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利用噬菌体抗体库筛选U251细胞血清应答基因蛋白特异抗体 被引量:1
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作者 余敏 谭德勇 +2 位作者 钱伟 赖建华 孙桂林 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期356-360,共5页
利用噬菌体表面展示抗体库对不同血清处理U2 5 1细胞吸附的抗体进行差异筛选 ,筛选获得血清饥饿细胞吸附的阳性噬菌体克隆 96个和血清饥饿后恢复血清培养细胞吸附的阳性噬菌体克隆 82个。细胞免疫组化检测发现应答反应差异较大的抗体 2... 利用噬菌体表面展示抗体库对不同血清处理U2 5 1细胞吸附的抗体进行差异筛选 ,筛选获得血清饥饿细胞吸附的阳性噬菌体克隆 96个和血清饥饿后恢复血清培养细胞吸附的阳性噬菌体克隆 82个。细胞免疫组化检测发现应答反应差异较大的抗体 2个 ,即血清饥饿培养细胞特异反应的抗体 1个 (11号抗体 )和血清饥饿后恢复血清培养细胞特异反应的抗体 1个 (2号抗体 ) ,其中 2号抗体在恢复血清培养细胞中的应答反应强于血清饥饿培养细胞 ,是一个血清应答基因蛋白特异抗体 ,且在血清饥饿后恢复血清培养不同时间的U2 5 1细胞中具有一定的特异性反应。该研究为寻找与细胞周期调控有关的因子奠定了基础 ,同时对肿瘤的诊断和治疗研究也有重要意义。 展开更多
关键词 噬菌体抗体 U251细胞 血清应答基因蛋白特异抗体
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变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋实验研究:唾液和血清抗体水平测定 被引量:5
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作者 杨德琴 刘天佳 +2 位作者 曹福娴 杨锦波 刘建国 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期396-399,共4页
目的 将基因疫苗pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠 ,观察唾液和血清抗体的变化 ,证实基因疫苗的免疫原性。方法  36只Wistar大鼠分为 6个免疫组 :pcDNA3_pac ,pcDNA3_gtfB ,pcDNA3_pac联合pcDNA3_gtfB ,阳性对照灭活变... 目的 将基因疫苗pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠 ,观察唾液和血清抗体的变化 ,证实基因疫苗的免疫原性。方法  36只Wistar大鼠分为 6个免疫组 :pcDNA3_pac ,pcDNA3_gtfB ,pcDNA3_pac联合pcDNA3_gtfB ,阳性对照灭活变形链球菌 ,阴性对照pcDNA3及PBS液组。建立龋攻击定菌鼠模型 3个月 ,各组大鼠均以 10 0 μg剂量免疫定菌鼠 3次 ,ELISA法检测唾液SIgA和血清IgG水平。 结果 疫苗组在首次免疫后第 33天(第 5周 )都出现较高水平的唾液SIgA ,在第 75天 (第 11周 )后达最高水平 ,并持续至实验结束。成组单因素方差分析唾液SIgA水平在总体上各实验组间存在差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,q检验分析在联合免疫组和全菌细胞组最高 ,单基因疫苗免疫组次之 ,pcDNA3与PBS组最低 ;血清IgG水平在 4个免疫组之间没有差异 (P >0 0 5 ) ,但都高于空白及阴性对照组 (P <0 0 5 )。结论 pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB腺周途径免疫定菌Wistar大鼠 ,能有效诱导唾液SIgA和血清IgG抗体产生 。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白 葡糖基转移酶 基因疫苗 免疫 龋病 实验 唾液 血清 抗体 测定
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载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块面积与血清抗氧化低密度脂蛋白的抗体水平(英文) 被引量:1
3
作者 唐志红 夏敏 +2 位作者 朱惠莲 马静 凌文华 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第15期217-219,共3页
背景:低密度脂蛋白的氧化是动脉粥样硬化发生和发展过程中关键的影响因素,血清抗氧化低密度脂蛋白抗体的检测方法对动脉粥样硬化斑块的评估价值如何?目的:探讨载脂蛋白E基因缺陷小鼠血清抗氧化低密度脂蛋白抗体的检测方法,并分析血清抗... 背景:低密度脂蛋白的氧化是动脉粥样硬化发生和发展过程中关键的影响因素,血清抗氧化低密度脂蛋白抗体的检测方法对动脉粥样硬化斑块的评估价值如何?目的:探讨载脂蛋白E基因缺陷小鼠血清抗氧化低密度脂蛋白抗体的检测方法,并分析血清抗氧化低密度脂蛋白抗体水平对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块面积的评估价值。设计:单因素方差分析(分组对照实验)。单位:一所大学的营养与代谢性疾病实验室。对象:apoE基因缺陷小鼠作为阳性组(品系C57BL/6J,n=15),正常小鼠作为对照组(品系C57BL/6J,n=15)。干预:两组实验小鼠在层流架中分笼喂养,自由饮水摄食,16周后自小鼠眼眶静脉采血,分离小鼠血清。分离载脂蛋白E基因缺陷小鼠和正常小鼠血清,用酶联免疫吸附法检测血清氧化低密度脂蛋白抗体水平;用油红O染色法和图像分析法测量小鼠动脉粥样硬化斑块面积。主要观察指标:载脂蛋白E基因缺陷小鼠和正常小鼠小鼠氧化低密度脂蛋白的水平和动脉粥样斑块面积。结果:apoE基因缺陷小鼠血清抗氧化低密度脂蛋白的水平显著高于正常小鼠的水平(0.079±0.028)%,(0.012±0.001)%,F=10.666,P<0.01;载脂蛋白E基因缺陷小鼠的动脉粥样硬化斑块面积(26.25±9.20)%也显著高于正常小鼠(0%),且二者之间呈显著性相关,r=0.638,P<0.01。 展开更多
