮喘组缓解.结论 地塞米松干预急性哮喘小鼠后CD4 ＋T细胞中CTLA-4表达明显上调,气道重塑较前减轻.

干细胞移植治疗重症肌无力与CTLA-4、乙酰胆碱受体相关性的实验研究

目的探讨干细胞移植治疗重症肌无力(MG)与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、乙酰胆碱受体(AChR)之间的相关性。方法 40只Lewis鼠随机分为正常对照组、模型对照组、佐剂对照组和干细胞移植组。除正常对照组外,其余三组大鼠均采用腹腔注射MG患者血清的方法制备MG大鼠模型。以ELISA R-eader检测各组血清AChR Ab滴度,流式细胞术检测各组CTLA-4的表达。结果干细胞移植组AChR Ab滴度和CTLA-4水平显著低于模型对照组及佐剂对照组(P<0.01)。结论干细胞移植可调节机体的免疫系统,从而降低血清AChR Ab水平,抑制CTLA-4的表达,为治疗MG提供了重要的理论依据。

吸入性变应原和口服糖皮质激素对过敏性哮喘患者血清可溶性CTLA-4的影响

目的探讨吸入变应原与口服糖皮质激素对过敏性哮喘患者血清可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(sCTLA-4)浓度的影响。方法采用随机、双盲、安慰剂对照,平行分组,第一组为单相哮喘反应和双相哮喘反应组给予患者吸入变应原,第二组为口服强的松或安慰剂组,1次/d,共2周。吸入性变应原或强的松前后抽静脉血检验血清,用酶链免疫吸附分析法测定血清中sCTLA-4浓度。结果在吸入变应原后24h,双相哮喘反应组血清sCTLA-4浓度(中位数)从29.0μg/L上升到44.0μg/L,而单相哮喘反应组sCTLA-4浓度与基础值相比无显著提高。强的松治疗2周后血清sCTAL-4与基础值相比显著下降,从37.0μg/L下降至22.0μg/L。而安慰剂组则没有显著下降。结论过敏性哮喘患者血清sCTLA-4浓度在吸入变应原后升高,而用强的松治疗后其浓度则下降。

外周血sCTLA-4作为晚期非小细胞肺癌患者的预后因子

目的：通过检测晚期非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）患者外周血可溶性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（soluble cytotoxic T lymphocyte associated antigen- 4，sCTLA-4）的表达，探讨其与晚期NSCLC患者生存期的关系。方法：采集2010年8月至2013年6月上海中医药大学附属龙华医院肿瘤科经病理证实的58例晚期NSCLC患者和30例正常人的外周血，运用ELISA法检测血中sCTLA-4含量，通过电话随访或上海市疾控中心获得患者生存期数据，分析sCTLA-4表达与NSCLC生存期的关系。结果：NSCLC患者外周血sCTLA-4表达率高于正常人（70.7% vs 6.7%， χ2=32.44，P〈0.01）,外周血sCTLA-4增高的患者中位生存期（MST）较短（41.63个月vs 31.57个月， χ2=7.765，P〈0.01），死亡风险高于其他患者（RR=305， χ2=8.01, P〈0.01）。结论：NSCLC患者外周血中sCTLA-4高表达，sCTLA-4可能成为晚期NSCLC患者的预后因子之一。

PD-L1联合CTLA-4检测在胸腔积液患者胸腔积液及外周血单个核细胞中的表达及意义

目的分析抗程序性死亡配体-1(PD-L1)联合抗细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)检测在胸腔积液患者胸腔积液及外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其临床意义。方法选择2015年6月—2016年6月上海复旦大学附属闵行医院呼吸内科诊治的胸腔积液患者84例作为研究对象,其中结核性胸腔积液28例,恶性胸腔积液27例,非结核非恶性胸腔积液29例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)检测患者胸腔积液、PBMC中PD-L1、CTLA-4的表达,并分析二者联合检测对恶性胸腔积液的诊断价值。结果与非结核非恶性胸腔积液比较,恶性胸腔积液患者PBMC中PD-L1、CTLA-4 mRNA,胸腔积液中PD-L1、CTLA-4表达含量显著增高,而结核性胸腔积液患者中上述指标则明显降低(P<0.05);胸腔积液、PBMC中PD-L1与CTLA-4的表达均呈显著正相关(r=0.477,0.418,P<0.05);胸腔积液中PD-L1、CTLA-4联合检测敏感度、特异度分别为92.5%、94.7%,均高于胸腔积液脱落细胞及PD-L1、CTLA-4单独检测,亦高于PBMC的敏感度、特异度。结论胸腔积液患者胸腔积液、PBMC中PDL1、CTLA-4的表达与病因有关,可反映局部微环境下的免疫功能状态,联合检测有助于良恶性胸腔积液的鉴别诊断。

