应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究细菌性血流感染的血清多肽指纹图谱

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)分析金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌引起的血流感染血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型。方法建立ICR小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer生物软件分析研究金葡菌感染组与正常对照组、大肠埃希菌感染组与正常对照组间血清多肽指纹图谱。结果比较金葡菌感染组与正常对照组发现,表达上调的多肽有6个,表达下调的多肽有7个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。比较大肠埃希感染组与正常对照组发现,表达下调的多肽有5个,表达呈先下调后上调的多肽有4个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。结论利用MALDI-TOF MS技术和Bio Explorer软件研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与正常对照组间的差异多肽并有效地建立这两种细菌感染的诊断模型,对于细菌性血流感染的诊断具有一定的价值。

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究白色念珠菌血流感染的血清多肽指纹图谱

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析白色念珠菌所致血流感染的血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型。方法建立ICR小鼠白色念珠菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer软件分析白色念珠菌感染与正常对照组的血清多肽指纹图谱,同时分析大肠埃希菌感染组、金黄色葡萄球菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱。结果比较白色念珠菌感染组和正常对照组共得到135个多肽峰,其中表达上调的多肽有5个,表达下调的多肽有6个,表达呈先上调后下调的多肽有7个,组合m/z 1610.9、1742.3、2666.4、2778.0、3345.1、4528.8这6个峰建立诊断模型,该模型区分白色念珠菌感染的正确率为80.0%。综合比较大肠埃希菌感染组、金葡菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱发现,有5个多肽峰在感染组中共同出现,分别为m/z 1513.8、2910.8、3538.1、3884.9和5007.3。结论利用MALDI-TOF MS可有效区分白色念珠菌感染和正常血清的多肽峰,同时感染中共同出现的多肽峰有望成为辅助诊断血流感染的标志物,通过建立相应的诊断模型能早期辅助诊断真菌性血流感染,为临床合理用药及标志物寻找提供依据。

小鼠屎肠球菌血流感染的血清多肽质谱分析

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析屎肠球菌血流感染后不同时间点小鼠的血清多肽指纹图谱,筛选差异多肽峰,建立相应的诊断模型并寻找新的标志物。方法 90只ICR小鼠分为对照组(10只)与感染组(80只)。其中,对照组注射无菌磷酸缓冲盐溶液(PBS),感染组注射1/2 LD50的菌液,注射量均为0.1 ml/10 g,分别于8个时间点(感染后1、3、6、12、24、48、96、128 h)收集血液标本检测白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6水平。收集血清标本,经弱阳离子磁珠纯化后,行MALDI-TOF MS检测,并采用BioExplorer软件分析屎肠球菌感染组与对照组的血清多肽指纹图谱。应用纳米液相色谱-电喷雾电离-串联质谱对候选多肽氨基酸序列进行鉴定。结果与对照组相比,感染组小鼠精神萎靡,活动减少;其血液中IL-1α含量呈下降趋势,IL-1β和IL-6呈上升趋势。分析多肽指纹图谱,共检测到102个血清多肽峰,以感染组与对照组含量相差5倍为基准筛选出了8个感染组高于对照组的多肽(P<0.01),9个感染组低于对照组的多肽(P<0.01)。以m/z分别为1227.4、1512.9、4509.7、5007.3、7816.7的5个多肽峰建立的诊断模型准确率为80.0%,特异性为76.6%,敏感性为83.3%。经二级质谱鉴定:m/z 1227.4为β2-微球蛋白,m/z5007.3为补体C3。结论利用MALDI-TOF MS技术和BioExplorer软件研究屎肠球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与对照组间的差异多肽,并有效地建立细菌感染的诊断模型。β2-微球蛋白和补体C3有望成为新的用于辅助诊断细菌性血流感染的标志物。