关键词 载脂蛋白E 抗体水平 抗氧化低密度脂蛋白抗体 C57BL/6J 动脉粥样斑块面积 APOE基因缺陷小鼠 动脉粥样硬化斑块 单因素方差分析 酶联免疫吸附法 小鼠血清 正常小鼠 油红O染色法 评估价值 检测方法 代谢性疾病 图像分析法
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抗人乙酰胆碱受体单链抗体融合人血清白蛋白基因的构建
4
作者 范华英 齐栋 +5 位作者 李辉 金桂花 李红花 魏成淑 李英信 孟繁平 《延边大学医学学报》 CAS 2004年第1期9-12,共4页
[目的 ]提高抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 (ScFv)的稳定性 ,构建单链抗体 人血清白蛋白 (HSA)融合基因 .[方法 ]应用聚合酶链反应扩增人血清白蛋白基因 ,并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体单链抗体 (ScFv6 37)的载体pHEN 2 (pHEN ... [目的 ]提高抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 (ScFv)的稳定性 ,构建单链抗体 人血清白蛋白 (HSA)融合基因 .[方法 ]应用聚合酶链反应扩增人血清白蛋白基因 ,并克隆到含有抗人乙酰胆碱受体单链抗体 (ScFv6 37)的载体pHEN 2 (pHEN 2 ScFv6 37)上 .将重组质粒 pHEN 2 ScFv6 37 HSA转化至大肠杆菌 (E .coliDH 5α)中 ,分离提纯重组质粒后再经酶切、琼脂糖凝胶电泳检查以确认融合基因的正确性 .[结果 ]电泳检查发现了大小分别为 1770bp和 70 5 4bp的人血清白蛋白基因和融合基因 ,且发现位置正确 .[结论 ]成功地构建了单链抗体ScFv6 37与人血清白蛋白融合基因 . 展开更多
关键词 重症肌无力 抗人乙酰胆碱受体 单链抗体 血清蛋白 融合基因
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血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备
5
作者 罗昕雨 赵磊 +5 位作者 陈玉晴 缪欣怡 石家鑫 顾有方 李文超 刘欣超 《安徽科技学院学报》 2024年第2期25-30,共6页
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,... 目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 Fiber-1基因 重组蛋白 多克隆抗体
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宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测 被引量:5
6
作者 高艳娥 郭金珠 +2 位作者 张菊 宋天保 阎小君 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1374-1379,共6页
背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相... 背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16E6血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E6基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用异丙基硫代-$-D-半乳糖苷(isopropylthio-$-D-galactoside,IPTG)诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被ELISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体。同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPVDNA。结果:pRSET-16E6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr24×103的HPV16E6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%。表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率显著高于正常人(P<0.002)及慢性宫颈炎患者(P<0.01),而正常人与慢性宫颈炎患者间的差异无显著性。32例宫颈癌患者癌组织中,HPVDNA阳性率90.6%,HPV16DNA阳性率46.9%。HPV16DNA阳性组血清HPV16E6抗体阳性率(46.7%)高于阴性组(17.6%),但两组间的差异无显著性(P>0.05)。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16E6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 E6蛋白 基因表达 血清抗体 宫颈肿瘤
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抗紫红笛鲷血清免疫球蛋白单克隆抗体的制备 被引量:6
7
作者 冯娟 胡超群 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期14-21,共8页
采用蛋白A sephrose亲和层析法,分离提纯了紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus的血清免疫球蛋白(Ig),并制备了抗紫红笛鲷血清Ig分子的单克隆抗体。经间接ELISA、免疫印迹(westernblotting)的检测和鉴定,得到抗紫红笛鲷Ig分子重链的单抗6... 采用蛋白A sephrose亲和层析法,分离提纯了紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus的血清免疫球蛋白(Ig),并制备了抗紫红笛鲷血清Ig分子的单克隆抗体。经间接ELISA、免疫印迹(westernblotting)的检测和鉴定,得到抗紫红笛鲷Ig分子重链的单抗6株,分别为IgG11株、IgG23株、IgG2a1株、IgG31株。这6株抗紫红笛鲷Ig的单抗各有1株与同为鲈形目的青石斑鱼Epinephelusawoara和尖吻鲈Latescalcarifer的Ig分子有很弱的交叉反应,而同鲽形目的牙鲆Paralichthysolivaceus的Ig分子没有交叉反应,具有较强的种间特异性;同时揭示,同目不同属的鱼类血清Ig之间的相似度较低,不同目之间的相似度极低。 展开更多