白蛋白结合型紫杉醇联合CTLA-4抑制剂治疗非小细胞肺癌的效果

目的研究白蛋白结合型紫杉醇联合细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4抑制剂治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的效果。方法回顾性分析60例老年NSCLC患者,按照临床方案进行分组,单用白蛋白结合型紫杉醇患者为对照组(n=30),白蛋白结合型紫杉醇联合CTLA-4抑制剂患者为研究组(n=30)。观察两组一定疗程治疗后临床疗效、细胞免疫指标、肿瘤标志物指标、血清炎性因子水平及不良反应。结果研究组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);用药前,两组免疫指标、肿瘤标志物指标、血清炎性因子水平差异均无统计学意义(P>0.05),用药后,两组上述指标水平均明显改善,且研究组改善更明显(均P<0.05);研究组毒副反应发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合使用白蛋白结合型紫杉醇和CTLA-4抑制剂,对于NSCLC患者的治疗效果显著,总体疗效优异,具有较高安全性。

sCTLA-4与早期梅毒血清固定的相关性

目的:明确血清可溶性T细胞相关抗原-4(sCTLA-4)与早期梅毒血清固定的相关性。方法:ELISA检测60例早期梅毒血清固定患者、20例早期梅毒治疗后血清学转阴患者及20名健康志愿者血清中sCTLA-4水平;同时对血清固定患者sCTLA-4水平与RPR滴度及临床分期进行相关分析。结果:早期梅毒血清固定患者外周血sCTLA-4水平明显高于血清学转阴组及健康志愿者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清sCTLA-4水平与血清RPR固定滴度及临床分期无相关性(P>0.05)。结论:血清sCTLA-4表达水平增高可能与早期梅毒血清固定相关。

可溶性PD-L1及CTLA-4在原发性肝癌伴恶性腹腔积液患者中的表达水平及临床意义

目的研究原发性肝癌(PLC)伴恶性腹腔积液(MA)患者腹腔积液、外周血及单个核细胞(PBMC)中可溶性程序性死亡配体-1(sPD-L1)、可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(sCTLA-4)的表达水平,初步探讨其临床意义。方法选择2016年5月至2019年5月首都医科大学附属北京佑安医院肝病免疫科收治的189例腹腔积液患者作为研究对象,其中92例伴有MA的PLC患者为A组,97例伴有腹腔积液的肝硬化患者为B组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者腹腔积液及外周血sPD-L1、sCTLA-4的表达水平,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测患者外周血PBMC中PD-L1、CTLA-4 mRNA的表达水平。分析sPD-L1、sCTLA-4联合检测对PLC伴MA的诊断价值。结果 A组患者PBMC中PD-L1、CTLA-4 m RNA表达水平显著高于B组,外周血及腹腔积液中sPD-L1及sCTLA-4表达水平显著高于B组(P<0.05);外周血sPD-L1、sCTLA-4表达水平与外周血PBMC中PD-L1、CTLA-4 mRNA表达水平呈显著正相关(P<0.05);腹腔积液与外周血中sPD-L1、sCTLA-4表达水平呈显著正相关(P<0.05);腹腔积液中sPD-L1与sCTLA-4联合检测诊断PLC伴MA的灵敏度、特异度分别为91.4%、95.2%。结论 PLC患者腹腔积液、外周血及外周血PBMC中PD-L1与CTLA-4的表达与病因密切相关,可以在一定程度上反映不同原因腹腔积液导致的免疫微环境差异,有望成为PLC伴MA诊断及免疫治疗的靶点。