应用MALDI-TOF-MS技术分析HIV感染者血清多肽变化

目的用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 （matrix-assisted laser desorption/ionization ti me offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）技术,分析艾滋病病毒（HIV）感染者和健康人血清多肽图谱的变化。方法选取20例HIV感染者、24例健康对照者的血清,经Zipplate C18层析预分离后,运用MALDI-TOF-MS分析检测,获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,并用SPSS 13.0软件对数据进行分析。随后,用质谱串联技术（MS/MS）对两个差异表达显著的多肽峰测定肽序列,在SWISS-PROT数据库进行多肽鉴定。结果在分子量为800~4 000D范围内,共发现500个多肽峰,其中11个多肽峰在HIV感染者组、正常对照组中表达均有显著差异（P〈0.05）,5个差异多肽在HIV感染者组中表达上调（m/z 1 418.67、1 465.67、1 777.82、1 864.82和2 080.23）,6个差异多肽在HIV感染者组中表达下调（m/z 904.71、920.73、1 076.73、1 521.79、1 552.75和2 080.78）;经质谱串联技术对两个表达显著差异的多肽峰测定肽序列,鉴定结果分别是纤维蛋白多肽（Fibrino-peptide）、激肽原（Kininogen processor）。结论HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱有显著差异,通过多肽指纹图谱找到的HIV相关多肽,为今后开发HIV诊断试剂和治疗药物,提供科学依据。

飞行时间质谱技术在HIV诊断应用性研究

〔目的〕用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)技术分析HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,建立HIV血清多肽指纹图谱诊断模型并探究其临床价值。〔方法〕选取的血清样本经Zip Tip C18层析预分离,运用MALDI TOF MS分析检测,获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱,用SPSS13.0软件对数据进行分析,建立诊断模型。〔结果〕在分子量为800～4000Da范围内,共发现500个多肽峰,其中11个多肽峰在HIV感染组、正常对照组中表达均有显著差异(P<0.05),5个在HIV感染组中表达上调(m/z1418.67,1465.67,1777.82,1864.82和2080.23),6个在HIV感染组中表达下调(m/z904.71,920.73,1076.73,1521.79,1552.75和2080.78);(m/z2080.78+2080.23+1777.82+1465.67)组合的P<0.05,回归系数、相对危险度都比较理想,其ROC曲线下面积是1.0,以此建立了HIV血清多肽指纹图谱诊断模型。〔结论〕本研究建立的诊断模型可以有效区分HIV感染者和健康人,为HIV的诊断与筛查提供了一条崭新途径。

职业性三氯乙烯药疹样皮炎诊断模型的建立

目的应用弱阳离子交换磁珠（magneticbeadsbasedweakcationexchangechromatography，MB—WCX）、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix—assistedlaserdesorptionionizationtime—of-flightmassspectrometry，MALDI—TOF—MS）和ClinProTools生物信息学方法检测职业性三氯乙烯药疹样皮炎（occupationalmedicamentosa—likedermatitisinducedbytrichlor（1ethylene，OMLDT）患者的血清多肽指纹图谱，建立OMLDT诊断模型。方法收集2009年12月至2010年10月经深圳市职业病防治院诊断的OMLDT患者和对照人群血清样品各28份，选取其中的患者和对照人群血清样品各14份作为建模组，采用MB—WCX联合MALDI—TOF—MS技术检测血清多肽指纹图谱，筛选OMLDT特征性多肽标志并建立OMLDT疾病蛋白质组学诊断模型。用其余的14份患者和14份对照人群的血清样作为验证组，评价模型的准确度和识别率。结果应用ClinProTools软件，共得到159个峰，33个为有统计学意义的峰（P〈0．05）。其中，相对于对照组，建模组的病例组中有20个峰表达降低，有13个表达增高。采用监督神经网络算法（supervisedneuralnetworkalgorithm，SNN）对多肽峰进行筛选，质荷比（m／z）为2106．29和3263．78的2个多肽峰受试者工作特征曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC）的下面积（TheareaundertheROCcurve，AUC）最接近1，最能区分病例组和对照组，2D分布图上也能明显区分，选择这2个多肽峰构建OMLDT的诊断模型。诊断模型的交叉验证和识别能力分别是87．5％和98．5％，灵敏度和特异度分别为84．8％和82．1％。结论应用MB—WCX、MALDI—TOF—MS技术结合ClinProTools软件首次对OMLDT建立诊断模型并验证，筛选到了特异性差异多肽，具备较高的灵敏度和特异度，为临床早期诊断提供了科学依据。