关键词 血清 紫红笛鲷 免疫球蛋白 单克隆抗体 海水鱼疾病 免疫应答机制 免疫防治
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冠心病患者血清抗氧化低密度脂蛋白抗体的临床意义 被引量:2
8
作者 冯忠军 金玉怀 +1 位作者 戴华 张金华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期796-797,共2页
关键词 冠心病 血清 抗氧化低密度脂蛋白抗体 病理 免疫应答反应 统计学处理
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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 DNA与改良痘苗病毒组合疫苗诱导小鼠抗体应答 被引量:3
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作者 李淑梅 李珣 +4 位作者 薛采芳 缪军 雷俊川 刘忠湘 王宪锋 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期93-96,共4页
目的探索DNA与改良痘苗病毒(MVA)组合免疫对增强恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)抗体应答的作用。方法以人工合成MSP1全基因为基础分别构建DNA免疫质粒VR1020/190和重组MVA,单用VR1020/190或与表达质粒GM-CSF共同对小鼠进行初始免疫后... 目的探索DNA与改良痘苗病毒(MVA)组合免疫对增强恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)抗体应答的作用。方法以人工合成MSP1全基因为基础分别构建DNA免疫质粒VR1020/190和重组MVA,单用VR1020/190或与表达质粒GM-CSF共同对小鼠进行初始免疫后,用重组病毒追加强化,采用DNA/MVA组合方案免疫BALB/c小鼠,ELISA测定血清IgG及其亚类水平,经腹腔接种转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19进行攻击。结果DNA免疫能有效诱导小鼠产生抗MSP1-190抗体,其终点稀释度为1∶2500,GM-CSF质粒共免疫组抗体的终点稀释度为1∶11150,抗体亚类的测定表明GM-CSF质粒显著促进了IgG1类抗体应答,MVA追加可使单独免疫组和共免疫组抗体分别增加53和10倍;两实验组产生了水平相近的抗19000抗体(1∶32000),其含量占血清中MSP1总IgG的1/4-1/3。经转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19攻击后小鼠的存活时间并没有明显延长(P>0.05)。结论采用合成MSP1全基因进行DNA/MVA组合免疫可诱导小鼠产生显著的抗体应答,抗体的详细特性和保护作用正在进一步研究中。 展开更多
关键词 恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 抗体应答 痘苗病毒 疫苗诱导 组合 改良 BALB/c小鼠 ELISA测定 DNA免疫 伯氏疟原虫 MSP1 血清IgG MVA CSF 免疫组 人工合成 表达质粒 重组病毒 IgG1 抗体亚类 总IgG 存活时间 MSPI 保护作用
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基因工程人抗角蛋白抗体在角质形成细胞内的反应定位
10
作者 卢宁 王刚 +4 位作者 刘玉峰 李承新 李巍 张海龙 赵小东 《中国麻风皮肤病杂志》 2005年第4期249-251,共3页
目的:探索一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在培养的角质形成细胞内的反应定位。方法:利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达出Fab抗体,纯化鉴定后将该抗体作用于培养的人角质形成细胞... 目的:探索一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在培养的角质形成细胞内的反应定位。方法:利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达出Fab抗体,纯化鉴定后将该抗体作用于培养的人角质形成细胞,在不同浓度和不同的作用时间应用免疫荧光细胞染色法及共聚焦显微镜观察该抗体在角质形成细胞内的反应定位,同时以基因工程抗HBsAg人Fab和1%BSA为对照。结果:基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体作用于角质形成细胞的胞浆,呈明显的绿色荧光,着色均匀,细胞核未见着色,两种对照均未见着色。结论:基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体,可与培养状态下的角质形成细胞胞浆中其特异性的抗原相结合,这为其临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 基因工程 反应定位 细胞内 抗角蛋白抗体 FAB抗体 人角质形成细胞 噬菌体抗体 抗HBSAG Fab片段 细胞染色法 其临床应用 人源性 大肠杆菌 质粒转化 特异表达 定位方法 诱导表达 纯化鉴定 微镜观察 免疫荧光 作用时间 不同浓度
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血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量:6
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作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页