全长型和可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原4信使核糖核酸在溃疡性结肠炎中的表达

溃疡性结肠炎（UC）是慢性非特异性结肠炎性反应性疾病，其发病与遗传、免疫、环境等多种因素密切相关。其可能的发病机制为肠道细菌诱发过度的肠黏膜免疫反应，这种免疫反应在具有遗传易感性的人群中导致肠黏膜损伤。T细胞过度活化在自身免疫性疾病发病中起重要作用，在UC发病中亦具重要作用。细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）是T细胞活化负性调节因子，

细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4对活动与潜伏结核感染的鉴别诊断价值评估

目的 分析细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4）在活动性结核（active tuberculosis,ATB）与潜伏性结核感染（latent tuberculosis infection,LTBI）患者外周血中的表达情况,评价其在ATB与LTBI中的鉴别诊断价值.方法 收集2011年1月至2013年3月无锡市第五人民医院和复旦大学附属华山医院连续入选的48例患者,其中LTBI患者18例和ATB患者30例.应用流式细胞术对48例患者CD4＋CD25＋FoxP3＋T淋巴细胞CTLA-4的表达情况进性检测,采用非参数Mann-Whitney U检验对CTLA-4表达水平进行比较.结果 ATB患者表达CTLA-4的CD4＋CD25＋FoxP3＋Treg占CD4＋CD25＋FoxP3＋Treg的百分比中位数为18.95％（13.86％,27.73％）;而LTBI患者CTLA-4表达的中位数为6.67％（5.74％,9.59％）,两组比较差异有统计学意义（U=18.0,P〈0.01）.根据CTLA-4表达量进行受试者工作特征曲线分析,其曲线下面积为0.96,最佳阈值为13.25％.诊断活动性结核的敏感度为86.7％,特异度为94.4％.结论 CTLA-4用于鉴别诊断γ干扰素释放试验阳性患者ATB与LTBI具有较高的敏感度和特异度,为进一步研究ATB的发病机制提供有意义的线索.

系统性红斑狼疮患儿血清sCTLA4、TNF-α水平表达及其临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患儿血清可溶性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(sCTLA4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平表达及其临床意义。方法我院就诊的40例SLE患儿(SLE组),根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分分为活动期组(SLEDAI评分≥10分,22例)和静止期组(SLEDAI评分<10分,18例),另选择同期同年龄组40例健康儿童(对照组),检测各组血清sCTLA4、TNF-α水平。结果 SLE组血清sCTLA4、TNF-α水平高于对照组(P<0. 05);活动期组血清sCTLA4、TNF-α水平高于静止期组(P<0. 05);SLE患儿血清sCTLA4、TNF-α水平与SLEDAI评分显著正相关(P<0. 05)。结论SLE患儿血清sCTLA4、TNF-α水平异常升高,且随病情严重程度加重而持续升高,共同参与了SLE的发病过程。

外周血sCTLA-4、sPD-L1及Ki-67在晚期卵巢癌中表达水平及与预后的相关性分析

目的探讨晚期卵巢癌(Ⅲc期和Ⅳ期)患者外周血可溶性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(sCTLA-4)、可溶性程序性死亡配体-1(sPD-L1)、Ki-67的表达水平以及与其预后的相关性分析。方法采用前瞻性研究,选取2019年1月至2020年1月于空军军医大学第一附属医院就诊的88例晚期卵巢癌患者纳入观察组,92例卵巢良性肿瘤患者纳入对照组。检测并比较两组患者外周血sCTLA-4、sPD-L1、Ki-67的表达水平,分析外周血sCTLA-4、sPD-L1、Ki-67表达水平与晚期卵巢癌临床病理特征及患者预后的关系;根据外周血sCTLA-4、sPD-L1水平均数高低及Ki-67阳性细胞率大小将观察组分为高表达组与低表达组,随访2年时间,比较两组患者的预后质量。结果观察组患者外周血sCTLA-4、sPD-L1表达水平为(17.64±5.28)、(14.79±4.36)ng/mL,均明显高于对照组[(9.84±2.68)、(8.16±2.26)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者Ki-67表达水平为76.14%,明显高于对照组(30.43%),差异有统计学意义(P<0.05)。外周血sCTLA-4、sPD-L1及Ki-67表达水平与观察组卵巢癌患者的分化程度、临床分期、腹水量有关联(P<0.05),与患者的年龄、卵巢癌病理类型、糖链多肽抗原125(CA125)水平无关联(P>0.05)。对观察组患者进行1~2年的随访,共有死亡病例28例。其中sCTLA-4、sPD-L1及Ki-67表达水平的各低表达组的生存率均显著明显高于其高表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外周血sCTLA-4、sPD-L1及Ki-67在晚期卵巢癌中呈高表达水平,与晚期卵巢癌患者的预后生存质量有密切联系。