【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒(FAdV-4) Fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting
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蒿甲醚预防日本血吸虫病诱导的兔特异抗体相关靶抗原编码基因的筛选
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作者 朱传刚 林矫矫 陈建秀 《热带病与寄生虫学》 2004年第4期205-208,F003,共5页
目的寻找应用蒿甲醚预防血吸虫后,引起免疫保护作用的抗原分子,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法感染血吸虫7天后的家免口服蒿甲醚,收集血清,用蒿甲醚预防后的免疫免血清筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)成虫 cDNA 文... 目的寻找应用蒿甲醚预防血吸虫后,引起免疫保护作用的抗原分子,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法感染血吸虫7天后的家免口服蒿甲醚,收集血清,用蒿甲醚预防后的免疫免血清筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)成虫 cDNA 文库,并对阳性克隆的插入基因片段进行 PCR 扩增及测序分析。结果经三轮筛选,获8个阳性克隆。测序分折所获的这8个序列,其中5个序列分别与日本血吸虫三磷酸甘油醛脱氢酶基因(Sj GAPDH)基因同源,其余3个序列为日本血吸虫28kD 谷胱甘肽-S-转移酶(Sj.GST)基因。结论 Sj.GAPDH 和 Sj.28kDGST 可能是蒿甲醚杀伤血吸虫后,引起对再感染起免疫保护作用的抗原分子。 展开更多
关键词 蒿甲醚 日本血吸虫病 编码基因 特异抗体 预防 谷胱甘肽-S-转移酶 靶抗原 成虫CDNA文库 免疫保护作用 相关 醛脱氢酶基因 抗原分子 测序分析 阳性克隆 感染血吸虫 PCR扩增 GAPDH 候选抗原 疫苗研究 血清筛选 基因片段
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拟南芥乙烯应答基因HLS1的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 郭佳 郁品泽 +1 位作者 贾敏 郁飞 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第7期141-147,共7页
【目的】制备乙烯应答基因HLS1多克隆抗体,在过表达植物中检测HLS1的积累,为深入研究HLS1响应乙烯信号通路的分子机制奠定基础。【方法】构建pET28a-HLS1c原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱... 【目的】制备乙烯应答基因HLS1多克隆抗体,在过表达植物中检测HLS1的积累,为深入研究HLS1响应乙烯信号通路的分子机制奠定基础。【方法】构建pET28a-HLS1c原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导获得重组蛋白HLS1c-His;镍柱亲和纯化重组蛋白后免疫家兔获得抗HLS1血清,利用抗原亲和纯化抗血清获得高纯度的HLS1多克隆抗体;用HLS1抗体和GFP抗体,检测原生质体瞬时转化体系中GFP-HLS1c融合蛋白的表达;用农杆菌蘸花法获得过表达GFP-HLS1g的转基因植物,用HLS1抗体和GFP抗体检测GFP-HLS1g融合蛋白的表达。【结果】成功构建了原核表达载体pET28a-HLS1c,并在大肠杆菌系统中诱导获得重组蛋白HLS1c-His,且多以包涵体形式存在。纯化的HLS1c-His多克隆抗体,能清晰检测到约80 ng原核表达的HLS1抗原。纯化的HLS1抗体不仅能检测到原生质体中瞬时表达的GFP-HLS1c融合蛋白,也能检测到过表达转基因植物株系中的GFP-HLS1g融合蛋白,并且与标签蛋白GFP对应抗体所检测到的特异性条带大小一致。【结论】成功制备了拟南芥HLS1蛋白多克隆抗体,为HLS1蛋白在植物发育中的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乙烯应答基因 拟南芥 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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赤霉病菌特异抗体-防御素融合蛋白的表达和功能鉴定
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作者 秦春圃 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期10-10,共1页
华中农业大学生命科学技术学院刘春雷,该校植物科技学院廖玉才,张静柏等科研专家选择对赤霉病菌具有高度特异性和亲和力的单链抗体,用它与植物防御素构建成融合蛋白基因,再将融合蛋白及防御素基因分别与细菌表达载体pGEX和植物表达... 华中农业大学生命科学技术学院刘春雷,该校植物科技学院廖玉才,张静柏等科研专家选择对赤霉病菌具有高度特异性和亲和力的单链抗体,用它与植物防御素构建成融合蛋白基因,再将融合蛋白及防御素基因分别与细菌表达载体pGEX和植物表达载体pMBIA构建成重组载体。 展开更多
关键词 融合蛋白基因 植物防御素 赤霉病菌 功能鉴定 特异抗体 植物表达载体 GST融合蛋白 生命科学技术
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血清结核菌素纯蛋白衍化物抗体测定的价值
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作者 郑华荣 杨耀孙 +1 位作者 朱惠珍 张英史 《上海预防医学》 CAS 1996年第3期123-124,共2页