1型糖尿病患者外周Treg细胞亚群频率及Helios、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4分子表型分析

目的探讨1型糖尿病患者外周血单个核细胞（PBMC）中CD4调节性T细胞（Treg）及其亚群频率和其表达Helios、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）分子的变化情况。 方法选取2016年4月至2017年4月在南京医科大学第一附属医院内分泌科就诊的40例T1DM患者为研究对象（T1DM组），同期医院体检健康人群67名作为对照组。密度梯度离心法分离出PBMC。以CD25和FoxP3标记CD4 Tregs （FoxP3＋CD25＋），以CD45RA及FoxP3标记区分Treg细胞亚群（初始型nTreg，CD45RA＋FoxP3＋；激活型aTreg，CD45RA-FoxP3hi；分泌型sTreg，CD45RA-FoxP3＋），并进一步标记Treg各亚群中Helios及CTLA-4分子，行多色流式细胞术检测。用双侧未配对t检验分析两组之间的差异情况。 结果与健康对照组相比，1型糖尿病组PBMC中的总Treg细胞及其亚群（nTreg、aTreg及sTreg）占CD4 T细胞的频率差异均无统计学意义（t=0.109 5~0.575 0，均P〉0.05），并且两组间nTreg、aTreg及sTreg亚群占总Treg细胞的频率差异亦无统计学意义（t=0.143 8~0.272 3，均P〉0.05）。进一步研究发现，Helios分子在两组间Treg细胞及其亚群（nTreg、aTreg及sTreg）上表达无统计学差异（t=0.178 4~1.124 0，均P〉0.05）。但1型糖尿病组总Treg及sTreg、nTreg细胞亚群CTLA-4分子的表达均显著减少，差异有统计学意义（t=2.662~3.435，均P〈0.05），而该分子在aTreg亚群的表达差异无统计学意义（t=1.728，P=0.0887，P〉0.05）。 结论本研究人群中，1型糖尿病患者PBMC中CD4 Treg及其亚群未发现频率的显著变化，但sTreg及nTreg细胞亚群抑制性表型CTLA-4表达下调，这可能是导致1型糖尿病患者Treg细胞抑制功能下降的原因之一。

系统性红斑狼疮患者程序性死亡因子-1和细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4水平

目的分析程序性死亡因子-1(PD-1)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的水平。方法收集2015年6月至2016年3月在我院初诊为SLE的56例患者作为观察组,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)标准将所有患者分为两组,稳定期组(28例)和活动期组(28例)。另选取同期在我院接受体检的28名健康志愿者作为对照组。采用流式细胞仪检测空腹静脉血的CD4+T及CD8+T淋巴细胞上的PD-1及CTLA-4表达。结果与对照组比较,稳定期和活动期SLE的CD4+PD-1+T淋巴细胞(4.46%±0.95%vs.2.93%±0.84%,t=6.38,P<0.001;5.92%±0.86%vs.2.93%±0.84%,t=13.16,P<0.001)和CD8+PD-1+T淋巴细胞(6.57%±0.89%vs.3.31%±0.84%,t=14.10,P<0.001;7.37%±0.97%vs.3.31%±0.84%,t=16.74,P<0.001)明显增高;稳定期和活动期SLE的CD4+CTLA-4+T淋巴细胞(1.03%±0.38%vs.1.34%±0.47%,t=2.68,P=0.01;0.73%±0.36%vs.1.34%±0.47%,t=5.38,P<0.001)及CD8+CTLA-4+T淋巴细胞百分比(0.35%±0.32%vs.0.69%±0.31%,t=4.04,P<0.001;0.13%±0.12%vs.0.69%±0.31%,t=8.91,P<0.001)明显降低。与稳定期SLE比,活动期SLE的CD4+PD-1+T淋巴细胞(t=6.03,P<0.001)及CD8+PD-1+T淋巴细胞百分比(t=3.22,P=0.003)明显增高,CD4+CTLA-4+T淋巴细胞(t=3.03,P=0.01)及CD8+CTLA-4+T淋巴细胞百分比(t=3.41,P=0.002)明显降低。CD4+PD-1+的表达与CD4+CTLA-4+(r=-0.85,P<0.001)、CD8+PD-1+的表达与CD8+CTLA-4+呈负相关性(r=-0.78,P<0.001)。结论 PD-1和CTLA-4参与SLE的发生发展过程,可能通过一定途径抑制PD-1或增高CTLA-4的表达有望成为SLE的新治疗靶点。