血清结核菌素纯蛋白衍化物抗体测定的价值郑华荣,杨耀孙,朱惠珍,张英史结核杆菌抗原进入体内激发机体产生相应抗体[1],为了解该抗体的质和量在临床疾病诊断中的价值,我们试用人型结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)为抗原,以BA... 血清结核菌素纯蛋白衍化物抗体测定的价值郑华荣,杨耀孙,朱惠珍,张英史结核杆菌抗原进入体内激发机体产生相应抗体[1],为了解该抗体的质和量在临床疾病诊断中的价值,我们试用人型结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)为抗原,以BA-ELISA测肺结核及肺外结核病人... 展开更多
关键词 结核菌素纯蛋白衍化物 抗体测定 抗体 呼吸系疾病 血清结核抗体 阳性率 特异抗体 肺结核病人 肺外结核 抑制因子
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B型脑脊髓膜炎患者恢复过程中的孔蛋白A特异性抗体亲和力
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作者 Vermont C.L. Van Dijken H.H. +2 位作者 De Groot R. Van Den Dobbelsteen G.P.J.M. 高蕊 《世界核心医学期刊文摘(儿科学分册)》 2006年第1期53-54,共2页
Porin A (PorA), which determines the serosubtype of Neisseria meningitidis, is the main antigen of a candidate vaccine against serogroup B meningococci,which has been shown to induce high-avidity antibodies in childre... Porin A (PorA), which determines the serosubtype of Neisseria meningitidis, is the main antigen of a candidate vaccine against serogroup B meningococci,which has been shown to induce high-avidity antibodies in children. We characterized the immune response of children after convalescing from meningococcal infection with a serosubtype P1.7-2,4 strain. Acute-and convalescent-phase sera of 21 c hildren with meningococcal septic shock caused by strains with PorA subtype P 1. 7-2,4 were collected. The serum bactericidal antibody titers, IgG isotype distr ibution, and antibody avidity were measured. We determined whether the differenc es in avidity of anti-outermembrane vesicle antibodies were PorA specific. Seru m bactericidal activity against H44/76 P 1.7-2,4 was < 4 in all convalescent sera. The IgG i sotype distribution of the convalescent sera was dominated by IgG1, followed by IgG3 , whereas no IgG2 or IgG4 was found. The geometric mean avidity index (GMAI ) of convalescent sera measured against a strain with the identical subtype as t he infective isolate was significantly higher than that against a strain with a heterologous PorA subtype or a PorA negative mutant strain (57 versus 35 and 23 %, respectively; p = 0.005 and p < 0.001). Geometric mean avidity titers were h ighest for P1.7-2,4, corresponding with the highest GMAI. The GMAI after invasi ve meningococcal disease was lower than after vaccination of healthy toddlers wi th a monovalent P1.7-2,4 outer membrane vesicle vaccine. 展开更多
关键词 脑脊髓膜炎 脑膜炎双球菌 恢复过程 蛋白亚型 抗体滴度 免疫应答 血清亚型 脓毒症性休克 免疫接种
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血清p53抗体检测对肺癌诊断价值的探讨 被引量:4
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作者 虞竞峰 宫玲玲 +2 位作者 肖华龙 张晓峰 薛一峰 《放射免疫学杂志》 CAS 2006年第3期254-255,共2页
关键词 血清P53抗体 P53基因突变 肺癌组织 诊断价值 抗体检测 突变型P53蛋白 恶性肿瘤 基因突变率 临床的应用 基因改变
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鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因克隆和序列分析 被引量:1
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作者 李妍妍 杨笛 +4 位作者 卞智萍 徐晋丹 陈相健 顾春荣 张寄南 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第9期785-787,共3页
目的:克隆鼠抗人cTnImAb Fab段基因并进行序列分析.方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI mAb的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析.结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800... 目的:克隆鼠抗人cTnImAb Fab段基因并进行序列分析.方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI mAb的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析.结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bp DNA片段.经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征.在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链).结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnImAb Fab段基因,为鼠抗人cTnI的人源化改造奠定了基础. 展开更多
关键词 抗体 单克隆 基因 序列分析 血清心肌钙蛋白
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胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测 被引量:9
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作者 吴晓江 王俞欠 季加孚 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期252-256,共5页
目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的... 目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达。ELISA方法检测抗NY ESO 1抗体。利用NY ESO 1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY ESO 1抗原物质。结果: 101例胃癌患者中, 74. 3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因。12例患者表达NY ESO 1mRNA, 5例可以检测到NY ESO 1抗原蛋白以及针对NY ESO 1抗原的体液免疫反应。结论: 胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE 3,SSX 4和NY ESO 1 /LAGE 1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY ESO 1蛋白的免疫原性得到验证。CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性。 展开更多
关键词 肿瘤/睾丸抗原 自身抗体检测 表达研究 自身体液免疫应答 T抗原基因 ELISA方法 肿瘤疫苗治疗 免疫组化方法 体液免疫反应 MAGE-3 多价肿瘤疫苗 CT抗原 胃癌患者 PCR方法 表达分布 肿瘤标本 抗原物质 组织切片 mRNA 抗原蛋白
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人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用 被引量:1
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作者 刘利新 刘树峰 +2 位作者 常乃柏 刘辉 王嵬 《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 2007年第3期362-367,共6页
mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式.细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除,以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动.其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用,但对其降解mRNA的详细作用机... mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式.细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除,以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动.其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用,但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少.到目前为止,尚没有该基因市售的抗体出现,阻碍了对该基因机理的研究.目的是利用PCR方法,从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因,制备其多克隆抗体血清.实验结果显示,通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体,用于Western Blotting试验,可以检测到该蛋白内源性的表达;用于激光共聚焦定位实验显示,该内源性蛋白定位在细胞核内;此抗体同时可用于免疫沉淀实验.因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得,为进一步研究该基因的功能创造了条件. 展开更多
关键词 Dcp2基因 多克隆抗体血清 蛋白印迹 免疫沉淀
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