CD28-B7共刺激通路对外周血单个核细胞移植治疗重症肌无力的作用

背景:有研究表明,CD28-B7共刺激通路与重症肌无力的发生密切相关,但在干细胞移植治疗重症肌无力过程中的作用机制至今少有报道。目的:观察CD28-B7共刺激通路在重症肌无力大鼠模型中的表达情况。方法:40只雌性Lewis大鼠等分为正常组、模型组、佐剂组和移植组。后3组大鼠腹腔注射重症肌无力患者血清制备重症肌无力模型。移植组大鼠连续5d皮下注射粒细胞集落刺激因子10μg/(kg?d)动员骨髓中造血干细胞进入外周血,颈动脉采血10mL,分离获得单个核细胞,加入适量生理盐水调节核细胞浓度至2×109L-1;环磷酰胺50mg/kg于移植前第4,3,2天从尾静脉注入,1次/d,移植当天用胰岛素注射针吸取单个核细胞自尾静脉注入,移植成功。佐剂组给予等量生理盐水和环磷酰胺。结果与结论:移植组大鼠血清抗乙酰胆碱受体滴度、CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4、B7.1及B7.2的表达均显著低于模型组(P<0.01);模型组和移植组大鼠血清抗乙酰胆碱受体滴度滴度与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4呈正相关(r=0.236,P=0.001和r=0.215,P=0.013);移植组大鼠Lennon评分显著低于模型组(P<0.01)。提示干细胞移植可以通过抑制CD28-B7共刺激信号通路以调节机体的免疫系统。

柴胡皂苷d对自身免疫性肝炎小鼠差异表达基因CTLA-4、IL-10和IL-17的影响

目的·选用Agilent-085631芯片筛选自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠差异表达基因,并观察柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SS-d)对部分差异表达基因的影响,探讨SS-d治疗AIH的作用机制。方法·健康雄性SPF级C57BL/6小鼠40只,分为芯片组(n=8)和SS-d治疗机制组(n=32)。芯片组分为正常组和模型组[按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)](每组n=4),12 h后处死,进行肝脏差异表达基因的筛选,并采用q RT-PCR技术对部分基因进行验证。SS-d治疗机制组分为正常组、模型组(处理同芯片组)、SS-d低剂量组和SS-d高剂量组(参照文献及预实验结果,分别按2.5和5.0 mg/kg剂量腹腔注射SS-d,8 h后按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)(每组n=8)。12 h后收集小鼠静脉血及肝脏总蛋白、总RNA,采用ELISA法检测血清谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)及白介素(interleukin,IL)-10、IL-17的含量,Western blotting检测细胞毒T淋巴细胞相关抗原(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen,CTLA)-4蛋白的表达量,q RT-PCR技术检测IL-10、IL-17和CTLA-4 m RNA表达量。结果·共筛查差异表达基因11 512个(上调5 189个,下调6 323个),与138条信号通路相关;差异表达基因IL-10、IL-17及CTLA-4的q RT-PCR检测结果与芯片筛查结果一致。与正常组比较:模型组小鼠血清GPT、GOT含量升高;IL-17 m RNA表达量升高,IL-10 mRNA和CTLA-4 mRNA表达量降低;血清IL-17含量升高,血清IL-10含量降低,肝组织CTLA-4蛋白表达量降低。与模型组比较:SS-d低剂量组和SS-d高剂量组小鼠血清GPT、GOT含量降低;IL-17 mRNA表达量降低,IL-10 mRNA和CTLA-4 mRNA表达量升高;血清IL-17含量降低,血清IL-10含量升高,肝组织CTLA-4蛋白表达量升高。结论·多条信号通路参与AIH的发病,而SS-d可通过调节IL-10、CTLA-4、IL-17的表达,改善AIH小鼠肝脏炎症反应。